קאַמפּעטיטיוו ענזיים יממונאָאַססייַ קיט פֿאַר קוואַנטיטאַטיווע אַנאַליסיס פון פלומעקווינע
טעסט פּרינציפּ
דעם קיט איז באזירט אויף ומדירעקט-קאַמפּעטיטיוו ELISA טעכנאָלאָגיע.די מיקראָטיטער וועלז זענען קאָוטאַד מיט קאַפּלינג אַנטיגען.פלומעקווינערעזאַדו אין דער מוסטער קאַמפּיץ מיט די אַנטיגען קאָוטאַד אויף די מיקראָטיטער טעלער פֿאַר די אַנטיבאָדי.נאָך די אַדישאַן פון ענזיים לייבאַלד אַנטי-אַנטיבאָדי, TMB סאַבסטרייט איז געניצט צו ווייַזן די קאָליר.די אַבזאָרבאַנס פון די מוסטער איז נעגאַטיוולי שייַכות צו די טעטראַסיקלינע וווינען אין עס, נאָך קאַמפּערינג מיט די סטאַנדאַרד קורווע, געמערט מיט די דיילושאַן קייפל, פלומעקווינע רעזאַדו קוואַנטיטי אין די מוסטער קענען זיין קאַלקיאַלייטיד.
אַפּפּליקאַטיאָנס
דעם קיט קענען זיין געוויינט אין קוואַנטיטאַטיווע און קוואַליטאַטיווע אַנאַליסיס פון פלומעקווינע רעזאַדו אין האָניק.
קרייַז-ריאַקשאַנז
פלומעקווינע ………………………………………………… 100%
מאַטעריאַלס פארלאנגט
עקוויפּמענץ
┅┅ מיקראָטיטער טעלער ספּעקטראָפאָטאָמעטער (450nm/630nm)
┅┅האָמאָגעניזער אָדער סטאָמאַטשער
┅┅שאַקער
┅┅וואָרטעקס מיקסער
┅┅סענטריפיוזש
┅┅אַנאַליטיקאַל וואָג (ינדוקטאַנס: 0.01ג)
┅┅גראַדואַטעד פּיפּעטטע: 15 מל
┅┅גומע פּיפּעטטע ציבעלע
┅┅פּאָליסטירענע סענטריפיוזש רער: 15 מל, 50 מל
┅┅ גלאז פּרובירן רער: 10 מל
┅┅ מיקראָפּיפּעטטעס: 20 מל-200 מל, 100 מל - 10000 מל,
250 מל - מולטיפּיפּעטטע
רעאַגענץ
┅┅n-העקסאַן (AR)
┅┅ מעטהילענע קלאָרייד (אַר)
┅┅אַסעטאָניטרילע (אַר)
┅┅דעיאָניזעד וואַסער
----- קאַנסאַנטרייטאַד הידראָטשלאָריק זויער (AR)
קיט קאַמפּאָונאַנץ
● מיקראָטיטער טעלער מיט 96 וועלז קאָוטאַד מיט אַנטיגען
● נאָרמאַל סאַלושאַנז (6 לאגלען × 1 מל / פלאַש)
0ppb, 0.3ppb, 1.2ppb, 4.8ppb, 19.2ppb, 76.8ppb
● הויך קאַנסאַנטריישאַן נאָרמאַל קאָנטראָל: (1 מל / פלאַש)
…………………………………………………………100פּפּב
● ענזיים קאָנדזשוגאַטע 12 מל……………………………… רויט היטל
● אַנטיבאָדי לייזונג 7 מל …………..……..….….. גרין היטל
● לייזונג א 7 מל …………..……………………………………….. ווייַס היטל
● לייזונג ב 7 מל ………………….……………………………………… רויט היטל
● האַלטן לייזונג 7 מל …………………………..……… געל היטל
● 20קסקאָנצענטראַטעד וואַש לייזונג 40מל
…………………………………………..….. טראַנספּעראַנט היטל
●2 קס עקסטראַקטיאָן לייזונג 50 מל………………………… בלוי היטל
רעאַגענץ צוגרייטונג
7.1 האָניק מוסטער
לייזונג 1: 0.2 ם הידראָטשלאָריק זויער לייזונג
וואָג 41.5 מל קאַנסאַנטרייטאַד הידראָטשלאָריק זויער, צעפירן מיט דייאַנייזד וואַסער צו 500 מל.
