ഉൽപ്പന്നം

ടെസ്റ്റ് തത്വം

ഈ കിറ്റ് പരോക്ഷ-മത്സരാത്മക ELISA സാങ്കേതികവിദ്യയെ അടിസ്ഥാനമാക്കിയുള്ളതാണ്.മൈക്രോടൈറ്റർ കിണറുകൾ കപ്ലിംഗ് ആന്റിജൻ കൊണ്ട് പൊതിഞ്ഞതാണ്.ഫ്ലൂമെക്വിൻസാമ്പിളിലെ അവശിഷ്ടങ്ങൾ ആന്റിബോഡിക്കായി മൈക്രോടൈറ്റർ പ്ലേറ്റിൽ പൊതിഞ്ഞ ആന്റിജനുമായി മത്സരിക്കുന്നു.ആന്റിബോഡി എന്ന് ലേബൽ ചെയ്ത എൻസൈം ചേർത്ത ശേഷം, നിറം കാണിക്കാൻ TMB സബ്‌സ്‌ട്രേറ്റ് ഉപയോഗിക്കുന്നു.സാമ്പിളിന്റെ ആഗിരണവും അതിലെ ടെട്രാസൈക്ലിൻ റെസിഡുമായി പ്രതികൂലമായി ബന്ധപ്പെട്ടിരിക്കുന്നു, സ്റ്റാൻഡേർഡ് കർവുമായി താരതമ്യപ്പെടുത്തിയ ശേഷം, നേർപ്പിച്ച ഗുണിതം കൊണ്ട് ഗുണിച്ചാൽ, സാമ്പിളിലെ ഫ്ലൂമെക്വിൻ അവശിഷ്ടത്തിന്റെ അളവ് കണക്കാക്കാം.

അപേക്ഷകൾ

തേനിലെ ഫ്ലൂമെക്വിൻ അവശിഷ്ടത്തിന്റെ അളവും ഗുണപരവുമായ വിശകലനത്തിൽ ഈ കിറ്റ് ഉപയോഗിക്കാം.

ക്രോസ് പ്രതികരണങ്ങൾ

ഫ്ലൂമെക്വിൻ …………………………………………………… 100%

ആവശ്യമുള്ള വസ്തുക്കൾ

ഉപകരണങ്ങൾ

┅┅മൈക്രോടൈറ്റർ പ്ലേറ്റ് സ്പെക്ട്രോഫോട്ടോമീറ്റർ (450nm/630nm)

┅┅ഹോമോജെനൈസർ അല്ലെങ്കിൽ വയറുവേദന

┅┅ഷേക്കർ

┅┅വോർട്ടക്സ് മിക്സർ

┅┅സെൻട്രിഫ്യൂജ്

┅┅അനലിറ്റിക്കൽ ബാലൻസ് (ഇൻഡക്‌ടൻസ്: 0.01 ഗ്രാം)

┅┅ഗ്രാജ്വേറ്റ് ചെയ്ത പൈപ്പറ്റ്: 15ml

┅┅റബ്ബർ പൈപ്പറ്റ് ബൾബ്

┅┅പോളിസ്റ്റൈറൈൻ സെൻട്രിഫ്യൂജ് ട്യൂബ്: 15ml, 50ml

┅┅ഗ്ലാസ് ടെസ്റ്റ് ട്യൂബ്: 10 മില്ലി

┅┅മൈക്രോപിപെറ്റുകൾ: 20ml-200ml, 100ml -10000ml,

250 മില്ലി - മൾട്ടിപിപ്പെറ്റ്

റിയാഗന്റുകൾ

┅┅n-hexane(AR)

┅┅മെത്തിലീൻ ക്ലോറൈഡ്(AR)

┅┅അസെറ്റോണിട്രൈൽ(AR)

┅┅ഡീയോണൈസ്ഡ് വെള്ളം

-----സാന്ദ്രീകൃത ഹൈഡ്രോക്ലോറിക് ആസിഡ്(AR)

