produk

Kit Immunoassay Enzim Kompetitif untuk analisis kuantitatif Flumequine

Deskripsi Singkat:

Flumequine adalah anggota antibakteri quinolone, yang digunakan sebagai anti infeksi yang sangat penting dalam produk kedokteran hewan dan akuatik klinis karena spektrumnya yang luas, efisiensi tinggi, toksisitas rendah, dan penetrasi jaringan yang kuat.Ini juga digunakan untuk terapi penyakit, pencegahan dan promosi pertumbuhan.Karena dapat menyebabkan resistensi obat dan potensi karsinogenisitas, batas tinggi yang di dalam jaringan hewan telah ditentukan di UE, Jepang (batas tertinggi adalah 100ppb di UE).

Saat ini, spektrofluorometer, ELISA dan HPLC adalah metode utama untuk mendeteksi residu flumequine, dan ELISA telah menjadi metode rutin untuk sensitivitas tinggi dan pengoperasian yang mudah.


Rincian produk

Tag Produk

Prinsip Uji

Kit ini didasarkan pada teknologi ELISA persaingan tidak langsung.Sumur mikrotiter dilapisi dengan antigen kopling.Flumekuinresidu dalam sampel bersaing dengan antigen yang dilapisi pada pelat mikrotiter untuk mendapatkan antibodi.Setelah penambahan anti-antibodi berlabel enzim, substrat TMB digunakan untuk menunjukkan warna.Absorbansi sampel berhubungan negatif dengan tetrasiklin yang berada di dalamnya, setelah membandingkan dengan Kurva Standar, dikalikan dengan kelipatan pengenceran, jumlah residu Flumekuin dalam sampel dapat dihitung.

Aplikasi

Kit ini dapat digunakan dalam analisis kuantitatif dan kualitatif residu flumequine dalam madu.

Reaksi silang

Flumekuin …………………..……………………… 100%

 

Bahan yang Dibutuhkan

Peralatan

┅┅Spektrofotometer pelat mikrotiter (450nm/630nm)

┅┅Homogenizer atau pengatur perut

┅┅Pengocok

┅┅Vortex mixer

┅┅Pusat sentrifuse

┅┅Saldo analitik (induktansi: 0,01g)

┅┅Pipet bertingkat: 15ml

┅┅Bohlam pipet karet

┅┅Tabung Centrifuge Polystyrene: 15ml, 50ml

┅┅Tabung uji kaca:10ml

┅┅Mikropipet: 20ml-200ml, 100ml -10000ml,

250ml -multipipet

Reagen

┅┅n-heksana(AR)

┅┅Metilena klorida(AR)

┅┅Acetonitril(AR)

┅┅Air deionisasi

----- Asam klorida pekat (AR)

 

Komponen Kit

● Pelat mikrotiter dengan 96 lubang yang dilapisi dengan antigen

● Larutan standar (6 botol×1ml/botol)

0ppb, 0,3ppb, 1,2ppb, 4,8ppb, 19,2ppb, 76,8ppb

● Kontrol standar konsentrasi tinggi:(1ml/botol)

…………………………………………………………100ppb

● Konjugat enzim 12ml………………………... tutup merah

● Larutan antibodi 7ml …………..……..….…..tutup hijau

● Larutan A 7ml……..…………………..………..tutup putih

● Larutan B 7ml …………….…………..………… tutup merah

● Hentikan larutan 7ml ……………………..………tutup kuning

● 20XLarutan pencuci pekat 40ml

………………………………………..…..topi transparan

●2X Larutan ekstraksi 50ml………………...… tutup biru

 

Persiapan Reagen

7.1 Sampel madu

Larutan 1 : Larutan asam klorida 0,2 M

Berat 41,5 ml Asam klorida pekat, encerkan dengan air deionisasi hingga 500 ml.

Solusi 2: Larutan cuci

Encerkan larutan pencuci pekat dengan air deionisasi dengan perbandingan volume 1:19, yang akan digunakan untuk mencuci pelat.larutan encer dapat disimpan pada suhu 4℃ selama 1 bulan.