לייזונג 2: וואַש לייזונג
צעפירן די קאַנסאַנטרייטאַד וואַש לייזונג מיט דייאָניזעד וואַסער אין אַ באַנד פאַרהעלטעניש פון 1:19, וואָס וועט זיין געניצט פֿאַר וואַשינג די פּלאַטעס.די דיילוטאַד לייזונג קענען זיין סטאָרד בייַ 4 ℃ פֿאַר 1 חודש.
לייזונג3: יקסטראַקשאַן לייזונג
צעפירן די 2 × קאַנסאַנטרייטאַד יקסטראַקשאַן לייזונג מיט דייאָניזעד וואַסער אין אַ באַנד פון 1: 1 (אָדער אָפענגען אויף פאָדערונג), וואָס וועט זיין געניצט פֿאַר מוסטער יקסטראַקשאַן.די דיילוטאַד לייזונג קענען זיין קאַנסערווד פֿאַר 1 חודש ביי 4 ℃.
מוסטער פּרעפּעריישאַנז
8.1 באַמערקן און פּריקאָשאַנז פֿאַר די ניצערס איידער אָפּעראַציע
(אַ) ביטע נוצן איין-אַוועק עצות אין דעם פּראָצעס פון עקספּערימענט, און טוישן די עצות ווען אַרייַנציען פאַרשידענע רייידזשאַנט.
(ב) מאַכן זיכער אַז אַלע יקספּערמענאַל ינסטראַמאַנץ זענען ריין, אַנדערש דאָס וועט ווירקן די אַססיי רעזולטאַט.
8.2האָניק מוסטער
----- וועגן 2 ג ± 0.05 ג האָניק מוסטער אין אַ 50 מל פּאַליסטיירין סענטריפודזש רער,
----- לייג 2 מל 0.2 ם הידראָטשלאָריק זויער לייזונג (סאַלושאַן 1), וואָרטעקס צו מישן עס גאָר, דעמאָלט לייגן 8 מל מעטהילענע קלאָרייד, שאָקלען מיט שייקער פֿאַר 5 מינוט צו צעלאָזן גאָר;
-----סענטריפיוזש פֿאַר 10 מינוט, בייַ מינדסטער 3000 ג אין צימער טעמפּעראַטור (20-25 ℃);
----- אַראָפּנעמען די סופּערנאַטאַנט פאַסע, נעמען 2 מל פון די סאַבסטרייט אָרגאַניק לייזונג צו אַ 10 מל גלאז רער. טרוקן די סאַבסטייט אונטער וואַסער וואַנע פון ניטראָגען לויפן (50-60 ℃)
----- לייג 1 מל n-העקסאַן, וואָרטעקס פֿאַר 30 ס, און לייגן 1 מל יקסטראַקשאַן לייזונג (לייזונג 3), וואָרטעקס ווידער פֿאַר 1 מין.סענטריפיוזש פֿאַר 5 מינוט, בייַ מינדסטער 3000 ג אין צימער טעמפּעראַטור (20-25 ℃);
----- אַראָפּנעמען די סופּערנאַטאַנט פאַסע, נעמען 50 מל פֿאַר אַסיינמאַנט;
9. אַססייַ פּראָצעס
9.1 באַמערקן איידער אַסיי
9.1.1 מאַכן זיכער אַז אַלע רייידזשאַנץ און מיקראָוועלז זענען אין צימער טעמפּעראַטור (20-25 ℃).
9.1.2 צוריקקומען אַלע די מנוחה רייידזשאַנץ צו 2-8 ℃ מיד נאָך געוויינט.
9.1.3 וואַשינג די מיקראָוועלז ריכטיק איז אַ וויכטיק שריט אין דעם פּראָצעס פון אַסייַ;דאָס איז דער וויטאַל פאַקטאָר פֿאַר די ריפּעטיטיוונאַס פון די ELISA אַנאַליסיס.
9.1.4 ויסמיידן די ליכט און דעקן די מיקראָוועלז בעשאַס ינגקיוביישאַן.
9.2 אַסאַס סטעפּס
9.2.1 נעמען אַלע רייידזשאַנץ אויס אין צימער טעמפּעראַטור (20-25 ℃) פֿאַר מער ווי 30 מינוט, כאָומאַדזשאַנייז איידער נוצן.
