produto

Principio de proba

Este kit está baseado na tecnoloxía ELISA de competición indirecta.Os pozos de microtitulación están recubertos de antíxeno de acoplamento.Flumequinao residuo da mostra compite co antíxeno revestido na placa de microtitulación polo anticorpo.Despois da adición de anticorpos marcados con encimas, utilízase o substrato de TMB para mostrar a cor.A absorción da mostra está negativamente relacionada coa tetraciclina que reside nela, despois de comparar coa curva estándar, multiplicada polo múltiplo de dilución, pódese calcular a cantidade de residuos de flumequina na mostra.

Aplicacións

Este kit pódese utilizar na análise cuantitativa e cualitativa dos residuos de flumequina no mel.

Reaccións cruzadas

Flumequina ……………………………………………… 100%

Materiais necesarios

Equipos

┅┅Espectrofotómetro de placas de microtitulación (450 nm/630 nm)

┅┅Homoxeneizador ou estómago

┅┅Axitador

┅┅Vortex mesturador

┅┅Centrífuga

┅┅Balanza analítica (inductancia: 0,01 g)

┅┅Pipeta graduada: 15ml

┅┅Lámpada de pipeta de goma

┅┅Tubo de centrífuga de poliestireno: 15 ml, 50 ml

┅┅Tubo de ensaio de vidro: 10 ml

┅┅Micropipetas: 20ml-200ml, 100ml -10000ml,

250 ml - multipette

Reactivos

┅┅n-hexano (AR)

┅┅Cloruro de metileno (AR)

┅┅Acetonitrilo (AR)

┅┅Auga desionizada

-----Ácido clorhídrico concentrado (AR)

Compoñentes do kit

● Placa de microtitulación con 96 pocillos recubertos de antíxeno

● Solucións estándar (6 botellas × 1 ml/botella)

0 ppb, 0,3 ppb, 1,2 ppb, 4,8 ppb, 19,2 ppb, 76,8 ppb

● Control estándar de alta concentración: (1 ml/botella)

……………………………………………………………100 ppb

● Conxugado enzimático 12ml……………... gorro vermello

● Solución de anticorpos 7ml …………..……..….…..tapón verde

● Solución A 7ml……..…………………..………..tapón branco

● Solución B 7ml …………….…………..………… tapa vermella

● Solución de parada 7 ml ……………………..……tapón amarelo

● 20XSolución de lavado concentrada 40ml

………………………………………………..tapón transparente

●2X Solución de extracción 50 ml………………………………………

Preparación de reactivos

7.1 Mostra de mel

Solución 1 : Disolución de ácido clorhídrico 0,2 M

Peso 41,5 ml Ácido clorhídrico concentrado, diluído con auga desionizada ata 500 ml.

Solución 2: solución de lavado

Diluír a solución de lavado concentrada con auga desionizada nunha proporción de volume de 1:19, que se utilizará para lavar as placas.a solución diluída pódese almacenar a 4 ℃ durante 1 mes.

Solución3: solución de extracción

Diluír a solución de extracción concentrada 2 × con auga desionizada na proporción de volume de 1:1 (ou dependendo da esixencia), que se utilizará para a extracción da mostra.Esta solución diluída pódese conservar durante 1 mes a 4 ℃.

Preparacións da mostra

8.1 Aviso e precaucións para os usuarios antes da operación

(a) Use puntas únicas no proceso do experimento e cambie as puntas cando absorba reactivos diferentes.

(b) Asegúrese de que todos os instrumentos experimentais estean limpos, se non, afectará o resultado do ensaio.

8.2Mostra de mel

----- Pese 2 g ± 0,05 g de mostra de mel nun tubo de centrífuga de poliestireno de 50 ml,

-----Engade 2 ml de solución de ácido clorhídrico 0,2 M (Solución 1), axita para mesturalo completamente, despois engade 8 ml de cloruro de metileno, axita co agitador durante 5 minutos para disolverse completamente;

-----Centrífuga durante 10 min, polo menos 3000 g a temperatura ambiente (20-25 ℃);

----- Eliminar a fase sobrenadante, levar 2 ml da solución orgánica do substrato a un tubo de vidro de 10 ml.

-----Engade 1 ml de n-hexano, vórtice durante 30 segundos, despois engade 1 ml de solución de extracción (solución 3), vórtice de novo durante 1 min.Centrifugar durante 5 minutos, polo menos 3000 g a temperatura ambiente (20-25 ℃);

-----Elimine a fase sobrenadante, tome 50 ml para o ensaio;

9. Proceso de ensaio

9.1 Aviso antes do ensaio

9.1.1 Asegúrese de que todos os reactivos e micropozos estean a temperatura ambiente (20-25 ℃).

9.1.2 Retorna todos os reactivos restantes a 2-8 ℃ inmediatamente despois do uso.

9.1.3 Lavar correctamente os micropozos é un paso importante no proceso de ensaio;é o factor vital para a repetitividade da análise ELISA.