കിറ്റ് ഘടകങ്ങൾ

● ആന്റിജൻ പൂശിയ 96 കിണറുകളുള്ള മൈക്രോടൈറ്റർ പ്ലേറ്റ്

● സ്റ്റാൻഡേർഡ് സൊല്യൂഷനുകൾ (6 കുപ്പികൾ×1ml/കുപ്പി)

0ppb, 0.3ppb, 1.2ppb, 4.8ppb, 19.2ppb, 76.8ppb

● ഉയർന്ന സാന്ദ്രതയുള്ള സ്റ്റാൻഡേർഡ് നിയന്ത്രണം:(1ml/കുപ്പി)

………………………………………………………………100ppb

● എൻസൈം സംയോജനം 12ml……………………………… ചുവന്ന തൊപ്പി

● ആന്റിബോഡി ലായനി 7ml ……………………………………..പച്ച തൊപ്പി

● ലായനി A 7ml………………………………………………..വൈറ്റ് ക്യാപ്

● ലായനി B 7ml …………………………………………. ചുവപ്പ് തൊപ്പി

● സ്റ്റോപ്പ് ലായനി 7ml ………………………………………… മഞ്ഞ തൊപ്പി

● 20Xസാന്ദ്രീകൃത വാഷ് ലായനി 40 മില്ലി

…………………………………………….. സുതാര്യമായ തൊപ്പി

●2X എക്സ്ട്രാക്ഷൻ സൊല്യൂഷൻ 50ml………………………… നീല തൊപ്പി

റിയാക്ടറുകൾ തയ്യാറാക്കൽ

7.1 തേൻ സാമ്പിൾ

പരിഹാരം 1 : 0.2 എം ഹൈഡ്രോക്ലോറിക് ആസിഡ് ലായനി

ഭാരം 41.5ml സാന്ദ്രീകൃത ഹൈഡ്രോക്ലോറിക് ആസിഡ്, ഡീയോണൈസ്ഡ് വെള്ളത്തിൽ 500 മില്ലി ലയിപ്പിക്കുക.

പരിഹാരം 2: പരിഹാരം കഴുകുക

സാന്ദ്രീകൃത വാഷ് ലായനി 1:19 എന്ന അനുപാതത്തിൽ ഡീയോണൈസ്ഡ് വെള്ളത്തിൽ ലയിപ്പിക്കുക, ഇത് പ്ലേറ്റുകൾ കഴുകാൻ ഉപയോഗിക്കും.നേർപ്പിച്ച ലായനി 4 ഡിഗ്രിയിൽ 1 മാസത്തേക്ക് സൂക്ഷിക്കാം.

പരിഹാരം3: വേർതിരിച്ചെടുക്കൽ പരിഹാരം

സാമ്പിൾ വേർതിരിച്ചെടുക്കാൻ ഉപയോഗിക്കുന്ന 1:1 വോളിയം റേഷനിൽ (അല്ലെങ്കിൽ ആവശ്യകതയെ ആശ്രയിച്ച്) 2× സാന്ദ്രീകൃത എക്സ്ട്രാക്ഷൻ ലായനി ഡീയോണൈസ്ഡ് വെള്ളത്തിൽ ലയിപ്പിക്കുക.ഈ നേർപ്പിച്ച ലായനി 4 ഡിഗ്രിയിൽ 1 മാസത്തേക്ക് സൂക്ഷിക്കാം.

മാതൃകാ തയ്യാറെടുപ്പുകൾ

8.1 പ്രവർത്തനത്തിന് മുമ്പ് ഉപയോക്താക്കൾക്കുള്ള അറിയിപ്പും മുൻകരുതലുകളും

(എ) പരീക്ഷണ പ്രക്രിയയിൽ ദയവായി ഒറ്റത്തവണ നുറുങ്ങുകൾ ഉപയോഗിക്കുക, വ്യത്യസ്ത റിയാജന്റ് ആഗിരണം ചെയ്യുമ്പോൾ നുറുങ്ങുകൾ മാറ്റുക.

(ബി) എല്ലാ പരീക്ഷണ ഉപകരണങ്ങളും വൃത്തിയുള്ളതാണെന്ന് ഉറപ്പാക്കുക, അല്ലാത്തപക്ഷം അത് പരിശോധനാ ഫലത്തെ ബാധിക്കും.

