टायलोसिनच्या परिमाणात्मक विश्लेषणासाठी स्पर्धात्मक एंझाइम इम्युनोसे किट
साठी स्पर्धात्मक एन्झाइम इम्युनोसे किट
चे परिमाणवाचक विश्लेषणटायलोसिन
1. पार्श्वभूमी
टायलोसिनएक मॅक्रोलाइड प्रतिजैविक आहे, जो मुख्यत्वे अँटीबैक्टीरियल आणि अँटी-मायकोप्लाझ्मा म्हणून वापरला जातो.कठोर MRLs स्थापित केले गेले आहेत कारण या औषधामुळे काही गटांमध्ये गंभीर दुष्परिणाम होऊ शकतात.
हे किट ELISA तंत्रज्ञानावर आधारित नवीन उत्पादन आहे, जे सामान्य वाद्य विश्लेषणाच्या तुलनेत जलद, सोपे, अचूक आणि संवेदनशील आहे आणि एका ऑपरेशनमध्ये फक्त 1.5 तास लागतात, ते ऑपरेशन त्रुटी आणि कामाची तीव्रता लक्षणीयरीत्या कमी करू शकते.
2. चाचणी तत्त्व
हे किट अप्रत्यक्ष-स्पर्धात्मक ELISA तंत्रज्ञानावर आधारित आहे.मायक्रोटायटर विहिरी कपलिंग प्रतिजनसह लेपित आहेत.नमुन्यातील टायलोसिन अवशेष प्रतिपिंडासाठी मायक्रोटायटर प्लेटवर लेपित प्रतिजनाशी स्पर्धा करतात.अँटीबॉडी लेबल असलेले एन्झाइम जोडल्यानंतर, रंग दर्शविण्यासाठी टीएमबी सब्सट्रेट वापरला जातो.नमुन्याचे शोषण हे त्यामध्ये असलेल्या टायलोसिनशी नकारात्मकरित्या संबंधित आहे, मानक वक्रशी तुलना केल्यानंतर, डायल्युशन घटकाने गुणाकार केल्यावर, नमुन्यातील टायलोसिन अवशेषांचे प्रमाण मोजले जाऊ शकते.
3. अनुप्रयोग
या किटचा वापर प्राण्यांच्या ऊतींमधील टायलोसिन अवशेषांच्या परिमाणात्मक आणि गुणात्मक विश्लेषणासाठी (कोंबडी, डुकराचे मांस, बदक) आणि दूध, मध, अंडी इ.
4. क्रॉस-प्रतिक्रिया
टायलोसिन ………………………………………………..100%
टिल्मिकोसिन ……………………………………………… 2%
5. आवश्यक साहित्य
५.१ उपकरणे:
----मायक्रोटायटर प्लेट स्पेक्ट्रोफोटोमीटर (450nm/630nm)
---- रोटरी बाष्पीभवक किंवा नायट्रोजन कोरडे साधने
----होमोजनायझर
---- शेकर
---- अपकेंद्रित्र
---- विश्लेषणात्मक शिल्लक (प्रेरण: 0.01 ग्रॅम)
----ग्रॅज्युएटेड विंदुक: 10ml
----रबर पिपेट बल्ब
---- व्हॉल्यूमेट्रिक फ्लास्क: 10 मिली
----पॉलीस्टीरिन सेंट्रीफ्यूज ट्यूब: 50 मिली
----मायक्रोपिपेट्स: 20-200ml, 100-1000ml
250 मिली-मल्टीपिपेट
5.2 अभिकर्मक:
----सोडियम हायड्रॉक्साइड (NaOH, AR)
----सोडियम बायकार्बोनेट (NaHCO3,AR)
---- सोडियम कार्बोनेट (NaCO3, AR)
---- ट्रायक्लोरोएसेटिक ऍसिड (एआर)
---- एसीटोनिट्रिल (एआर)
----इथिल एसीटेट (एआर)
┅┅n-Hexane (AR)
---- विआयनीकृत पाणी
6. किटचे घटक
l प्रतिजन सह लेपित 96 विहिरी असलेली मायक्रोटायटर प्लेट
l मानक उपाय (5 बाटल्या, 1 मिली/बाटली)
0ppb, 0.5ppb, 1.5ppb, 4.5ppb, 13.5ppb
l स्पाइकिंग मानक नियंत्रण: (1ml/बाटली)1ppm
l एन्झाइम संयुग्म 1 मिली ……………………………………… लाल टोपी
l अँटीबॉडी द्रावण 7 मिली ……………………….. हिरवी टोपी
l सोल्यूशन A 7 मिली ……………………………….. पांढरी टोपी
l सोल्यूशन B 7ml...………………………………..लाल टोपी
l स्टॉप सोल्यूशन 7 मिली.……………………….पिवळी टोपी
l 20×केंद्रित वॉश सोल्यूशन 40ml
………………………………………पारदर्शक टोपी
l 4×केंद्रित निष्कर्षण द्रावण 50ml
……………………………………………….निळी टोपी
7. अभिकर्मक तयार करणे:
उपाय १:0.1mol/L NaOH सोल्यूशन
0.4g NaOH ते 100ml डीआयोनाइज्ड पाण्याचे वजन करा आणि पूर्णपणे मिसळा.
