නිෂ්පාදන

පරීක්ෂණ මූලධර්මය

මෙම කට්ටලය වක්‍ර තරඟකාරී ELISA තාක්ෂණය මත පදනම් වේ.මයික්‍රොටයිටර් ළිං කප්ලිං ප්‍රතිදේහජනක සමඟ ආලේප කර ඇත.ෆ්ලම්ක්වින්නියැදියේ ඇති අපද්‍රව්‍ය ප්‍රතිදේහ සඳහා මයික්‍රොටයිටර් තහඩුව මත ආලේප කර ඇති ප්‍රතිදේහජනක සමඟ තරඟ කරයි.ප්‍රතිදේහ ලේබල් කරන ලද එන්සයිම එකතු කිරීමෙන් පසුව, TMB උපස්ථරය වර්ණය පෙන්වීමට භාවිතා කරයි.නියැදියේ අවශෝෂණය එහි ඇති ටෙට්‍රාසයික්ලයින් වාසස්ථානයට සෘණාත්මකව සම්බන්ධ වේ, සම්මත වක්‍රය සමඟ සංසන්දනය කිරීමෙන් පසු, තනුක ගුණයෙන් ගුණ කළ විට, නියැදියේ ඇති ෆ්ලූමෙක්වීන් අවශේෂ ප්‍රමාණය ගණනය කළ හැකිය.

අයදුම්පත්

මෙම කට්ටලය මී පැණිවල ඇති flumequine අපද්‍රව්‍ය පිළිබඳ ප්‍රමාණාත්මක සහ ගුණාත්මක විශ්ලේෂණය සඳහා භාවිතා කළ හැක.

හරස් ප්රතික්රියා

Flumequine …………………………………………………… 100%

අවශ්ය ද්රව්ය

උපකරණ

┅┅Microtiter තහඩු වර්ණාවලීක්ෂ මානය (450nm/630nm)

┅┅සමජාතීයකාරකය හෝ ආමාශකය

┅┅ෂේකර්

┅┅වෝටෙක්ස් මික්සර්

┅┅Centrifuge

┅┅විශ්ලේෂණාත්මක ශේෂය (ප්රේරණය: 0.01g)

┅┅උපාධිගත පයිප්ප: 15ml

┅┅රබර් පයිප්ප බල්බය

┅┅පොලිස්ටිරින් කේන්ද්රාපසාරී නල: 15ml, 50ml

┅┅වීදුරු පරීක්ෂණ නළය: 10ml

┅┅Micropipettes: 20ml-200ml, 100ml -10000ml,

250ml - බහු පිපෙට්

ප්රතික්රියාකාරක

┅┅n-hexane(AR)

┅┅මෙතිලීන් ක්ලෝරයිඩ් (AR)

┅┅ඇසිටොනයිට්‍රයිල්(AR)

┅┅ඩයෝනීකරණය කළ ජලය

-----සාන්ද්‍රිත හයිඩ්‍රොක්ලෝරික් අම්ලය (AR)

කට්ටල සංරචක

● ප්‍රතිදේහජනක ආලේපිත ළිං 96ක් සහිත මයික්‍රොටයිටර් තහඩුව

● සම්මත විසඳුම් (6 බෝතල්×1ml/බෝතලය)

0ppb, 0.3ppb, 1.2ppb, 4.8ppb, 19.2ppb, 76.8ppb

● ඉහළ සාන්ද්‍රණ සම්මත පාලනය:(1ml/බෝතලය)

………………………………………………………………100ppb

● එන්සයිම සංයෝජක 12ml……………………………… රතු තොප්පිය

● ප්‍රතිදේහ ද්‍රාවණය 7ml …………………………………..හරිත තොප්පිය

● විසඳුම A 7ml………………………………………………………… සුදු තොප්පිය

● විසඳුම B 7ml …………………………………………… රතු තොප්පිය

● නැවතුම් ද්‍රාවණය 7ml …………………………………………. කහ තොප්පිය

● 20Xසාන්ද්‍ර වොෂ් ද්‍රාවණය 40ml

…………………………………………….. විනිවිද පෙනෙන තොප්පිය

●2X නිස්සාරණ ද්‍රාවණය මිලිලීටර් 50............. නිල් කැප්

ප්රතික්රියාකාරක සකස් කිරීම

7.1 මී පැණි නියැදිය

විසඳුම 1 : 0.2 M හයිඩ්රොක්ලෝරික් අම්ල ද්රාවණය

බර 41.5ml සාන්ද්‍ර හයිඩ්‍රොක්ලෝරික් අම්ලය, 500 ml දක්වා deionized ජලය සමග තනුක කරන්න.