8.2തേൻ സാമ്പിൾ

-----50ml പോളിസ്റ്റൈറൈൻ സെൻട്രിഫ്യൂജ് ട്യൂബിലേക്ക് 2g±0.05g തേൻ സാമ്പിൾ തൂക്കുക,

-----2ml 0.2 M ഹൈഡ്രോക്ലോറിക് ആസിഡ് ലായനി (പരിഹാരം 1) ചേർക്കുക, വോർട്ടക്സ് പൂർണ്ണമായി ഇളക്കുക, തുടർന്ന് 8ml മെത്തിലീൻ ക്ലോറൈഡ് ചേർക്കുക, പൂർണ്ണമായി അലിഞ്ഞുചേരാൻ 5 മിനിറ്റ് ഷേക്കർ ഉപയോഗിച്ച് കുലുക്കുക;

-----10 മിനിറ്റിനുള്ള സെൻട്രിഫ്യൂജ്, ഊഷ്മാവിൽ (20-25℃) കുറഞ്ഞത് 3000 ഗ്രാം;

-----അതിശക്തമായ ഘട്ടം നീക്കം ചെയ്യുക, 10 മില്ലി ഗ്ലാസ് ട്യൂബിലേക്ക് 2 മില്ലി സബ്‌സ്‌ട്രേറ്റ് ഓർഗാനിക് ലായനി എടുക്കുക. നൈട്രജൻ ഒഴുക്കിന്റെ (50-60℃) വാട്ടർ ബാത്തിന് കീഴിൽ സബ്‌സ്‌റ്റേറ്റ് ഉണക്കുക.

-----1 മില്ലി എൻ-ഹെക്സെയ്ൻ ചേർക്കുക, 30 സെക്കന്റിനുള്ളിൽ വോർട്ടക്സ് ചേർക്കുക, തുടർന്ന് 1 മില്ലി എക്സ്ട്രാക്ഷൻ ലായനി ചേർക്കുക (പരിഹാരം 3), 1 മിനിറ്റ് നേരത്തേക്ക് വീണ്ടും വോർട്ടക്സ്.5മിനിറ്റിനുള്ള സെൻട്രിഫ്യൂജ്, ഊഷ്മാവിൽ (20-25℃) കുറഞ്ഞത് 3000 ഗ്രാം;

-----സൂപ്പർനാറ്റന്റ് ഘട്ടം നീക്കം ചെയ്യുക, പരിശോധനയ്ക്കായി 50 മില്ലി എടുക്കുക;

9. വിലയിരുത്തൽ പ്രക്രിയ

9.1 വിലയിരുത്തുന്നതിന് മുമ്പ് ശ്രദ്ധിക്കുക

9.1.1 എല്ലാ റിയാക്ടറുകളും മൈക്രോവെല്ലുകളും എല്ലാം ഊഷ്മാവിൽ (20-25℃) ആണെന്ന് ഉറപ്പാക്കുക.

9.1.2 ഉപയോഗിച്ചതിന് ശേഷം ബാക്കിയുള്ള എല്ലാ റിയാക്ടറുകളും 2-8℃ ലേക്ക് തിരികെ നൽകുക.

9.1.3 മൈക്രോവെല്ലുകൾ ശരിയായി കഴുകുന്നത് പരിശോധനാ പ്രക്രിയയിലെ ഒരു പ്രധാന ഘട്ടമാണ്;ELISA വിശകലനത്തിന്റെ ആവർത്തനത്തിന്റെ സുപ്രധാന ഘടകമാണിത്.

9.1.4 ഇൻകുബേഷൻ സമയത്ത് വെളിച്ചം ഒഴിവാക്കുകയും മൈക്രോവെല്ലുകളെ മൂടുകയും ചെയ്യുക.

9.2 വിലയിരുത്തൽ ഘട്ടങ്ങൾ

9.2.1 30 മിനിറ്റിൽ കൂടുതൽ ഊഷ്മാവിൽ (20-25℃) എല്ലാ റിയാക്ടറുകളും എടുക്കുക, ഉപയോഗിക്കുന്നതിന് മുമ്പ് ഏകതാനമാക്കുക.