उपाय 2: 1mol/L NaOH द्रावण
4g NaOH ते 100ml डीआयोनाइज्ड पाण्याचे वजन करा आणि पूर्णपणे मिसळा.
उपाय 3: कार्बोनेट बफर मीठ
उपाय1: 0.2M PB
51.6 ग्रॅम Na विरघळवा2HPO4· १२ ह2O, NaH चे 8.7 ग्रॅम2PO4· २ एच2डीआयोनाइज्ड पाण्याने ओ आणि 1000 मिली पातळ करा.
उपाय2: निष्कर्षण उपाय
2×केंद्रित निष्कर्षण द्रावण डीआयोनाइज्ड पाण्याने 1:1(च्या प्रमाणामध्ये पातळ करा.उदा. 2×एक्सट्रॅक्शन सोल्यूशनचे 10 मिली + डीआयोनाइज्ड पाणी 10 मिली), जे नमुना काढण्यासाठी वापरले जाईल,हे द्रावण 1 महिन्यासाठी 4℃ वर साठवले जाऊ शकते.
उपाय3: द्रावण धुवा
20×केंद्रित वॉश सोल्यूशन 1:19 (व्हॉल्यूम रेशो) मध्ये डीआयोनाइज्ड पाण्याने पातळ कराउदा. 20 × वॉश सोल्यूशनचे 5 मिली + डीआयोनाइज्ड पाणी 95 मिली), जे प्लेट्स धुण्यासाठी वापरले जाईल.हे द्रावण 1 महिन्यासाठी 4℃ वर साठवले जाऊ शकते.
8. नमुना तयारी
8.1 ऑपरेशनपूर्वी सूचना आणि खबरदारी:
(a) कृपया प्रयोगाच्या प्रक्रियेत एकेरी टिप्स वापरा आणि भिन्न अभिकर्मक शोषून घेत असताना टिपा बदला.
(b) सर्व उपकरणे स्वच्छ असल्याची खात्री करा.
(c) ऊतींचे नमुना फ्रीझमध्ये ठेवा.
(d) तयार केलेला नमुना एकाच वेळी तपासणीसाठी वापरावा.
8.2 प्राण्यांचे ऊतक (चिकन, डुकराचे मांस इ.)
---- होमोजेनायझरसह नमुना एकसंध करा;
----2.0±0.05g homogenate 50ml polystyrene सेंट्रीफ्यूज ट्यूबमध्ये घ्या;0.2M PB च्या 2ml जोडा (उपाय1) , विरघळण्यासाठी हलवा आणि नंतर 8 मिली इथाइल एसीटेट घाला आणि 3 मिनिटांसाठी जोरदारपणे हलवा;
----विभाजनासाठी अपकेंद्रित्र: 3000 ग्रॅम / सभोवतालचे तापमान / 5 मिनिटे.
----नायट्रोजन वायूच्या प्रवाहाखाली 50-60℃ पाण्याच्या आंघोळीने कोरड्या, 10ml काचेच्या नळीमध्ये 4ml सुपरनॅटंट ऑरगॅनिक फेजचे हस्तांतरण करा;
---- कोरडे उरलेले 1 मिली n-हेक्सेनसह विरघळवा, विरघळण्यासाठी 30s साठी भोवरा, आणि नंतर एक्सट्रॅक्शन सोल्यूशनचा 1 मिली घाला (उपाय2), 1 मिनिटासाठी भोवरा.पृथक्करणासाठी सेंट्रीफ्यूज: 3000 ग्रॅम / सभोवतालचे तापमान / 5 मिनिटे
----सुपरनॅटंट एन-हेक्सेन फेज काढा;परखण्यासाठी 50μl सब्सट्रेट जलीय टप्प्यात घ्या.
