फ्लुमेक्विनच्या परिमाणात्मक विश्लेषणासाठी स्पर्धात्मक एंझाइम इम्युनोसे किट
चाचणी तत्त्व
हे किट अप्रत्यक्ष-स्पर्धात्मक ELISA तंत्रज्ञानावर आधारित आहे.मायक्रोटायटर विहिरी कपलिंग प्रतिजनसह लेपित आहेत.फ्ल्युमेक्विननमुन्यातील अवशेष प्रतिपिंडासाठी मायक्रोटायटर प्लेटवर लेपित प्रतिजनाशी स्पर्धा करतात.अँटीबॉडी लेबल असलेले एन्झाइम जोडल्यानंतर, रंग दर्शविण्यासाठी टीएमबी सब्सट्रेट वापरला जातो.नमुन्याचे शोषण हे टेट्रासाइक्लिनमध्ये राहणाऱ्या टेट्रासाइक्लिनशी नकारात्मक रीतीने संबंधित आहे, स्टँडर्ड वक्रशी तुलना केल्यावर, डायल्युशन मल्टिपलने गुणाकार केल्यावर, नमुन्यातील फ्लुमेक्विन अवशेषांचे प्रमाण मोजले जाऊ शकते.
अर्ज
या किटचा वापर मधातील फ्ल्युमेक्विन अवशेषांच्या परिमाणात्मक आणि गुणात्मक विश्लेषणासाठी केला जाऊ शकतो.
क्रॉस-प्रतिक्रिया
फ्ल्युक्विन ……………………………………………… 100%
आवश्यक साहित्य
उपकरणे
┅┅मायक्रोटायटर प्लेट स्पेक्ट्रोफोटोमीटर (450nm/630nm)
┅┅होमोजेनायझर किंवा पोटर
┅┅ शेकर
┅┅व्हर्टेक्स मिक्सर
┅┅ अपकेंद्रित्र
┅┅ विश्लेषणात्मक शिल्लक (प्रेरण: 0.01g)
┅┅ग्रॅज्युएटेड पिपेट: 15ml
┅┅रबर पिपेट बल्ब
┅┅पॉलीस्टीरिन सेंट्रीफ्यूज ट्यूब: 15ml, 50ml
┅┅ग्लास टेस्ट ट्यूब：10ml
┅┅मायक्रोपिपेट्स: 20ml-200ml, 100ml -10000ml,
250 मिली - मल्टिपिपेट
अभिकर्मक
┅┅n-हेक्सेन(AR)
┅┅मिथिलीन क्लोराईड(AR)
┅┅एसीटोनिट्रिल (एआर)
┅┅ डीआयोनाइज्ड पाणी
-----केंद्रित हायड्रोक्लोरिक ऍसिड (AR)
किटचे घटक
● प्रतिजन सह लेपित 96 विहिरी असलेली मायक्रोटायटर प्लेट
● मानक उपाय (6 बाटल्या×1ml/बाटली)
0ppb, 0.3ppb, 1.2ppb, 4.8ppb, 19.2ppb, 76.8ppb
● उच्च एकाग्रता मानक नियंत्रण:(1ml/बाटली)
………………………………………………………100ppb
● सजीवांच्या शरीरात निर्मार्ण होणारे द्रव्य संयुग्म 12ml………………………... लाल टोपी
● प्रतिपिंड द्रावण 7 मिली ……………………………………….. हिरवी टोपी
● ऊत्तराची A 7ml ……………………………………………..पांढरी टोपी
● ऊत्तराची बी 7 मिली ……………………………………… लाल टोपी
● स्टॉप सोल्यूशन 7 मिली ……………………..……… पिवळी टोपी
● 20XConcentrated वॉश सोल्यूशन 40ml
…………………………………………………..पारदर्शक टोपी
●2X एक्स्ट्रॅक्शन सोल्यूशन 50ml………………………… ब्लू कॅप
अभिकर्मक तयारी
7.1 मध नमुना
उपाय १ : ०.२ एम हायड्रोक्लोरिक ऍसिडचे द्रावण
वजन 41.5 मिली एकाग्र हायड्रोक्लोरिक ऍसिड, डीआयोनाइज्ड पाण्याने 500 मिली पर्यंत पातळ करा.
