vokatra

Fitsipika fitsapana

Ity kitapo ity dia mifototra amin'ny teknolojia ELISA tsy mivantana.Ny lava-drano microtiter dia rakotra antigène mifamatotra.FlumequineNy sisa tavela amin'ny santionany dia mifaninana amin'ny antigène voasarona amin'ny takelaka microtiter ho an'ny antibody.Aorian'ny fampidirana anzima misy marika anti-antibody, ny substrate TMB dia ampiasaina hanehoana ny loko.Ny tsy fahampian'ny santionany dia misy ifandraisany amin'ny tetracycline monina ao, rehefa ampitahaina amin'ny Standard Curve, ampitomboina amin'ny dilution maromaro, ny habetsaky ny sisa tavela amin'ny Flumequine ao amin'ny santionany dia azo kajy.

Applications

Ity kitapo ity dia azo ampiasaina amin'ny famakafakana quantitative sy qualitative ny sisa tavela amin'ny flumequine amin'ny tantely.

Fihetseham-po

Flumequine …………………………………………… 100%

Fitaovana ilaina

Fitaovana

┅┅Microtiter plate spectrophotometer (450nm/630nm)

┅┅Homogenizer na mpamono

┅┅Shaker

┅┅Vortex mixer

┅┅Centrifuge

┅┅Analytical balance (inductance: 0.01g)

┅┅Pipette nahazo diplaoma: 15ml

┅┅tavoahangy pipette fingotra

┅┅Polystyrene Centrifuge fantsona: 15ml, 50ml

┅┅Glass fantsona: 10ml

┅┅Mikrôpipettes: 20ml-200ml, 100ml -10000ml,

250ml - isan-karazany

Reagents

┅┅n-hexane(AR)

┅┅Methylene chloride (AR)

┅┅Acetonitrile (AR)

┅┅Deionized rano

-----Asidra hydrochloric (AR)

Kit Components

● Plate microtiter misy lavaka fantsakana 96 misy antigène

● Vahaolana mahazatra (6 tavoahangy×1ml/tavoahangy)

0ppb, 0.3ppb, 1.2ppb, 4.8ppb, 19.2ppb, 76.8ppb

● Fanaraha-maso fenitra avo lenta: (1ml/tavoahangy)

…………………………………………………………………100ppb

● Enzyme conjugate 12ml…………………………... satroka mena

● Vahaolana antibody 7ml ……………………………………………..Kaopy maitso

● Vahaolana A 7ml………………………………………………..satroka fotsy

● Vahaolana B 7ml …………………………………………. satroka mena

● Atsaharo ny vahaolana 7ml ……………………………………………satroka mavo

● 20XVahaolana fanasan-damba 40ml

……………………………………………..kapa mangarahara

●2X Vahaolana fitrandrahana 50ml…………………………… satroka manga

Reagents fanomanana

7.1 Santionany tantely

Vahaolana 1: 0,2 M vahaolana asidra hydrochloric

Lanja 41,5ml asidra hydrochloric voapoizina, arotsaka amin'ny rano deionized hatramin'ny 500 ml.

Vahaolana 2: Vahaolana sasana

Esory ny vahaolana fanasan-damba mifantoka amin'ny rano deionized amin'ny tahan'ny 1:19, izay hampiasaina amin'ny fanasana ny takelaka.azo tehirizina ao amin'ny 4 ℃ mandritra ny 1 volana ny vahaolana voatoto.

vahaolana3: vahaolana fitrandrahana

Dilute ny 2×concentrated extraction solution with deionized water in the volume ratio of 1:1 (na miankina amin'ny fepetra), izay hampiasaina amin'ny fitrandrahana santionany.Ity vahaolana voalefona ity dia azo tehirizina mandritra ny 1 volana amin'ny 4 ℃.

Fanomanana santionany

8.1 Fampandrenesana sy fitandremana ho an'ny mpampiasa alohan'ny hiasana

(a) Azafady, ampiasao toro-hevitra tokana amin'ny dingan'ny fanandramana, ary ovay ny toro-hevitra rehefa misintona reagent samihafa.

b) Ataovy azo antoka fa madio avokoa ny fitaovana andrana rehetra, raha tsy izany dia hisy fiantraikany amin'ny valin'ny fitiliana izany.