सौम्यता घटक: 1
8.2 दूध
---- 100μl कच्च्या दुधाचा नमुना घ्या, 900μl निष्कर्षण द्रावणात मिसळा (उपाय2), आणि पूर्णपणे मिसळा.
----परीक्षेसाठी तयार केलेले 50μl द्रावण घ्या.
सौम्यता घटक: 10
9. परख प्रक्रिया
9.1 परीक्षापूर्वी सूचना
९.१.१सर्व अभिकर्मक आणि मायक्रोवेल्स खोलीच्या तपमानावर (20-25℃) असल्याची खात्री करा.
९.१.२उर्वरित सर्व अभिकर्मक 2-8 वर परत करा℃वापरल्यानंतर लगेच.
९.१.३मायक्रोवेल्स योग्यरित्या धुणे ही तपासणी प्रक्रियेतील एक महत्त्वाची पायरी आहे;एलिसा विश्लेषणाच्या पुनरुत्पादनक्षमतेसाठी हा महत्त्वाचा घटक आहे.
९.१.४ अउष्मायन दरम्यान प्रकाश रिकामा करा आणि मायक्रोवेल्स झाकून टाका.
9.2 परख चरण
9.2.1 खोलीच्या तपमानावर (20-25℃) 30 मिनिटांपेक्षा जास्त काळ सर्व अभिकर्मक बाहेर काढा, वापरण्यापूर्वी हलक्या हाताने हलवा.
9.2.2 आवश्यक असलेल्या मायक्रोवेल्स बाहेर काढा आणि उरलेल्या झिप-लॉक बॅगमध्ये 2-8℃ तत्काळ परत करा.
9.2.3 पातळ केलेले वॉश सोल्यूशन वापरण्यापूर्वी खोलीच्या तपमानावर पुन्हा गरम केले पाहिजे.
९.२.४क्रमांक:प्रत्येक मायक्रोवेल पोझिशन्स क्रमांकित आणि सर्व मानके आणि नमुने डुप्लिकेटमध्ये चालवले जावेत.मानके आणि नमुने पोझिशन्स रेकॉर्ड करा.
९.२.५Aडीडी मानक सोल्यूशन/नमुना आणि अँटीबॉडी सोल्यूशन: मानक द्रावणाचे ५०µl जोडा((किट प्रदान केले)) किंवा संबंधित विहिरींसाठी तयार केलेला नमुना.50µl प्रतिपिंड द्रावण जोडा(किट प्रदान केले).प्लेटला हाताने हलवून हलक्या हाताने मिक्स करा आणि कव्हरसह 37 डिग्री सेल्सियस वर 30 मिनिटे उबवा.
९.२.६धुवा: झाकण हळूवारपणे काढून टाका आणि विहिरीतील द्रव शुद्ध करा आणि मायक्रोवेल्स 250µl पातळ केलेल्या वॉश सोल्यूशनने स्वच्छ करा (उपाय3) 10 च्या अंतराने 4-5 वेळा.अवशिष्ट पाणी शोषक कागदासह शोषून घ्या (उर्वरित हवेचा फुगा न वापरलेल्या टीपने काढून टाकला जाऊ शकतो).
९.२.७एंजाइम संयुग्म जोडा: 100 मिली एंजाइम संयुग्मित द्रावण जोडा(किट प्रदान केले) प्रत्येक विहिरीत हलक्या हाताने मिसळा आणि 37 डिग्री सेल्सियस वर 30 मिनिटे झाकण ठेवून उबवा.धुण्याची पायरी पुन्हा करा.
९.२.८रंगरंगोटी: 50µl द्रावण A( जोडाकिट प्रदान केले) आणि ५०µl द्रावण B(किट प्रदान केले) प्रत्येक विहिरीला.हलक्या हाताने मिक्स करा आणि कव्हरसह 37 डिग्री सेल्सियस तापमानावर 15 मिनिटे ठेवा.
९.२.९मोजणे: स्टॉप सोल्यूशनचे 50µl जोडा(किट प्रदान केले) प्रत्येक विहिरीला.हळूवारपणे मिसळा आणि शोषकता 450nm वर मोजा (450/630nm च्या दुहेरी-तरंगलांबीसह हे मोजण्यासाठी सुचवले आहे. स्टॉप सोल्यूशन जोडल्यानंतर 5 मिनिटांच्या आत निकाल वाचा).