විසඳුම 2: විසඳුම සෝදන්න

සාන්ද්‍ර වොෂ් ද්‍රාවණය 1:19 පරිමාවේ අනුපාතයට ඩියෝනීකරණය කළ ජලය සමග තනුක කරන්න, එය තහඩු සේදීම සඳහා භාවිතා කරනු ඇත.තනුක කළ ද්‍රාවණය 4℃ උෂ්ණත්වයකදී මාසයක් සඳහා ගබඩා කළ හැක.

විසඳුමක්3: නිස්සාරණය විසඳුම

නියැදි නිස්සාරණය සඳහා භාවිතා කරනු ලබන 2×සාන්ද්‍රිත නිස්සාරණ ද්‍රාවණය 1:1 (හෝ අවශ්‍යතාවය මත රඳා පවතී) පරිමා සලාකයේ ඩියෝනීකරණය කළ ජලය සමග තනුක කරන්න.මෙම තනුක ද්‍රාවණය අංශක 4 ට මාස 1 ක් සංරක්ෂණය කළ හැකිය.

නියැදි සූදානම

8.1 මෙහෙයුමට පෙර පරිශීලකයින් සඳහා දැනුම්දීම සහ පූර්වාරක්ෂාවන්

(අ) කරුණාකර අත්හදා බැලීමේ ක්‍රියාවලියේදී තනි ඉඟි භාවිතා කරන්න, සහ විවිධ ප්‍රතික්‍රියාකාරක අවශෝෂණය කරන විට ඉඟි වෙනස් කරන්න.

(ආ) සියලුම පර්යේෂණාත්මක උපකරණ පිරිසිදු බවට වග බලා ගන්න, එසේ නොමැතිනම් එය පරීක්ෂණ ප්‍රතිඵලයට බලපානු ඇත.

8.2මී පැණි සාම්පල

-------මී පැණි සාම්පල 2g±0.05ml 50ml ෙපොලිස්ටිරින් කේන්ද්‍රාපසාරී නලයකට බර කරන්න,

----- 2ML 0.2 M.

-----විනාඩි 10 ක් සඳහා කේන්ද්රාපසාරී, කාමර උෂ්ණත්වයේ දී අවම වශයෙන් 3000g (20-25℃);

-----අධික අවධිය ඉවත් කරන්න, උපස්ථර කාබනික ද්‍රාවණයෙන් මිලි ලීටර් 2ක් මිලිලීටර් 10 වීදුරු බටයකට ගන්න. නයිට්‍රජන් ප්‍රවාහයේ (50-60℃) ජල ස්නානය යටතේ උපස්ථරය වියළන්න.

-----1 ml n-hexane, 30s සඳහා සුලිය එකතු කරන්න, ඉන්පසු 1ml නිස්සාරණ ද්‍රාවණය (විසඳුම 3) , විනාඩි 1ක් සඳහා නැවත සුලිය එකතු කරන්න.මිනිත්තු 5ක් සඳහා කේන්ද්‍රාපසාරී, කාමර උෂ්ණත්වයේ දී අවම වශයෙන් 3000g (20-25℃);

-----උපරිනාටක අදියර ඉවත් කරන්න, විශ්ලේෂණය සඳහා මිලි ලීටර් 50 ක් ගන්න;

9. පරීක්ෂණ ක්රියාවලිය

9.1 පරීක්ෂණයට පෙර දැනුම් දෙන්න

9.1.1 සියලුම ප්‍රතික්‍රියාකාරක සහ මයික්‍රොවේල් කාමර උෂ්ණත්වයේ (20-25℃) ඇති බවට වග බලා ගන්න.

9.1.2 භාවිතා කළ වහාම ඉතිරි සියලුම ප්‍රතික්‍රියාකාරක 2-8℃ වෙත ආපසු ලබා දෙන්න.

9.1.3 මයික්‍රොවේල් නිවැරදිව සේදීම විශ්ලේෂණ ක්‍රියාවලියේ වැදගත් පියවරකි;එය ELISA විශ්ලේෂණයේ පුනරාවර්තනය සඳහා වැදගත් සාධකයකි.

9.1.4 ඉන්කියුබේෂන් අතරතුර ආලෝකයෙන් වළකින්න සහ මයික්‍රොවේල් ආවරණය කරන්න.

9.2 පරීක්ෂණ පියවර

9.2.1 සියලුම ප්‍රතික්‍රියාකාරක කාමර උෂ්ණත්වයේ (20-25℃) විනාඩි 30කට වැඩි කාලයක් පිටතට ගෙන, භාවිතයට පෙර සමජාතීය කරන්න.

