produkt

Zasada testu

Ten zestaw jest oparty na pośrednio-konkurencyjnej technologii ELISA.Studzienki do mikromiareczkowania powleka się antygenem sprzęgającym.Flumechinapozostałość w próbce konkuruje z antygenem opłaszczonym na płytce do mikromiareczkowania o przeciwciało.Po dodaniu anty-przeciwciała znakowanego enzymem, do pokazania koloru stosuje się substrat TMB.Absorbancja próbki jest ujemnie związana z obecnością w niej tetracykliny, po porównaniu z krzywą standardową, pomnożoną przez wielokrotność rozcieńczenia, można obliczyć ilość pozostałości flumechiny w próbce.

Aplikacje

Zestaw ten może być wykorzystany do ilościowej i jakościowej analizy pozostałości flumechiny w miodzie.

Reakcje krzyżowe

Flumechina …………………..……………………… 100%

Wymagane materiały

Urządzenia

┅┅ Spektrofotometr do mikropłytek (450nm/630nm)

┅┅Homogenizator lub Stomatolog

┅┅Wytrząsarka

┅┅Wytrząsarka typu Vortex

┅┅Wirówka

┅┅Waga analityczna (indukcyjność: 0,01g)

┅┅Pipeta z podziałką: 15ml

┅┅Gumowa gruszka do pipety

┅┅ Polistyrenowa probówka do wirowania: 15 ml, 50 ml

┅┅ Szklana probówka: 10 ml

┅┅Mikropipety: 20ml-200ml, 100ml -10000ml,

250ml -wielipipeta

Odczynniki

┅┅n-heksan(AR)

┅┅Chlorek metylenu(AR)

┅┅Acetonitryl(AR)

┅┅Woda dejonizowana

----- Stężony kwas solny (AR)

Elementy zestawu

● Płytka do mikromiareczkowania z 96 dołkami opłaszczonymi antygenem

● Standardowe roztwory (6 butelek × 1 ml/butelkę)

0 ppb, 0,3 ppb, 1,2 ppb, 4,8 ppb, 19,2 ppb, 76,8 ppb

● Standardowa kontrola o wysokim stężeniu:(1ml/butelkę)

……………………………100 ppb

● Koniugat enzymu 12ml………………………... czerwona zatyczka

● Roztwór przeciwciał 7ml …………..……..….…..zielona zakrętka

● Roztwór A 7ml……………………..………..biała zakrętka

● Roztwór B 7ml …………….…………..………… czerwona zakrętka

● Roztwór zatrzymujący 7ml ……………………..………żółta zatyczka

● 20XSkoncentrowany roztwór do mycia 40ml

…………..…..przezroczysta nasadka

●2X Roztwór do ekstrakcji 50ml …………………… niebieska zakrętka

Przygotowanie odczynników

7.1 Próbka miodu

Roztwór 1: 0,2 M roztwór kwasu solnego

Waga 41,5 ml Stężony kwas solny rozcieńczyć wodą dejonizowaną do 500 ml.

Rozwiązanie 2: Roztwór do płukania

Stężony roztwór płuczący rozcieńczyć wodą dejonizowaną w stosunku objętościowym 1:19, która będzie używana do mycia płytek.rozcieńczony roztwór można przechowywać w temperaturze 4 ℃ przez 1 miesiąc.

Rozwiązanie3: roztwór do ekstrakcji

Rozcieńczyć 2×stężony roztwór ekstrakcyjny wodą dejonizowaną w stosunku objętościowym 1:1 (lub w zależności od wymagań), który będzie użyty do ekstrakcji próbki.Ten rozcieńczony roztwór można przechowywać przez 1 miesiąc w temperaturze 4 ℃.

Przykładowe preparaty

8.1 Uwaga i środki ostrożności dla użytkowników przed rozpoczęciem pracy

(a) Proszę używać jednorazowych końcówek w trakcie eksperymentu i zmieniać końcówki, gdy absorbują inny odczynnik.