उपाय 2: द्रावण धुवा
1:19 च्या व्हॉल्यूम प्रमाणात डीआयोनाइज्ड पाण्याने केंद्रित वॉश सोल्यूशन पातळ करा, जे प्लेट्स धुण्यासाठी वापरले जाईल.पातळ केलेले द्रावण 1 महिन्यासाठी 4℃ वर साठवले जाऊ शकते.
उपाय3: निष्कर्षण उपाय
1:1 च्या व्हॉल्यूम रेशनमध्ये (किंवा आवश्यकतेनुसार) डिआयोनाइज्ड पाण्याने 2×केंद्रित निष्कर्षण द्रावण पातळ करा, जे नमुना काढण्यासाठी वापरले जाईल.हे पातळ केलेले द्रावण 4 डिग्री तापमानात 1 महिन्यासाठी संरक्षित केले जाऊ शकते.
नमुना तयारी
8.1 ऑपरेशनपूर्वी वापरकर्त्यांसाठी सूचना आणि खबरदारी
(a) कृपया प्रयोगाच्या प्रक्रियेत एकेरी टिप्स वापरा आणि भिन्न अभिकर्मक शोषून घेत असताना टिपा बदला.
(b) सर्व प्रायोगिक साधने स्वच्छ असल्याची खात्री करा, अन्यथा ते परख परिणामांवर परिणाम करेल.
८.२मध नमुना
----- 2g±0.05g मधाच्या नमुन्याचे वजन 50ml पॉलिस्टीरिन सेंट्रीफ्यूज ट्यूबमध्ये करा,
----- 2ml 0.2 M हायड्रोक्लोरिक ऍसिड सोल्यूशन (सोल्यूशन 1) जोडा, पूर्णपणे मिसळण्यासाठी भोवरा, नंतर 8ml मिथिलीन क्लोराईड घाला, पूर्णपणे विरघळण्यासाठी 5 मिनिटांसाठी शेकरने शेक करा;
----- 10 मिनिटांसाठी अपकेंद्रित्र, खोलीच्या तपमानावर किमान 3000 ग्रॅम (20-25℃);
-----सुपरनॅटंट फेज काढा, 2 मिली सब्सट्रेट सेंद्रिय द्रावण 10 मिली ग्लास ट्यूबमध्ये घ्या. नायट्रोजन प्रवाहाच्या पाण्याखाली सबस्टेट कोरडा करा (50-60℃)
-----1 ml n-hexane, 30s साठी vortex जोडा, नंतर 1ml एक्सट्रॅक्शन सोल्यूशन (सोल्यूशन 3) जोडा, 1 मिनिटांसाठी पुन्हा व्होर्टेक्स करा.5 मिनिटांसाठी सेंट्रीफ्यूज, खोलीच्या तपमानावर किमान 3000 ग्रॅम (20-25℃);
-----सुपरनॅटंट फेज काढा, परखसाठी 50ml घ्या;
9. परख प्रक्रिया
9.1 परीक्षापूर्वी सूचना
9.1.1 सर्व अभिकर्मक आणि मायक्रोवेल्स खोलीच्या तपमानावर (20-25℃) असल्याची खात्री करा.
9.1.2 वापरल्यानंतर लगेच सर्व उर्वरित अभिकर्मक 2-8℃ वर परत करा.
9.1.3 मायक्रोवेल्स योग्यरित्या धुणे ही तपासणी प्रक्रियेतील एक महत्त्वाची पायरी आहे;एलिसा विश्लेषणाच्या पुनरावृत्तीसाठी हा महत्त्वाचा घटक आहे.
9.1.4 उष्मायन दरम्यान प्रकाश टाळा आणि मायक्रोवेल्स झाकून ठेवा.