9.2.2 අවශ්‍ය මයික්‍රොවේල් ලබාගෙන ඉතිරිය සෙල්සියස් අංශක 2-8 ට සිප්-ලොක් බෑගයට වහාම ආපසු එවන්න.

9.2.3 තනුක කළ සේදුම් ද්‍රාවණය භාවිතයට පෙර කාමර උෂ්ණත්වයේ පවතින පරිදි නැවත උණුසුම් කළ යුතුය.

9.2.4ගණන:සෑම මයික්‍රොවෙල් ස්ථානයක්ම අංක කරන්න සහ සියලුම ප්‍රමිති සහ සාම්පල අනුපිටපත් වලින් ධාවනය කළ යුතුය.ප්‍රමිති සහ සාම්පල ස්ථාන වාර්තා කරන්න.

9.2.5සම්මත විසඳුම/නියැදිය එක් කරන්න:50 µl සම්මත ද්‍රාවණයක් හෝ සකස් කළ සාම්පලයක් අදාළ ළිංවලට එක් කරන්න.50µl ප්‍රතිදේහ ද්‍රාවණයක් එක් කරන්න.පිඟාන අතින් සොලවා මෘදු ලෙස මිශ්‍ර කර පියනක් සමඟ සෙල්සියස් අංශක 25 ට මිනිත්තු 30 ක් පුර්වාගත කරන්න.

9.2.6සෝදන්න:කවරය මෘදු ලෙස ඉවත් කර ළිංවලින් දියර පිරිසිදු කර මයික්‍රොවේල් 250µl තනුක කළ සේදුම් ද්‍රාවණයකින් (විසඳුම 2) තත්පර 10 ක පරතරයකින් 4-5 වතාවක් සෝදා හරින්න.අවශෝෂක කඩදාසි සමඟ අවශේෂ ජලය අවශෝෂණය කරන්න (ඉතිරි වායු බුබුල භාවිතයට නොගත් ඉඟියකින් ඉවත් කළ හැකිය).

9.2.8එන්සයිම සංයෝජන:සෑම ළිඳකටම එන්සයිම කන්ජුගේට් ද්‍රාවණය මිලි ලීටර් 100 බැගින් එකතු කර, පිඟාන අතින් සොලවා මෘදු ලෙස මිශ්‍ර කර පියනක් සමඟ සෙල්සියස් අංශක 25 ට මිනිත්තු 30ක් පුර්වාගත කරන්න.සේදීමේ පියවර නැවත නැවත කරන්න.

9.2.8වර්ණ ගැන්වීම:සෑම ළිඳකටම A ද්‍රාවණය 50µl සහ B ද්‍රාවණය 50µl එකතු කරන්න.පිඟාන අතින් සොලවා මෘදු ලෙස මිශ්‍ර කර ආවරණයක් සහිතව 25℃ උෂ්ණත්වයකදී විනාඩි 15ක් පුර්වාගත කරන්න (12.8 බලන්න).

9.2.9මැනීම:සෑම ළිඳකටම නැවතුම් ද්‍රාවණය 50µl එකතු කරන්න.තහඩුව අතින් සෙලවීමෙන් මෘදු මිශ්‍ර කර වාතය හිස් ස්ථානයකට එරෙහිව 450nm දී අවශෝෂණය මැනිය යුතුය (එය යෝජිත ද්විත්ව තරංග ආයාමය 450/630nm වේ. නැවතුම් ද්‍රාවණය එකතු කිරීමෙන් පසු මිනිත්තු 5 ක් ඇතුළත ප්‍රතිඵලය කියවන්න. ) (අපට දර්ශනයෙන් ද මැනිය හැකිය. ELIASA උපකරණයේ කෙටියෙන් නැවතුම් විසඳුමකින් තොරව)

ප්රතිපල

10.1 ප්‍රතිශතය අවශෝෂණය

සම්මතයන් සහ සාම්පල සඳහා ලබාගත් අවශෝෂණ අගයන්හි මධ්යන්ය අගයන් පළමු සම්මතයේ (ශුන්ය සම්මතයේ) අවශෝෂණ අගයෙන් බෙදනු ලබන අතර 100% කින් ගුණ කරනු ලැබේ.ශුන්‍ය ප්‍රමිතිය 100% ට සමාන වන අතර අවශෝෂණ අගයන් ප්‍රතිශත වලින් උපුටා දක්වා ඇත.