(b) Upewnij się, że wszystkie instrumenty eksperymentalne są czyste, w przeciwnym razie wpłynie to na wynik testu.

8.2Próbka miodu

----- Odważ 2 g ± 0,05 g próbki miodu do 50 ml polistyrenowej probówki wirówkowej,

-----Dodaj 2 ml 0,2 M roztworu kwasu chlorowodorowego (roztwór 1), worteksuj, aby całkowicie wymieszać, następnie dodaj 8 ml chlorku metylenu, wstrząsaj wytrząsarką przez 5 minut, aby całkowicie się rozpuścić;

----- Wirować przez 10 min, co najmniej 3000 g w temperaturze pokojowej (20-25 ℃);

----- Usuń fazę supernatantu, weź 2 ml roztworu organicznego substratu do 10 ml szklanej probówki. wysusz substan pod kąpielą wodną przepływu azotu (50-60 ℃)

----- Dodaj 1 ml n-heksanu, wiruj przez 30 sekund, następnie dodaj 1 ml roztworu ekstrakcyjnego (roztwór 3), ponownie wiruj przez 1 minutę.Wirować przez 5 minut, co najmniej 3000 g w temperaturze pokojowej (20-25 ℃);

-----Usuń fazę supernatantu, pobierz 50 ml do testu;

9. Proces testowy

9.1 Uwaga przed testem

9.1.1 Upewnij się, że wszystkie odczynniki i mikrostudzienki mają temperaturę pokojową (20-25℃).

9.1.2 Natychmiast po użyciu przywróć wszystkie pozostałe odczynniki do temperatury 2-8 ℃.

9.1.3 Prawidłowe płukanie mikrodołków jest ważnym krokiem w procesie oznaczania;jest to istotny czynnik powtarzalności analizy ELISA.

9.1.4 Unikać światła i przykrywać mikrostudzienki podczas inkubacji.

9.2 Etapy testu

9.2.1 Wyjmij wszystkie odczynniki w temperaturze pokojowej (20-25℃) na ponad 30 minut, homogenizuj przed użyciem.

9.2.2 Wyjmij potrzebne mikrodołki i natychmiast włóż resztę do torebki strunowej w temperaturze 2-8 ℃.

9.2.3 Przed użyciem rozcieńczony roztwór do przemywania należy ponownie ogrzać do temperatury pokojowej.

9.2.4Numer:Ponumerować każdą pozycję mikrostudzienki, a wszystkie wzorce i próbki należy analizować w dwóch powtórzeniach.Zanotuj pozycje wzorców i próbek.

9.2.5Dodaj roztwór wzorcowy/próbkę:Dodać 50 µl roztworu wzorcowego lub przygotowanej próbki do odpowiednich dołków.Dodać 50 µl roztworu przeciwciał.Delikatnie wymieszać poprzez ręczne potrząsanie płytką i inkubować przez 30 min w 25℃ pod przykryciem.

9.2.6Myć się:Delikatnie zdejmij pokrywę i oczyść płyn z dołków i przepłucz mikrodołki 250 µl rozcieńczonego roztworu do płukania (roztwór 2) w odstępach 10 s 4-5 razy.Zaabsorbuj pozostałą wodę papierem chłonnym (pozostałe pęcherzyki powietrza można usunąć nieużywaną końcówką).

9.2.8.Koniugat enzymu:Dodać 100 ml roztworu koniugatu enzymu do każdej studzienki, delikatnie wymieszać, ręcznie wstrząsając płytką i inkubować przez 30 min w 25℃ pod przykryciem.Powtórz krok prania ponownie.

9.2.8Ubarwienie:Dodaj 50 µl roztworu A i 50 µl roztworu B do każdego dołka.Delikatnie wymieszać poprzez ręczne potrząsanie płytką i inkubować przez 15 min w temperaturze 25℃ pod przykryciem (patrz 12.8).