9.2.2 ആവശ്യമായ മൈക്രോവെല്ലുകൾ പുറത്തെടുക്കുക, ബാക്കിയുള്ളവ 2-8℃-ൽ ഉടൻ സിപ്പ്-ലോക്ക് ബാഗിലേക്ക് തിരികെ നൽകുക.

9.2.3 നേർപ്പിച്ച വാഷ് ലായനി ഉപയോഗിക്കുന്നതിന് മുമ്പ് ഊഷ്മാവിൽ വീണ്ടും ചൂടാക്കണം.

9.2.4നമ്പർ:ഓരോ മൈക്രോവെൽ സ്ഥാനവും അക്കമിട്ട് എല്ലാ മാനദണ്ഡങ്ങളും സാമ്പിളുകളും തനിപ്പകർപ്പായി പ്രവർത്തിപ്പിക്കണം.മാനദണ്ഡങ്ങളും സാമ്പിളുകളുടെ സ്ഥാനങ്ങളും രേഖപ്പെടുത്തുക.

9.2.5സാധാരണ പരിഹാരം/സാമ്പിൾ ചേർക്കുക:50 µl സാധാരണ ലായനി അല്ലെങ്കിൽ തയ്യാറാക്കിയ സാമ്പിൾ അനുബന്ധ കിണറുകളിലേക്ക് ചേർക്കുക.50µl ആന്റിബോഡി ലായനി ചേർക്കുക.പ്ലേറ്റ് സ്വമേധയാ കുലുക്കി, 25 ഡിഗ്രിയിൽ 30 മിനിറ്റ് ഇൻകുബേറ്റ് ചെയ്യുക.

9.2.6കഴുകുക:കവർ സൌമ്യമായി നീക്കം ചെയ്ത് കിണറ്റിൽ നിന്ന് ദ്രാവകം ശുദ്ധീകരിക്കുക, മൈക്രോവെല്ലുകൾ 250µl നേർപ്പിച്ച വാഷ് ലായനി (പരിഹാരം 2) ഉപയോഗിച്ച് 10 സെക്കൻഡ് ഇടവിട്ട് 4-5 തവണ കഴുകുക.ആഗിരണം ചെയ്യാവുന്ന പേപ്പർ ഉപയോഗിച്ച് ശേഷിക്കുന്ന വെള്ളം ആഗിരണം ചെയ്യുക (ബാക്കിയുള്ള എയർ ബബിൾ ഉപയോഗിക്കാത്ത ടിപ്പ് ഉപയോഗിച്ച് ഇല്ലാതാക്കാം).

9.2.8.എൻസൈം സംയോജനം:ഓരോ കിണറിലും 100 മില്ലി എൻസൈം കൺജഗേറ്റ് ലായനി ചേർക്കുക, പ്ലേറ്റ് സ്വമേധയാ കുലുക്കി, 30 മിനിറ്റ് 25 ഡിഗ്രിയിൽ കവർ ഉപയോഗിച്ച് ഇൻകുബേറ്റ് ചെയ്യുക.വീണ്ടും കഴുകൽ ഘട്ടം ആവർത്തിക്കുക.

9.2.8നിറം:ഓരോ കിണറിലും 50µl ലായനി എയും 50µl ലായനി ബിയും ചേർക്കുക.പ്ലേറ്റ് സ്വമേധയാ കുലുക്കി 15 മിനിറ്റ് 25 ഡിഗ്രി സെൽഷ്യസിൽ ഇൻകുബേറ്റ് ചെയ്യുക (12.8 കാണുക).