8.2Santionany tantely

----- Mandanja 2g ± 0.05g santionany tantely ao anaty tavoahangy polystyrene centrifuge 50ml,

-----Ampidiro 2ml 0,2 M ny vahaolana asidra hydrochloric (Vahaolana 1), vortex mba hampifangaro azy tanteraka, dia asio 8ml methylene chloride, kobanina amin'ny shaker mandritra ny 5 minitra mba levona tanteraka;

-----Centrifuge mandritra ny 10 min, farafahakeliny 3000g amin'ny mari-pana (20-25 ℃);

----- Esory ny dingan'ny supernatant, alao 2 ml ny vahaolana organika substrate amin'ny fantsona fitaratra 10 ml.

-----Ampiana 1 ml n-hexane,vortex mandritra ny 30s, avy eo asio 1ml solution extraction(solution 3), vortex indray mandritra ny 1min.Centrifuge mandritra ny 5min, farafahakeliny 3000g amin'ny mari-pana amin'ny efitrano (20-25 ℃);

----- Esory ny dingana supernatant, maka 50ml ho an'ny fitiliana;

9. Fomba fitiliana

9.1 Fanamarihana alohan'ny fitiliana

9.1.1 Ataovy azo antoka fa ao amin'ny mari-pana (20-25 ℃) ny reagents sy microwell rehetra.

9.1.2 Avereno amin'ny 2-8 ℃ ny reagents sisa rehetra aorian'ny fampiasana azy.

9.1.3 Ny fanasana tsara ny microwells dia dingana lehibe amin'ny dingan'ny fitiliana;io no tena zava-dehibe amin'ny fiverimberenan'ny fanadihadiana ELISA.

9.1.4 Halaviro ny hazavana ary sarony ny lavadrano mikraoba mandritra ny incubation.

9.2 Dingana Fanamarinana

9.2.1 Esory ny reagents rehetra amin'ny mari-pana (20-25 ℃) mihoatra ny 30min, homogenize alohan'ny fampiasana.

9.2.2 Esory ny microwells ilaina ary avereno any amin'ny kitapo zip-hidy amin'ny 2-8 ℃ avy hatrany ny ambiny.

9.2.3 Ny vahaolana fanasan-damba efa voalefona dia tokony havaozina mba ho amin'ny mari-pana alohan'ny hampiasana azy.

9.2.4laharana:Laharana ny toeran'ny microwell rehetra ary ny fenitra sy ny santionany rehetra dia tokony atao dika mitovy.Raketo ny toerana misy ny fenitra sy ny santionany.

9.2.5Ampio vahaolana / santionany mahazatra:Ampio 50 µl ny vahaolana manara-penitra na santionany voaomana amin'ny lavadrano mifanandrify aminy.Ampio vahaolana antibody 50µl.Afangaro moramora amin'ny alalan'ny fanozongozonana ny lovia amin'ny tanana ary atsofohy mandritra ny 30 minitra amin'ny 25 ℃ miaraka amin'ny fonony.

9.2.6Sasao:Esory moramora ny fonony ary diovy ny rano avy ao anaty lavaka fantsakana ary sasao amin'ny 250µl 250µl vahaolana fanasan-damba voadio (vahaolana 2) amin'ny elanelan'ny 10s in-4-5.Atsofohy amin'ny taratasy misoroka ny rano sisa tavela (azo esorina amin'ny tendrony tsy ampiasaina ny bubble rivotra sisa).

9.2.8.Enzyme conjugate:Ampio ny enzyme conjugate solution 100ml isaky ny fantsakana, Afangaroy moramora amin'ny alalan'ny fanozongozonana ny lovia amin'ny tanana ary incubate mandritra ny 30min amin'ny 25 ℃ miaraka amin'ny fonony.Avereno indray ny dingana fanasana.

9.2.8fandokoana:Ampio 50µl solution A sy 50µl solution B isaky ny fantsakana.Afangaro moramora amin'ny alalan'ny fanozongozonana ny lovia amin'ny tanana ary atsangano mandritra ny 15 minitra amin'ny 25 ℃ miaraka amin'ny fonony (jereo ny 12.8).

