производ

Принцип на тест

Овој комплет се заснова на индиректно-конкурентна технологија ELISA.Микротитарните бунари се обложени со антиген за спојување.Флумекиностаток во примерокот се натпреварува со антигенот обложен на микротитарната плоча за антитело.По додавањето на ензимски означени анти-антитела, TMB супстратот се користи за да се покаже бојата.Апсорпцијата на мострата е негативно поврзана со резиденцијата на тетрациклин во неа, по споредбата со Стандардна крива, помножена со повеќекратната разредување, може да се пресмета количината на остаток на флумекин во мострата.

Апликации

Овој комплет може да се користи во квантитативна и квалитативна анализа на остатоците од флумекин во медот.

Вкрстени реакции

Флумекин ……………………………………………… 100%

Потребни материјали

Опрема

┅┅ Спектрофотометар на микротитарска плоча (450nm/630nm)

┅┅Хомогенизатор или стомак

┅┅ Шејкер

┅┅Вортекс миксер

┅┅Центрифуга

┅┅ Аналитичка рамнотежа (индуктивност: 0,01 g)

┅┅Дипломирана пипета: 15ml

┅┅ Сијалица од гумена пипета

┅┅ Цевка за центрифуга од полистирен: 15 ml, 50 ml

┅┅ Стаклена епрувета: 10ml

┅┅Микропипети: 20ml-200ml, 100ml-10000ml,

250 ml - мултипипета

Реагенси

┅┅n-хексан (AR)

┅┅Метилен хлорид (AR)

┅┅Ацетонитрил (AR)

┅┅ Дејонизирана вода

-----Концентрирана хлороводородна киселина (AR)

Компоненти на комплетот

● Микротитер плоча со 96 бунари обложени со антиген

● Стандардни раствори (6 шишиња×1ml/шише)

0ppb, 0,3ppb, 1,2ppb, 4,8ppb, 19,2ppb, 76,8ppb

● Стандардна контрола со висока концентрација: (1ml/шише)

………………………………………………………100ppb

● Ензимски конјугат 12 ml…………………………… црвено капаче

● Раствор за антитела 7ml …………..………..….…..зелена капа

● Раствор A 7ml…………………………..…………..бела капа

● Раствор B 7ml ……………………………..………… црвено капаче

● Стоп раствор 7ml ………………………..………жолта капа

● 20XКонцентриран раствор за миење 40ml

……………………………………………..проѕирна капа

●2X Раствор за екстракција 50ml……………………… сино капаче

Подготовка на реагенси

7.1 Примерок од мед

Раствор 1: 0,2 M Раствор на хлороводородна киселина

Тежина 41,5 ml Концентрирана хлороводородна киселина, разредена со дејонизирана вода до 500 ml.

Решение 2: Раствор за миење

Разредете го концентрираниот раствор за миење со дејонизирана вода во волуменски сооднос 1:19, која ќе се користи за миење на плочите.разредениот раствор може да се чува на 4℃ 1 месец.

Решение3: раствор за екстракција

Разредете го 2×концентрираниот раствор за екстракција со дејонизирана вода во волумен од 1:1 (или во зависност од потребите), што ќе се користи за екстракција на примерокот.Овој разреден раствор може да се чува 1 месец на 4℃.

Примероци за подготовки

8.1 Известување и мерки на претпазливост за корисниците пред работа

(а) Ве молиме користете еднократни совети во процесот на експериментот и променете ги врвовите кога апсорбирате различни реагенси.

(б) Осигурајте се дека сите експериментални инструменти се чисти, во спротивно тоа ќе влијае на резултатот од анализата.

8.2Примерок од мед

----- Измерете 2g±0,05g примерок од мед во епрувета за центрифуга од полистирен од 50ml,

-----Додадете 2 ml раствор на хлороводородна киселина 0,2 М (Раствор 1), вртлог за да се измеша целосно, потоа додадете 8 ml метилен хлорид, протресете со шејкер 5 минути за целосно да се раствори;

-----Центрифугирајте 10 мин, најмалку 3000g на собна температура (20-25℃);

-----Отстранете ја супернатантната фаза, земете 2 ml од органскиот раствор на подлогата во стаклена цевка од 10 ml.

-----Додадете 1 ml n-хексан, вртлог за 30 секунди, потоа додадете 1 ml раствор за екстракција (раствор 3), повторно измешајте 1 мин.Центрифугирајте 5 мин, најмалку 3000 g на собна температура (20-25℃);

-----Отстранете ја супернатантната фаза, земете 50 ml за анализа;

9. Процес на анализа

9.1 Известување пред анализата

9.1.1 Проверете дали сите реагенси и микробунари се на собна температура (20-25℃).

9.1.2 Вратете ги сите останати реагенси на 2-8℃ веднаш по употребата.

9.1.3 Правилното миење на микробунарите е важен чекор во процесот на анализа;тоа е витален фактор за повторливоста на ELISA анализата.

9.1.4 Избегнувајте ја светлината и покријте ги микробунарите за време на инкубацијата.

9.2 Чекори на анализа

9.2.1 Извадете ги сите реагенси на собна температура (20-25℃) повеќе од 30 минути, хомогенизирајте ги пред употреба.