9.2.2 באַקומען די נויטיק מיקראָוועללס און צוריקקומען די מנוחה אין די פאַרשלעסלען-שלאָס זעקל גלייך ביי 2-8 ℃.
9.2.3 די דיילוטאַד וואַש לייזונג זאָל זיין ריוואָרמד צו זיין אין צימער טעמפּעראַטור איידער נוצן.
9.2.4נומער:נומער יעדער מיקראָוועל שטעלע און אַלע סטאַנדאַרדס און סאַמפּאַלז זאָל זיין לויפן אין דופּליקאַט.רעקאָרדירן די סטאַנדאַרדס און סאַמפּאַלז שטעלעס.
9.2.5לייג נאָרמאַל לייזונג / מוסטער:לייג 50 μל נאָרמאַל לייזונג אָדער צוגעגרייט מוסטער צו קאָראַספּאַנדינג וועלז.לייג 50 μל אַנטיבאָדי לייזונג.מישן דזשענטלי דורך שאַקינג די טעלער מאַניואַלי און ינגקיובייט פֿאַר 30 מינוט בייַ 25 ℃ מיט דעקן.
9.2.6וואש:אַראָפּנעמען די דעקן דזשענטלי און ריין די פליסיק אויס פון די וועלז און שווענקען די מיקראָוועלז מיט 250 μל דיילוטאַד וואַש לייזונג (לייזונג 2) מיט אַ מעהאַלעך פון 10 ס פֿאַר 4-5 מאל.אַרייַנציען די ריזידזשואַל וואַסער מיט אַבזאָרבאַנט פּאַפּיר (די מנוחה לופט בלאָז קענען זיין ילימאַנייטאַד מיט אַניוזד שפּיץ).
9.2.8.ענזיים קאָנדזשוגאַטע:לייג ענזיים קאָנדזשוגאַטע לייזונג 100 מל צו יעדער געזונט, מיקס דזשענטלי דורך שאַקינג די טעלער מאַניואַלי און ינקובייט פֿאַר 30 מינוט בייַ 25 ℃ מיט דעקן.איבערחזרן די וואַשן שריט ווידער.
9.2.8קאָליר:לייג 50 μל לייזונג א און 50 μל לייזונג ב צו יעדער געזונט.מיקס דזשענטלי דורך שאַקינג די טעלער מאַניואַלי און ינגקיובייט פֿאַר 15 מינוט בייַ 25 ℃ מיט דעקן (זען 12.8).
9.2.9מעסטן:לייג 50 μל די האַלטן לייזונג צו יעדער געזונט.מיקס דזשענטלי דורך שאַקינג די טעלער מאַניואַלי און מעסטן די אַבזאָרבאַנס ביי 450nm קעגן אַ לופט פּוסט (עס ס סאַגדזשעסטיד מאָס מיט די צווייענדיק ווייוולענגט פון 450/630nm. לייענען די רעזולטאַט ין 5מין נאָך אַדישאַן פון האַלטן לייזונג.) (מיר קענען אויך מעסטן דורך דערזען.) אָן האַלטן לייזונג אין קורץ פון די ELIASA קיילע)
רעזולטאַטן
10.1 פּראָצענט אַבזאָרבאַנס
די דורכשניטלעך וואַלועס פון די אַבזאָרבאַנס וואַלועס באקומען פֿאַר די סטאַנדאַרדס און סאַמפּאַלז זענען צעטיילט דורך די אַבזאָרבאַנס ווערט פון דער ערשטער נאָרמאַל (נול נאָרמאַל) און געמערט מיט 100%.דער נול נאָרמאַל איז אַזוי געמאכט גלייַך צו 100% און די אַבזאָרבאַנס וואַלועס זענען ציטירטן אין פּערסענטידזשיז.
אַבזאָרבאַנס (%) = ב/ב0 × 100%
ב ——אַבזאָרבאַנס נאָרמאַל (אָדער מוסטער)
B0 ——אַבזאָרבאַנס נול נאָרמאַל
10.2 נאָרמאַל ויסבייג
צו ציען אַ נאָרמאַל ויסבייג: נעמען די אַבזאָרבאַנס ווערט פון סטאַנדאַרדס ווי י-אַקס, האַלב לאָגאַריטהמיק פון די קאַנסאַנטריישאַן פון די פלומעקווינע סטאַנדאַרדס לייזונג (פּפּב) ווי X-אַקס.