9.2.9Mierzyć:Dodaj 50 µl roztworu zatrzymującego do każdego dołka.Delikatnie wymieszaj, wstrząsając płytką ręcznie i zmierz absorbancję przy 450 nm na ślepej próbie powietrza (Sugeruje się pomiar przy podwójnej długości fali 450/630 nm. Odczytaj wynik w ciągu 5 minut po dodaniu roztworu zatrzymującego.) (Możemy również zmierzyć wzrokowo bez rozwiązania zatrzymującego w skrócie instrumentu ELIASA)

Wyniki

10,1 Procent absorbancji

Średnie wartości absorbancji otrzymane dla wzorców i próbek dzieli się przez wartość absorbancji pierwszego wzorca (standard zerowy) i mnoży przez 100%.Standard zerowy jest zatem równy 100%, a wartości absorbancji są podawane w procentach.

Absorbancja (%) = B/B0 × 100%

B — — wzorzec absorbancji (lub próbka)

B0 ——wzorzec zerowej absorpcji

10.2 Krzywa standardowa

Aby narysować krzywą wzorcową: Przyjmij wartość absorbancji wzorców jako oś y, półlogarytmiczną ze stężenia roztworu wzorcowego flumechiny (ppb) jako oś x.

---flumechinastężenie każdej próbki (ppb), które można odczytać z krzywej kalibracji, mnoży się przez odpowiednią wielokrotność rozcieńczenia każdej próbki i uzyskuje się rzeczywiste stężenie próbki.

Do redukcji danych z zestawów ELISA opracowano specjalne oprogramowanie, które może być dostarczone na żądanie.

11. Czułość, dokładność i precyzja

Czułość testu：0,3 ppb

Współczynnik rozcieńczenia próbki miodu: 2

Granica wykrywalności

Próbka miodu------------------------------------------------ -1 ppb

Precyzja

Próbka miodu -------------------------------------------- 90±20 %

Precyzja

Współczynnik zmienności zestawu ELISA jest mniejszy niż 10%.

12. Uwaga

12.1 Średnie wartości absorbancji otrzymane dla wzorców i próbek zostaną obniżone, jeśli odczynniki i próbki nie zostaną doprowadzone do temperatury pokojowej (20-25℃).

12.2 Nie dopuścić do wyschnięcia mikrostudzienek pomiędzy kolejnymi etapami, aby uniknąć nieudanych powtórzeń i wykonać następny krok natychmiast po dotknięciu uchwytu mikrostudzienek.

12.3.Homogenizować każdy odczynnik przed użyciem.

12.4.Trzymaj skórę z dala od roztworu zatrzymującego, ponieważ jest to 2M H₂SO₄rozwiązanie.

12.5 Nie używaj przeterminowanych zestawów.Nie zamieniaj odczynników z różnych partii, ponieważ spowoduje to spadek czułości.

12.6 Warunki przechowywania:

Trzymaj zestawy ELISA w temperaturze 2-8 ℃, nie zamrażaj.Uszczelnij pozostałe płytki z mikrodołkami Unikaj bezpośredniego światła słonecznego podczas wszystkich inkubacji.Zaleca się przykrywanie płytek do mikromiareczkowania.

12.7 Oznaki zepsucia się odczynników:

Roztwór podłoża należy porzucić, jeśli zmieni kolor.

Odczynniki mogą ulec zepsuciu, jeśli wartość absorbancji (450/630nm) wzorca zerowego jest mniejsza niż 0,5 (A450nm <0,5).

12.8 Reakcja zabarwienia trwa 15 minut po dodaniu Roztworu A i Roztworu B. Można wydłużyć zakresy czasu inkubacji od 20 minut do więcej, jeśli kolor jest zbyt jasny, aby można go było określić.Nigdy nie przekraczaj 25 minut, wręcz przeciwnie, odpowiednio skróć czas inkubacji.

12.9 Optymalna temperatura reakcji wynosi 25℃.Wyższa lub niższa temperatura spowoduje zmianę wartości czułości i absorbancji.

13. Przechowywanie

Warunki przechowywania: 2-8 ℃.

Okres przechowywania: 12 miesięcy.