9.1.4 Evitar a luz e cubrir os micropozos durante a incubación.

9.2 Pasos do ensaio

9.2.1 Saque todos os reactivos a temperatura ambiente (20-25 ℃) durante máis de 30 min, homoxeneízao antes do uso.

9.2.2 Saca os micropozos necesarios e devolve o resto á bolsa con peche con cremallera a 2-8 ℃ inmediatamente.

9.2.3 A solución de lavado diluída débese quentar de novo a temperatura ambiente antes de usala.

9.2.4Número:Numera cada posición do micropozo e todos os patróns e mostras deben executarse por duplicado.Rexistrar os estándares e as posicións das mostras.

9.2.5Engadir solución estándar/mostra:Engade 50 µl de solución estándar ou mostra preparada aos pozos correspondentes.Engadir 50 µl de solución de anticorpos.Mestura suavemente axitando a placa manualmente e incuba durante 30 min a 25 ℃ con tapa.

9.2.6Lavar:Retire a tapa suavemente e purifique o líquido dos pozos e enxágüe os micropozos con 250 µl de solución de lavado diluída (solución 2) a intervalos de 10 segundos durante 4-5 veces.Absorbe a auga residual con papel absorbente (a burbulla de aire restante pódese eliminar coa punta non utilizada).

9.2.8.Conxugado enzimático:Engadir 100 ml de solución de conxugado enzimático a cada pozo, mesturar suavemente axitando a placa manualmente e incubar durante 30 minutos a 25 ℃ con tapa.Repita o paso de lavado de novo.

9.2.8Coloración:Engade 50 µl de solución A e 50 µl de solución B a cada pozo.Mestura suavemente axitando a placa manualmente e incuba durante 15 min a 25 ℃ con tapa (ver 12.8).

9.2.9Medida:Engade 50 µl de solución de parada a cada pozo.Mestura suavemente axitando a placa manualmente e mide a absorbancia a 450 nm contra un espazo en branco (suxeríse medir coa lonxitude de onda dual de 450/630 nm. Le o resultado dentro de 5 minutos despois da adición da solución de parada.) (Tamén podemos medir a vista). sen solución de parada en resumo do instrumento ELIASA)

Resultados

10.1 Absorbancia porcentual

Os valores medios dos valores de absorbancia obtidos para os patróns e as mostras divídense polo valor de absorbancia do primeiro patrón (patrón cero) e multiplícanse polo 100%.Así, o patrón cero faise igual ao 100% e os valores de absorbancia cítanse en porcentaxes.

Absorbancia (%) = B/B0 × 100%

B —— estándar de absorbancia (ou mostra)

B0 ——absorción cero estándar

10.2 Curva estándar

Para trazar unha curva estándar: Tome o valor de absorbancia dos patróns como eixe y, semilogarítmico da concentración da solución patrón de flumequina (ppb) como eixe x.

--- Oflumequinaa concentración de cada mostra (ppb), que se pode ler a partir da curva de calibración, multiplícase polo múltiplo de dilución correspondente de cada mostra seguida e obtense a concentración real da mostra.

Para a redución de datos dos kits ELISA, desenvolveuse un software especial, que se pode proporcionar baixo petición.

11. Sensibilidade, exactitude e precisión

Proba de sensibilidade:0,3 ppb

Factor de dilución da mostra de mel: 2

Límite de detección

Mostra de mel ------------------------------------------------ -1 ppb

Precisión

Mostra de mel -------------------------------------------- 90±20 %

Precisión

O coeficiente de variación do kit ELISA é inferior ao 10%.

12. Aviso

12.1 Os valores medios dos valores de absorbancia obtidos para os patróns e as mostras reduciranse se os reactivos e as mostras non se regulan a temperatura ambiente (20-25 ℃).

12.2 Non permita que os micropozos se sequen entre os pasos para evitar a repetitividade sen éxito e realice o seguinte paso inmediatamente despois de tocar o soporte de micropozos.

12.3.Homoxeneizar cada reactivo antes de utilizalo.

12.4.Manteña a súa pel lonxe da solución de parada porque é o 2M H₂SO₄solución.

12.5 Non use os kits obsoletos.Non cambie os reactivos de diferentes lotes, xa que baixará a sensibilidade.

12.6 Condicións de almacenamento:

Manteña os kits ELISA a 2-8 ℃, non conxelar.Selar as placas de micropozos de descanso Evite a luz solar directa durante todas as incubacións.Recoméndase cubrir as placas de microtitulación.

12.7 Indicacións de mal funcionamento dos reactivos:

A solución do substrato debe abandonarse se cambia de cor.

Os reactivos poden deteriorarse se o valor de absorbancia (450/630 nm) do estándar cero é inferior a 0,5 (A450nm <0,5).

12.8 A reacción de coloración necesita 15 minutos despois de engadir a solución A e a solución B. E pode prolongar o tempo de incubación de 20 minutos a máis se a cor é demasiado clara para ser determinada.Nunca exceda os 25 min, pola contra, acurte o tempo de incubación correctamente.

12.9 A temperatura de reacción óptima é de 25 ℃.A temperatura máis alta ou máis baixa provocará cambios nos valores de sensibilidade e absorbancia.

13. Almacenamento

Condicións de almacenamento: 2-8 ℃.

Prazo de almacenamento: 12 meses.