Larutan3: solusi ekstraksi

Encerkan larutan ekstraksi pekat 2x dengan air deionisasi dalam perbandingan volume 1:1 (atau tergantung kebutuhan), yang akan digunakan untuk ekstraksi sampel.Larutan encer ini dapat disimpan selama 1 bulan pada suhu 4℃.

Persiapan Sampel

8.1 Pemberitahuan dan tindakan pencegahan untuk pengguna sebelum pengoperasian

(a) Silakan gunakan tip satu kali dalam proses percobaan, dan ubah tip saat menyerap reagen yang berbeda.

(b) Pastikan semua instrumen percobaan bersih, jika tidak maka akan mempengaruhi hasil pengujian.

8.2Sampel madu

----- Timbang sampel madu 2g±0,05g ke dalam tabung centrifuge polystyrene 50ml,

-----Tambahkan 2ml 0,2 M larutan asam klorida (Larutan 1), vortex untuk mencampurnya sepenuhnya, lalu tambahkan 8ml metilen klorida, kocok dengan pengocok selama 5 menit hingga larut sepenuhnya;

----- Centrifuge selama 10 menit, setidaknya 3000g pada suhu kamar (20-25 ℃);

----- Buang fase supernatan, ambil 2 ml larutan organik substrat ke dalam tabung gelas 10 ml. Keringkan substrat di bawah penangas air aliran Nitrogen (50-60℃)

----- Tambahkan 1 ml n-heksana, vortex selama 30 detik, lalu tambahkan 1 ml larutan ekstraksi (larutan 3), vortex lagi selama 1 menit.Centrifuge selama 5 menit, setidaknya 3000g pada suhu kamar (20-25 ℃);

-----Hapus fase supernatan, ambil 50ml untuk pengujian;

9. Proses pengujian

9.1 Pemberitahuan sebelum pengujian

9.1.1 Pastikan semua reagen dan microwell berada pada suhu kamar (20-25℃).

9.1.2 Kembalikan semua sisa reagen ke 2-8℃ segera setelah digunakan.

9.1.3 Mencuci sumur mikro dengan benar merupakan langkah penting dalam proses pengujian;itu adalah faktor penting untuk pengulangan analisis ELISA.

9.1.4 Hindari cahaya dan tutupi microwell selama inkubasi.

9.2 Langkah Pengujian

9.2.1 Keluarkan semua reagen pada suhu kamar (20-25℃) selama lebih dari 30 menit, homogenkan sebelum digunakan.

9.2.2 Keluarkan microwell yang diperlukan dan segera kembalikan sisanya ke dalam kantong zip-lock pada suhu 2-8℃.

9.2.3 Larutan pencuci yang telah diencerkan harus dihangatkan kembali pada suhu kamar sebelum digunakan.

9.2.4Nomor:Nomor setiap posisi microwell dan semua standar dan sampel harus dijalankan dalam rangkap dua.Catat standar dan posisi sampel.

9.2.5Tambahkan larutan/sampel standar:Tambahkan 50 µl larutan standar atau sampel yang telah disiapkan ke sumur yang sesuai.Tambahkan 50µl larutan antibodi.Aduk perlahan dengan mengocok piring secara manual dan inkubasi selama 30 menit pada suhu 25℃ dengan penutup.

9.2.6Mencuci:Lepaskan penutup dengan lembut dan murnikan cairan dari sumur dan bilas microwell dengan larutan pencuci encer 250µl (larutan 2) dengan interval 10 detik sebanyak 4-5 kali.Serap sisa air dengan kertas penyerap (sisa gelembung udara dapat dihilangkan dengan ujung yang tidak terpakai).

9.2.8.Konjugasi enzim:Tambahkan larutan konjugat enzim 100ml ke masing-masing sumur, Campur perlahan dengan mengocok pelat secara manual dan inkubasi selama 30 menit pada suhu 25℃ dengan penutup.Ulangi langkah mencuci lagi.

9.2.8Pewarnaan:Tambahkan 50µl larutan A dan 50µl larutan B ke masing-masing well.Aduk perlahan dengan menggoyangkan plate secara manual dan inkubasi selama 15 menit pada suhu 25℃ dengan penutup (lihat 12.8).