9.2.2 Извадете ги потребните микробунари и вратете го остатокот во кесата со патент на температура од 2-8℃ веднаш.

9.2.3 Разредениот раствор за миење треба повторно да се загрее за да биде на собна температура пред употреба.

9.2.4Број:Нумерирајте ја секоја позиција на микробунар и сите стандарди и примероци треба да се користат во дупликат.Запишете ги стандардите и позициите на примероците.

9.2.5Додадете стандарден раствор/примерок:Додадете 50 µl стандарден раствор или подготвен примерок во соодветните бунари.Додадете 50 µl раствор на антитела.Нежно измешајте со рачно протресување на плочата и инкубирајте 30 минути на 25℃ со капак.

9.2.6Измијте:Извадете го капакот нежно и исчистете ја течноста од бунарите и исплакнете ги микробунарите со 250µl разреден раствор за миење (раствор 2) со интервал од 10 секунди 4-5 пати.Преостанатата вода впивајте ја со впивачка хартија (останатиот воздушен меур може да се отстрани со неискористен врв).

9.2.8.Ензимски конјугат:Додадете ензимски конјугат раствор од 100 ml во секоја бунар, нежно измешајте со рачно протресување на плочата и инкубирајте 30 минути на 25 ° C со капак.Повторете го чекорот за миење повторно.

9.2.8Боење:Додадете 50 µl раствор А и 50 µl раствор Б во секоја буна.Нежно измешајте со рачно протресување на плочата и инкубирајте 15 мин на 25℃ со капак (види 12.8).

9.2.9Мерење:Додадете 50 µl стоп раствор во секоја буна.Нежно измешајте со рачно тресење на плочата и измерете ја апсорпцијата на 450 nm во однос на празно воздух (Предложена е мерка со двојна бранова должина од 450/630 nm. Прочитајте го резултатот во рок од 5 минути по додавањето на стоп раствор. ) (Можеме да мериме и со видување без стоп решение накратко од инструментот ELIASA)

Резултати

10.1 Процентуална апсорпција

Средните вредности на вредностите на апсорпција добиени за стандардите и примероците се поделени со вредноста на апсорпција на првиот стандард (нулта стандард) и се множат со 100%.Така, нултиот стандард е еднаков на 100%, а вредностите на апсорпција се цитирани во проценти.

Апсорпција (%) = B/B0 × 100%

Б —-стандард за апсорпција (или примерок)

B0 ——стандард за апсорпција нула

10.2 Стандардна крива

Да се ​​нацрта стандардна крива: Земете ја вредноста на апсорпција на стандардите како y-оска, полулогаритамска на концентрацијата на стандардниот раствор на флумекин (ppb) како x-оска.

--- Нафлумекинконцентрацијата на секој примерок (ppb), што може да се прочита од кривата на калибрација, се множи со соодветниот множител на разредување на секој следен примерок и се добива вистинската концентрација на мострата.

За намалување на податоците на комплетите ELISA, развиен е специјален софтвер, кој може да се обезбеди на барање.

11. Чувствителност, точност и прецизност

Тест чувствителност:0,3ppb

Мед Фактор на разредување на примерокот: 2

Граница за откривање

Примерок од мед------------------------------------------------ -1ppb

Точност

Примерок од мед --------------------------------------------- 90±20 %

Прецизност

Коефициентот на варијација на комплетот ELISA е помал од 10%.

12. Забележете

12.1 Средните вредности на вредностите на апсорпција добиени за стандардите и примероците ќе се намалат доколку реагенсите и примероците не се регулирани на собна температура (20-25℃).

12.2 Не дозволувајте микробунарите да се сушат помеѓу чекорите за да избегнете неуспешно повторување и работете на следниот чекор веднаш откако ќе го допрете држачот за микробунари.

12.3.Хомогенизирајте го секој реагенс пред употреба.

12.4.Држете ја вашата кожа подалеку од растворот за стопирање бидејќи тој е 2M H₂SO₄решение.

12.5 Не користете ги застарените комплети.Не менувајте ги реагенсите од различни серии, бидејќи тоа ќе ја намали чувствителноста.

12.6 Состојба на складирање:

Чувајте ги ELISA комплетите на температура од 2-8℃, не замрзнувајте.Плочи за микробунари за запечатување Избегнувајте директна сончева светлина за време на сите инкубации.Се препорачува покривање на микротитарните плочи.

12.7 Индикации за влошување на реагенсите:

Растворот на подлогата треба да се напушти доколку се обојат.

Реагенсите може да се влошат ако вредноста на апсорпција (450/630 nm) на нулта стандард е помала од 0,5 (A450nm-0,5).

12.8 На реакцијата на боење и се потребни 15 минути по додавањето на растворот А и растворот Б. И може да го продолжите периодот на инкубација од 20 минути на повеќе ако бојата е премногу светла за да се одреди.Никогаш не надминувајте 25 минути, напротив, правилно скратете го времето на инкубација.

12,9 Оптималната температура на реакцијата е 25℃.Повисоката или пониската температура ќе доведе до промена на чувствителноста и вредностите на апсорпција.

13. Складирање

Состојба на чување: 2-8℃.

Период на чување: 12 месеци.