9.2.9അളക്കുക:ഓരോ കിണറിലും 50µl സ്റ്റോപ്പ് ലായനി ചേർക്കുക.പ്ലേറ്റ് സ്വമേധയാ കുലുക്കി മൃദുവായി ഇളക്കുക, വായു ശൂന്യതയ്‌ക്കെതിരെ 450nm-ൽ ആഗിരണം അളക്കുക (ഇത് 450/630nm എന്ന ഇരട്ട തരംഗദൈർഘ്യത്തോടെ അളക്കാൻ നിർദ്ദേശിക്കുന്നു. സ്റ്റോപ്പ് ലായനി ചേർത്തതിന് ശേഷം 5 മിനിറ്റിനുള്ളിൽ ഫലം വായിക്കുക. ) (കാഴ്ചയിലൂടെയും നമുക്ക് അളക്കാം. ELIASA ഉപകരണത്തിന്റെ ചുരുക്കത്തിൽ നിർത്താതെയുള്ള പരിഹാരം)

ഫലം

10.1 ശതമാനം ആഗിരണം

സ്റ്റാൻഡേർഡുകൾക്കും സാമ്പിളുകൾക്കുമായി ലഭിച്ച ആഗിരണം മൂല്യങ്ങളുടെ ശരാശരി മൂല്യങ്ങൾ ആദ്യ സ്റ്റാൻഡേർഡിന്റെ (സീറോ സ്റ്റാൻഡേർഡ്) ആഗിരണം മൂല്യം കൊണ്ട് ഹരിക്കുകയും 100% കൊണ്ട് ഗുണിക്കുകയും ചെയ്യുന്നു.പൂജ്യം സ്റ്റാൻഡേർഡ് അങ്ങനെ 100% ന് തുല്യമാക്കുകയും ആഗിരണം മൂല്യങ്ങൾ ശതമാനത്തിൽ ഉദ്ധരിക്കുകയും ചെയ്യുന്നു.

ആഗിരണം (%) = B/B0 × 100%

B ——ആഗിരണ നിലവാരം (അല്ലെങ്കിൽ സാമ്പിൾ)

B0 ——ആഗിരണ പൂജ്യം നിലവാരം

10.2 സ്റ്റാൻഡേർഡ് കർവ്

ഒരു സ്റ്റാൻഡേർഡ് കർവ് വരയ്ക്കാൻ: സ്റ്റാൻഡേർഡുകളുടെ ആഗിരണം മൂല്യം y-ആക്സിസ് ആയി എടുക്കുക, ഫ്ലൂമെക്വീൻ സ്റ്റാൻഡേർഡ് സൊല്യൂഷന്റെ (പിപിബി) കോൺസൺട്രേഷന്റെ സെമി ലോഗരിഥമിക് x-ആക്സിസ് ആയി എടുക്കുക.

--- ദിഫ്ലൂമെക്വിൻകാലിബ്രേഷൻ വക്രത്തിൽ നിന്ന് വായിക്കാൻ കഴിയുന്ന ഓരോ സാമ്പിളിന്റെയും (പിപിബി) കോൺസൺട്രേഷൻ, പിന്തുടരുന്ന ഓരോ സാമ്പിളിന്റെയും അനുബന്ധ നേർപ്പിക്കൽ ഗുണിതം കൊണ്ട് ഗുണിക്കപ്പെടുന്നു, കൂടാതെ സാമ്പിളിന്റെ യഥാർത്ഥ സാന്ദ്രത ലഭിക്കുന്നു.

ELISA കിറ്റുകളുടെ ഡാറ്റ കുറയ്ക്കുന്നതിന്, പ്രത്യേക സോഫ്‌റ്റ്‌വെയർ വികസിപ്പിച്ചെടുത്തിട്ടുണ്ട്, അത് ആവശ്യാനുസരണം നൽകാം.

11. സംവേദനക്ഷമത, കൃത്യത, കൃത്യത

ടെസ്റ്റ് സെൻസിറ്റിവിറ്റി：0.3ppb

തേൻ സാമ്പിൾ നേർപ്പിക്കൽ ഘടകം: 2

കണ്ടെത്തൽ പരിധി

തേൻ സാമ്പിൾ ---------------------------------------------- -1ppb

കൃത്യത

തേൻ സാമ്പിൾ ------------------------------------------- 90±20 %

കൃത്യത

ELISA കിറ്റിന്റെ വേരിയേഷൻ കോഫിഫിഷ്യന്റ് 10% ൽ താഴെയാണ്.