9.2 परख चरण
9.2.1 खोलीच्या तपमानावर (20-25℃) 30 मिनिटांपेक्षा जास्त काळ सर्व अभिकर्मक बाहेर काढा, वापरण्यापूर्वी एकसमान करा.
9.2.2 आवश्यक असलेल्या मायक्रोवेल्स बाहेर काढा आणि उरलेल्या झिप-लॉक बॅगमध्ये 2-8℃ तत्काळ परत करा.
9.2.3 पातळ केलेले वॉश सोल्यूशन वापरण्यापूर्वी खोलीच्या तपमानावर पुन्हा गरम केले पाहिजे.
९.२.४क्रमांक:प्रत्येक मायक्रोवेल स्थितीची संख्या आणि सर्व मानके आणि नमुने डुप्लिकेटमध्ये चालवले पाहिजेत.मानके आणि नमुने पोझिशन्स रेकॉर्ड करा.
९.२.५मानक उपाय/नमुना जोडा:50 μl प्रमाणित द्रावण किंवा तयार केलेला नमुना संबंधित विहिरींमध्ये घाला.50µl प्रतिपिंड द्रावण घाला.प्लेटला हाताने हलवून हलक्या हाताने मिक्स करा आणि कव्हरसह 25°C वर 30 मिनिटे उबवा.
९.२.६धुवा:झाकण हळूवारपणे काढून टाका आणि विहिरीतील द्रव शुद्ध करा आणि मायक्रोवेल्स 250µl पातळ केलेल्या वॉश सोल्यूशनने (सोल्यूशन 2) 10 च्या अंतराने 4-5 वेळा स्वच्छ धुवा.अवशिष्ट पाणी शोषक कागदासह शोषून घ्या (उर्वरित हवेचा फुगा न वापरलेल्या टीपने काढून टाकला जाऊ शकतो).
९.२.८.एंजाइम संयुग्मित:प्रत्येक विहिरीला 100 मिली एंजाइम संयुग्म द्रावण घाला, प्लेट हाताने हलवून हलक्या हाताने मिसळा आणि झाकणाने 25 डिग्री सेल्सियस वर 30 मिनिटे उबवा.धुण्याची पायरी पुन्हा करा.
९.२.८रंग:प्रत्येक विहिरीला 50µl द्रावण A आणि 50µl द्रावण B घाला.प्लेट हाताने हलवून हलक्या हाताने मिक्स करा आणि कव्हरसह 25℃ तापमानावर 15 मिनिटे उबवा (12.8 पहा).
९.२.९मोजमाप:प्रत्येक विहिरीला 50µl स्टॉप सोल्यूशन घाला.प्लेट मॅन्युअली हलवून हलक्या हाताने मिक्स करा आणि हवेच्या रिकामे विरुद्ध 450nm वर शोषक मोजा (हे 450/630nm च्या दुहेरी-तरंगलांबीसह सूचित केले आहे. स्टॉप सोल्यूशन जोडल्यानंतर 5 मिनिटांच्या आत निकाल वाचा.) (आम्ही दृष्टीद्वारे देखील मोजू शकतो. ELIASA इन्स्ट्रुमेंटच्या थोडक्यात स्टॉप सोल्यूशनशिवाय)
परिणाम
10.1 टक्के शोषण
मानके आणि नमुन्यांसाठी मिळवलेल्या शोषक मूल्यांची सरासरी मूल्ये प्रथम मानक (शून्य मानक) च्या शोषक मूल्याने विभागली जातात आणि 100% ने गुणाकार केली जातात.अशा प्रकारे शून्य मानक 100% च्या बरोबरीचे केले जाते आणि शोषक मूल्ये टक्केवारीत उद्धृत केली जातात.