--- דיפלומעקווינעקאַנסאַנטריישאַן פון יעדער מוסטער (פּפּב), וואָס קענען זיין לייענען פון די קאַלאַבריישאַן ויסבייג, איז געמערט מיט די קאָראַספּאַנדינג דיילושאַן קייפל פון יעדער מוסטער נאכגעגאנגען, און די פאַקטיש קאַנסאַנטריישאַן פון מוסטער איז באקומען.
פֿאַר דאַטן רעדוקציע פון די ELISA קיץ, ספּעציעל ווייכווארג איז דעוועלאָפּעד, וואָס קענען זיין צוגעשטעלט אויף בעטן.
11. סענסיטיוויטי, אַקיעראַסי און פּינטלעכקייַט
טעסט סענסיטיוויטי:0.3 פּפּב
האָניק מוסטער דיילושאַן פאַקטאָר: 2
דעטעקשאַן שיעור
האָניק מוסטער ------------------------------------------ -1פּפּב
אַקיעראַסי
האָניק מוסטער -------------------------------------------- 90±20 %
פּינטלעכקייַט
די ווערייישאַן קאָואַפישאַנט פון די עליסאַ קיט איז ווייניקער ווי 10%.
12. באַמערקן
12.1 די דורכשניטלעך וואַלועס פון די אַבזאָרבאַנס וואַלועס באקומען פֿאַר די סטאַנדאַרדס און סאַמפּאַלז וועט זיין רידוסט אויב די רייידזשאַנץ און סאַמפּאַלז זענען נישט רעגיאַלייטאַד צו צימער טעמפּעראַטור (20-25 ℃).
12.2 דו זאלסט נישט לאָזן מיקראָוועלז צו טרוקן צווישן סטעפּס צו ויסמיידן ניט געראָטן ריפּעטיטיוונאַס און אַרבעטן די ווייַטער שריט מיד נאָך צאַפּן די מיקראָוועלס האָלדער.
12.3.האָמאָגעניזירן יעדער רייידזשאַנט איידער ניצן.
12.4.האַלטן דיין הויט אַוועק פון די האַלטן לייזונג פֿאַר עס איז די 2M H2SO4לייזונג.
12.5 דו זאלסט נישט נוצן די קיץ פון די לעצטע טאָג.דו זאלסט נישט בייַטן די רייידזשאַנץ פון פאַרשידענע באַטשאַז, פֿאַר עס וועט פאַלן די סענסיטיוויטי.
12.6 סטאָרידזש צושטאַנד:
האַלטן די ELISA קיץ בייַ 2-8 ℃, טאָן ניט פרירן.פּלאָמבע מנוחה מיקראָוועל פּלאַטעס ויסמיידן גלייַך זונשייַן בעשאַס אַלע ינגקיוביישאַנז.עס איז רעקאַמענדיד צו דעקן די מיקראָטיטער פּלאַטעס.
12.7 ינדיקאַטיאָנס פֿאַר רעאַגענץ:
סאַבסטרייט לייזונג זאָל זיין פארלאזן אויב עס טורנס פארבן.
די רייידזשאַנץ קען זיין שלעכט אויב די אַבזאָרבאַנס ווערט (450/630 נם) פון די נול נאָרמאַל איז ווייניקער ווי 0.5 (A450nm＜0.5).
12.8 די קאָלאָראַטיאָן אָפּרוף דאַרף 15 מינוט נאָך אַדינג לייזונג א און לייזונג ב. און איר קענען פאַרלענגערן די ינגקיוביישאַן צייט ריינדזשאַז פון 20 מינוט צו מער אויב די קאָליר איז צו ליכט צו זיין באשלאסן.קיינמאָל יקסיד 25 מינוט, אויף די פאַרקערט, פאַרקירצן די ינגקיוביישאַן צייט רעכט.
12.9 די אָפּטימאַל אָפּרוף טעמפּעראַטור איז 25 ℃.העכער אָדער נידעריקער טעמפּעראַטור וועט פירן צו די ענדערונגען פון סענסיטיוויטי און אַבזאָרבאַנס וואַלועס.
13. סטאָרידזש
סטאָרידזש צושטאַנד: 2-8℃.
סטאָרידזש צייַט: 12 חדשים.