12. ശ്രദ്ധിക്കുക

12.1 റിയാക്ടറുകളും സാമ്പിളുകളും റൂം ടെമ്പറേച്ചറിലേക്ക് (20-25℃) നിയന്ത്രിച്ചിട്ടില്ലെങ്കിൽ, സ്റ്റാൻഡേർഡുകൾക്കും സാമ്പിളുകൾക്കും ലഭിച്ച ആഗിരണം മൂല്യങ്ങളുടെ ശരാശരി മൂല്യങ്ങൾ കുറയും.

12.2 ആവർത്തനങ്ങൾ പരാജയപ്പെടാതിരിക്കാൻ ഘട്ടങ്ങൾക്കിടയിൽ മൈക്രോവെല്ലുകൾ ഉണങ്ങാൻ അനുവദിക്കരുത്, മൈക്രോവെൽ ഹോൾഡറിൽ ടാപ്പ് ചെയ്‌ത ഉടൻ തന്നെ അടുത്ത ഘട്ടം പ്രവർത്തിപ്പിക്കുക.

12.3ഉപയോഗിക്കുന്നതിന് മുമ്പ് ഓരോ റിയാക്ടറും ഏകീകരിക്കുക.

12.4സ്റ്റോപ്പ് സൊല്യൂഷനിൽ നിന്ന് നിങ്ങളുടെ ചർമ്മത്തെ അകറ്റി നിർത്തുക, കാരണം അത് 2M H ആണ്₂SO₄പരിഹാരം.

12.5 കാലഹരണപ്പെട്ട കിറ്റുകൾ ഉപയോഗിക്കരുത്.വ്യത്യസ്ത ബാച്ചുകളുടെ റിയാക്ടറുകൾ കൈമാറ്റം ചെയ്യരുത്, കാരണം ഇത് സംവേദനക്ഷമത കുറയ്ക്കും.

12.6 സ്റ്റോറേജ് അവസ്ഥ:

ELISA കിറ്റുകൾ 2-8℃-ൽ സൂക്ഷിക്കുക, ഫ്രീസ് ചെയ്യരുത്.സീൽ റെസ്റ്റ് മൈക്രോവെൽ പ്ലേറ്റുകൾ എല്ലാ ഇൻകുബേഷൻ സമയത്തും നേരായ സൂര്യപ്രകാശം ഒഴിവാക്കുക.മൈക്രോടൈറ്റർ പ്ലേറ്റുകൾ മൂടുന്നത് ശുപാർശ ചെയ്യുന്നു.

12.7 റിയാക്ടറുകൾ മോശമാകുന്നതിനുള്ള സൂചനകൾ:

സബ്‌സ്‌ട്രേറ്റ് ലായനി നിറമാകുകയാണെങ്കിൽ ഉപേക്ഷിക്കണം.

സീറോ സ്റ്റാൻഡേർഡിന്റെ ആഗിരണം മൂല്യം (450/630nm) 0.5 (A450nm＜0.5) ൽ കുറവാണെങ്കിൽ റിയാഗന്റുകൾ മോശമായേക്കാം.

12.8 സൊല്യൂഷൻ എയും സൊല്യൂഷൻ ബിയും ചേർത്തതിന് ശേഷം കളറേഷൻ പ്രതികരണത്തിന് 15 മിനിറ്റ് ആവശ്യമാണ്. നിറം നിർണ്ണയിക്കാൻ കഴിയാത്തത്ര നേരിയതാണെങ്കിൽ നിങ്ങൾക്ക് ഇൻകുബേഷൻ സമയം 20 മിനിറ്റിൽ നിന്ന് കൂടുതൽ നീട്ടാം.25 മിനിറ്റിൽ കൂടരുത്, നേരെമറിച്ച്, ഇൻകുബേഷൻ സമയം ശരിയായി ചുരുക്കുക.

12.9 ഒപ്റ്റിമൽ പ്രതികരണ താപനില 25 ° ആണ്.ഉയർന്നതോ താഴ്ന്നതോ ആയ താപനില സംവേദനക്ഷമതയുടെയും ആഗിരണം മൂല്യങ്ങളുടെയും മാറ്റങ്ങളിലേക്ക് നയിക്കും.

13. സംഭരണം

സ്റ്റോറേജ് അവസ്ഥ: 2-8℃.

സംഭരണ ​​കാലയളവ്: 12 മാസം.