शोषण (%) = B/B0 × 100%
बी ——शोषक मानक (किंवा नमुना)
B0 ——शोषक शून्य मानक
10.2 मानक वक्र
मानक वक्र काढण्यासाठी: मानकांचे शोषक मूल्य y-अक्ष म्हणून घ्या, फ्ल्युमेक्विन स्टँडर्ड्स सोल्यूशन (ppb) च्या एकाग्रतेचे अर्ध लॉगरिदमिक x-अक्ष म्हणून घ्या.
--- दफ्ल्युक्विनप्रत्येक नमुन्याची एकाग्रता (ppb), जी कॅलिब्रेशन वक्रातून वाचली जाऊ शकते, त्यानंतर प्रत्येक नमुन्याच्या संबंधित डायल्युशन मल्टिपलने गुणाकार केला जातो आणि नमुन्याची वास्तविक एकाग्रता प्राप्त होते.
ELISA किट्सचा डेटा कमी करण्यासाठी, विशेष सॉफ्टवेअर विकसित केले गेले आहे, जे विनंतीनुसार प्रदान केले जाऊ शकते.
11. संवेदनशीलता, अचूकता आणि अचूकता
चाचणी संवेदनशीलता:0.3ppb
मध नमुना सौम्य घटक: 2
ओळख मर्यादा
मध नमुना ---------------------------------- -1ppb
अचूकता
मधाचा नमुना --------------------------------------------- 90±20 %
सुस्पष्टता
ELISA किटचे भिन्नता गुणांक 10% पेक्षा कमी आहे.
12. सूचना
12.1 अभिकर्मक आणि नमुने खोलीच्या तपमानावर (20-25℃) नियंत्रित केले नसल्यास मानके आणि नमुन्यांसाठी प्राप्त केलेल्या शोषक मूल्यांची सरासरी मूल्ये कमी केली जातील.
12.2 अयशस्वी पुनरावृत्ती टाळण्यासाठी आणि मायक्रोवेल्स होल्डरवर टॅप केल्यानंतर लगेचच पुढील पायरी चालवण्यासाठी पायऱ्यांदरम्यान मायक्रोवेल्स कोरडे होऊ देऊ नका.
१२.३.वापरण्यापूर्वी प्रत्येक अभिकर्मक एकसंध करा.
१२.४.तुमची त्वचा स्टॉप सोल्यूशनपासून दूर ठेवा कारण ते 2M H आहे2SO4उपाय.
12.5 कालबाह्य किट वापरू नका.वेगवेगळ्या बॅचच्या अभिकर्मकांची देवाणघेवाण करू नका, कारण यामुळे संवेदनशीलता कमी होईल.
12.6 स्टोरेज स्थिती:
ELISA किट 2-8℃ वर ठेवा, गोठवू नका.सील रेस्ट मायक्रोवेल प्लेट्स सर्व उष्मायन दरम्यान सरळ सूर्यप्रकाश टाळा.मायक्रोटायटर प्लेट्स झाकण्याची शिफारस केली जाते.
१२.७ अभिकर्मक खराब होण्याचे संकेत:
सब्सट्रेट सोल्यूशन रंग बदलल्यास ते सोडले पाहिजे.
जर शून्य मानकाचे शोषक मूल्य (450/630nm) 0.5 (A450nm＜0.5) पेक्षा कमी असेल तर अभिकर्मक खराब होऊ शकतात.
12.8 सोल्यूशन A आणि सोल्यूशन B जोडल्यानंतर रंगाच्या प्रतिक्रियेला 15 मिनिटे लागतात. आणि जर रंग खूप हलका असेल तर तुम्ही उष्मायन वेळ 20 मिनिटांपर्यंत वाढवू शकता.कधीही 25 मिनिटांपेक्षा जास्त करू नका, उलटपक्षी, उष्मायन वेळ योग्यरित्या कमी करा.
12.9 इष्टतम प्रतिक्रिया तापमान 25℃ आहे.उच्च किंवा कमी तापमानामुळे संवेदनशीलता आणि शोषक मूल्यांमध्ये बदल होईल.
13. स्टोरेज
स्टोरेज स्थिती: 2-8℃.
स्टोरेज कालावधी: 12 महिने.