10. परिणाम
10.1 टक्के शोषण
मानके आणि नमुन्यांसाठी मिळवलेल्या शोषक मूल्यांची सरासरी मूल्ये पहिल्या मानक (शून्य मानक) च्या शोषक मूल्याने भागली जातात आणि 100% ने गुणाकार केली जातात.अशा प्रकारे शून्य मानक 100% च्या बरोबरीचे केले जाते आणि शोषक मूल्ये टक्केवारीत उद्धृत केली जातात.
B
शोषण (%) = —— × १००%
B0
बी ——शोषक मानक (किंवा नमुना)
B0 ——शोषक शून्य मानक
10.2 मानक वक्र
---- एक मानक वक्र काढण्यासाठी: मानकांचे शोषक मूल्य y-अक्ष म्हणून घ्या, टायलोसिन मानक द्रावण (ppb) च्या एकाग्रतेचे अर्ध लॉगरिदमिक x-अक्ष म्हणून घ्या.
----प्रत्येक नमुन्याची टायलोसिन एकाग्रता (ppb), जी कॅलिब्रेशन वक्रातून वाचली जाऊ शकते, त्यानंतर प्रत्येक नमुन्याच्या संबंधित डायल्युशन फॅक्टरने गुणाकार केला जातो आणि नमुन्याची वास्तविक एकाग्रता प्राप्त होते.
कृपया लक्ष द्या:
डेटा विश्लेषणासाठी विशेष सॉफ्टवेअर विकसित केले गेले आहे, जे विनंतीनुसार प्रदान केले जाऊ शकते.
11. संवेदनशीलता, अचूकता आणि अचूकता
चाचणी संवेदनशीलता:1.5ppb
शोध मर्यादा:
प्राण्यांचे ऊतक………………………………………………1.5ppb दूध …………………………………………………………..१५ पीपीबी अचूकता:
प्राण्यांच्या ऊती ………………………………………… ८०±१५%
दूध ………………………………………………………… 80±10%
अचूकता:
ELISA किटचे भिन्नता गुणांक 10% पेक्षा कमी आहे.
12. सूचना
12.1 अभिकर्मक आणि नमुने खोलीच्या तपमानावर (20-25℃) नियंत्रित केले नसल्यास मानके आणि नमुन्यांसाठी प्राप्त केलेल्या शोषक मूल्यांची सरासरी मूल्ये कमी केली जातील.
12.2 अयशस्वी पुनरुत्पादकता टाळण्यासाठी आणि मायक्रोवेल्स होल्डरला टॅप केल्यानंतर लगेचच पुढील पायरी चालवण्यासाठी पायऱ्यांदरम्यान मायक्रोवेल्स कोरडे होऊ देऊ नका.
12.3 वापरण्यापूर्वी प्रत्येक अभिकर्मक हलक्या हाताने हलवा.
12.4 तुमची त्वचा स्टॉप सोल्यूशनपासून दूर ठेवा कारण ते 0.5MH आहे2SO4उपाय.
12.5 कालबाह्य किट वापरू नका.वेगवेगळ्या बॅचच्या अभिकर्मकांची देवाणघेवाण करू नका, अन्यथा ते संवेदनशीलता कमी करेल.
12.6 ELISA किट 2-8℃ वर ठेवा, गोठवू नका.विश्रांतीच्या मायक्रोवेल प्लेट्स सील करा, सर्व उष्मायन दरम्यान सरळ सूर्यप्रकाश टाळा.मायक्रोटायटर प्लेट्स झाकण्याची शिफारस केली जाते.
12.7 सब्सट्रेट सोल्यूशनने रंग बदलल्यास ते सोडले पाहिजे.शून्य मानकांचे शोषक मूल्य (450/630nm) 0.5 (A450nm<0.5) पेक्षा कमी असल्यास अभिकर्मक खराब होऊ शकतात.
12.8 सोल्यूशन A आणि सोल्यूशन B जोडल्यानंतर कलरेशन रिअॅक्शनला 15 मिनिटे लागतात. आणि जर रंग खूप हलका असेल तर तुम्ही उष्मायन वेळ 20 मिनिटांपर्यंत वाढवू शकता.30 मिनिटांपेक्षा जास्त नसावे, उलटपक्षी, उष्मायन वेळ योग्यरित्या कमी करा.
12.9 इष्टतम प्रतिक्रिया तापमान 37℃ आहे.उच्च किंवा कमी तापमानामुळे संवेदनशीलता आणि शोषक मूल्यांमध्ये बदल होईल.
13. स्टोरेज
स्टोरेज स्थिती: 2-8℃.
स्टोरेज कालावधी: 12 महिने.