9.2.9Ukuran:Tambahkan 50µl stop solution ke masing-masing well.Campur perlahan dengan mengocok pelat secara manual dan ukur absorbansi pada 450nm terhadap blanko udara (Ukuran yang disarankan dengan panjang gelombang ganda 450/630nm. Baca hasilnya dalam 5 menit setelah penambahan stop solution.) (Kami juga dapat mengukur dengan penglihatan tanpa stop solution singkatnya instrumen ELIASA)

Hasil

10.1 Persentase absorbansi

Nilai rata-rata dari nilai absorbansi yang diperoleh untuk standar dan sampel dibagi dengan nilai absorbansi standar pertama (standar nol) dan dikalikan 100%.Standar nol dengan demikian dibuat sama dengan 100% dan nilai absorbansi dikutip dalam persentase.

Absorbansi (%) = B/B0 ×100%

B ——standar absorbansi (atau sampel)

B0 ——standar nol absorbansi

10.2 Kurva Standar

Untuk menggambar kurva standar: Ambil nilai absorbansi standar sebagai sumbu y, semi logaritmik dari konsentrasi larutan standar flumekuin (ppb) sebagai sumbu x.

--- Ituflumequinekonsentrasi setiap sampel (ppb), yang dapat dibaca dari kurva kalibrasi, dikalikan dengan kelipatan pengenceran yang sesuai dari setiap sampel yang diikuti, dan diperoleh konsentrasi sampel yang sebenarnya.

Untuk reduksi data kit ELISA, perangkat lunak khusus telah dikembangkan, yang dapat disediakan berdasarkan permintaan.

11. Sensitivitas, akurasi dan presisi

Uji Sensitivitas0,3ppb

Faktor pengenceran Sampel Madu: 2

Batas deteksi

Sampel madu------------------------------------------------ -1ppb

Ketepatan

Sampel madu --------------------------------------------- 90±20 %

Presisi

Koefisien variasi kit ELISA kurang dari 10%.

12. Perhatikan

12.1 Nilai rata-rata nilai absorbansi yang diperoleh untuk standar dan sampel akan berkurang jika reagen dan sampel belum diatur ke suhu kamar (20-25℃).

12.2 Jangan biarkan sumur mikro mengering di antara langkah-langkah untuk menghindari pengulangan yang tidak berhasil dan operasikan langkah berikutnya segera setelah mengetuk penahan sumur mikro.

12.3.Homogenkan setiap reagen sebelum digunakan.

12.4.Jauhkan kulit Anda dari stop solution karena itu adalah 2M H2SO4larutan.

12.5 Jangan gunakan kit yang sudah kadaluarsa.Jangan menukar reagen dari batch yang berbeda, karena akan menurunkan sensitivitas.

12.6 Kondisi penyimpanan:

Simpan kit ELISA pada 2-8 ℃, jangan dibekukan.Seal rest microwell plate Hindari sinar matahari langsung selama semua inkubasi.Menutup pelat mikrotiter dianjurkan.

12.7 Indikasi reagen rusak:

Larutan substrat harus ditinggalkan jika berubah warna.

Reagen dapat menjadi buruk jika nilai absorbansi (450/630nm) dari standar nol kurang dari 0,5 (A450nm<0,5).

12.8 Reaksi pewarnaan membutuhkan 15 menit setelah menambahkan Larutan A dan Larutan B. Dan Anda dapat memperpanjang waktu inkubasi berkisar dari 20 menit hingga lebih jika warnanya terlalu terang untuk ditentukan.Jangan pernah melebihi 25 menit, Sebaliknya, persingkat waktu inkubasi dengan benar.

12.9 Suhu reaksi optimal adalah 25℃.Suhu yang lebih tinggi atau lebih rendah akan menyebabkan perubahan nilai sensitivitas dan absorbansi.

13. Penyimpanan

Kondisi penyimpanan: 2-8 ℃.

Masa penyimpanan: 12 bulan.


  • Sebelumnya:
  • Lanjut:

  • Tulis pesan Anda di sini dan kirimkan kepada kami