9.2.9Refesina:Ampio 50µl ny vahaolana stop isaky ny lavadrano.Afangaro moramora amin'ny alalan'ny fanozongozonana ny takelaka amin'ny tanana ary refesina amin'ny 450nm ny fisondrotana amin'ny rivotra tsy misy rivotra (Azo atao ny mandrefy amin'ny halavan'ny onjam-droa amin'ny 450/630nm. Vakio ny valiny ao anatin'ny 5min aorian'ny famenoana vahaolana mijanona. ) (Azontsika mandrefy amin'ny fahitana ihany koa. vahaolana tsy misy fiatoana raha tsy amin'ny fitaovana ELIASA)

vokatra

10.1 Isan-jato ny fandraisana

Ny sandan'ny sandan'ny absorbance azo ho an'ny fenitra sy ny santionany dia zaraina amin'ny sandan'ny absorbance amin'ny fenitra voalohany (standard zero) ary ampitomboina amin'ny 100%.Ny fenitra aotra dia atao mitovy amin'ny 100% ary ny soatoavin'ny absorbance dia voatonona amin'ny isan-jato.

Fisorohana (%) = B/B0 ×100%

B ——manara-penitra (na santionany)

B0 ——absorbance zero standard

10.2 Curve mahazatra

Hanao tsipika manara-penitra: Raiso ho axis y ny sandan'ny fatran'ny fenitra, semi-logarithmika amin'ny fifantohan'ny vahaolana fenitry ny flumequine (ppb) ho x-axis.

--- NyflumequineNy fifantohana ny santionany tsirairay (ppb), izay azo vakiana avy amin'ny curve calibration, dia ampitomboina amin'ny dilution maromaro mifanandrify amin'ny santionany tsirairay arahina, ary ny tena fifantohana ny santionany dia azo.

Ho an'ny fampihenana ny angon-drakitra amin'ny kitapo ELISA, dia novolavolaina ny rindrambaiko manokana, izay azo omena amin'ny fangatahana.

11. Fahatsapana, fahitsiana ary mazava tsara

Test Sensitivity：0.3ppb

Antony fandotoana santionany tantely: 2

fetran'ny fitiliana

Santionany tantely ------------------------------------------------ -1ppb

araka ny marina

Santionany tantely --------------------------------------------------- 90±20 %

fametrahana mazava tsara

Ny tahan'ny fiovaovan'ny kitapo ELISA dia latsaky ny 10%.

12. Mariho

12.1 Ny sandan'ny sandan'ny absorbance azo amin'ny fenitra sy ny santionany dia hihena raha toa ka tsy voafehy amin'ny mari-pana (20-25 ℃) ny reagents sy ny santionany.

12.2 Aza avela ho maina eo anelanelan'ny dingana ny microwells mba hialana amin'ny fiverimberenan'ny tsy fahombiazana ary mandehana ny dingana manaraka avy hatrany rehefa avy mikapoka ny fitoeran'ny microwell.

12.3.Ataovy homogeneous ny reagent tsirairay alohan'ny hampiasana azy.

12.4.Arovy ny hoditrao amin'ny vahaolana mijanona fa ny 2M H₂SO₄vahaolana.

12.5 Aza mampiasa ny kitapo efa lany andro.Aza manakalo ny reagents amin'ny batch samihafa, fa hampihena ny fahatsapana izany.

12.6 Fepetra fitahirizana:

Tazony amin'ny 2-8 ℃ ny kitapo ELISA, aza mivaingana.Asio tombo-kase ny takelaka microwell Fadio ny tara-masoandro mivantana mandritra ny incubation rehetra.Ny fandrakofana ny takelaka microtiter dia soso-kevitra.

12.7 Famantarana ny reagents mandeha ratsy:

Ny vahaolana amin'ny substrate dia tokony hajanona raha miova loko.

Mety ho ratsy ny reagents raha latsaky ny 0.5 (A450nm) ny sandan'ny absorbance (450/630nm) amin'ny fenitra aotra.

12.8 Ny fanehoan-kevitry ny loko dia mila 15min aorian'ny fampidirana Vahaolana A sy Vahaolana B. Ary azonao atao ny manitatra ny fe-potoana incubation manomboka amin'ny 20min ka mihoatra raha maivana loatra ny lokony ka tsy azo hamaritana.Aza mihoatra ny 25min, Mifanohitra amin'izany, hafohy tsara ny fotoana incubation.

12.9 Ny mari-pana fanehoan-kevitra tsara indrindra dia 25 ℃.Ny mari-pana ambony na ambany kokoa dia hitarika amin'ny fiovan'ny soatoavin'ny fahatsapan-tena sy ny assorance.

13. Fitehirizana

Toe-javatra fitahirizana: 2-8 ℃.

Fe-potoana fitahirizana: 12 volana.