අවශෝෂණය (%) = B/B0 × 100%

B ——අවශෝෂණ සම්මතය (හෝ නියැදිය)

B0 ——අවශෝෂණ ශුන්‍ය සම්මතය

10.2 සම්මත වක්රය

සම්මත වක්‍රයක් ඇඳීමට: ප්‍රමිතිවල අවශෝෂණ අගය y-අක්ෂ ලෙස ගන්න, ෆ්ලූමේක්වින් ප්‍රමිති ද්‍රාවණයේ (ppb) සාන්ද්‍රණයේ අර්ධ ලඝුගණක x-අක්ෂය ලෙස ගන්න.

--- එමflumequineඑක් එක් සාම්පලයේ සාන්ද්‍රණය (ppb), ක්‍රමාංකන වක්‍රයෙන් කියවිය හැකි අතර, අනුගමනය කරන එක් එක් නියැදියේ අනුරූප තනුක ගුණාකාරයෙන් ගුණ කරනු ලබන අතර, නියැදියේ සත්‍ය සාන්ද්‍රණය ලබා ගනී.

ELISA කට්ටලවල දත්ත අඩු කිරීම සඳහා, විශේෂ මෘදුකාංගයක් නිර්මාණය කර ඇති අතර, එය ඉල්ලීම මත සැපයිය හැකිය.

11. සංවේදීතාව, නිරවද්යතාව සහ නිරවද්යතාව

පරීක්ෂණ සංවේදීතාව：0.3ppb

මී පැණි සාම්පල තනුක සාධකය: 2

හඳුනාගැනීමේ සීමාව

මී පැණි සාම්පල ---------------------------------------------- -1ppb

නිරවද්යතාව

මී පැණි සාම්පලය ------------------------------------------- 90±20 %

නිරවද්යතාව

ELISA කට්ටලයේ විචලන සංගුණකය 10% ට වඩා අඩුය.

12. දැනුම්දීම

12.1 ප්‍රතික්‍රියාකාරක සහ සාම්පල කාමර උෂ්ණත්වයට (20-25℃) නියාමනය කර නොමැති නම් ප්‍රමිති සහ සාම්පල සඳහා ලබාගත් අවශෝෂණ අගයන්හි මධ්‍යන්‍ය අගයන් අඩු කරනු ලැබේ.

12.2 අසාර්ථක පුනරාවර්තනය වැළැක්වීම සඳහා පියවර අතර මයික්‍රොවේල් වියළීමට ඉඩ නොතබන්න සහ මයික්‍රොවේල් රඳවනයට තට්ටු කළ වහාම ඊළඟ පියවර ක්‍රියාත්මක කරන්න.

12.3භාවිතා කිරීමට පෙර එක් එක් ප්රතික්රියාකාරක සමජාතීය කරන්න.

12.4ඔබේ සම නැවතුම් ද්‍රාවණයෙන් ඈත් කර තබන්න, මන්ද එය 2M H වේ₂SO₄විසඳුමක්.

12.5 කල් ඉකුත් වූ කට්ටල භාවිතා නොකරන්න.විවිධ කාණ්ඩවල ප්රතික්රියාකාරක හුවමාරු නොකරන්න, මන්ද එය සංවේදීතාව අඩු කරයි.

12.6 ගබඩා තත්ත්වය:

ELISA කට්ටල 2-8℃ දී තබා ගන්න, කැටි නොකරන්න.සීල් රෙස්ට් මයික්‍රොවෙල් තහඩු සියලුම ඉන්කියුබේෂන් වලදී සෘජු හිරු එළියෙන් වළකින්න.මයික්රොටයිටර් තහඩු ආවරණය කිරීම රෙකමදාරු කරනු ලැබේ.

12.7 ප්‍රතික්‍රියාකාරක නරක අතට හැරීම සඳහා ඇඟවීම්:

උපස්ථර ද්රාවණය වර්ණ බවට පත් වුවහොත් එය අත්හැර දැමිය යුතුය.

ශුන්‍ය ප්‍රමිතියේ අවශෝෂණ අගය (450/630nm) 0.5 (A450nm＜0.5) ට වඩා අඩු නම් ප්‍රතික්‍රියාකාරක නරක අතට හැරිය හැක.

12.8 A සහ ​​Solution B එකතු කිරීමෙන් පසු වර්ණ ගැන්වීමේ ප්‍රතික්‍රියාවට මිනිත්තු 15ක් අවශ්‍ය වේ. තවද වර්ණය තීරණය කළ නොහැකි තරම් සැහැල්ලු නම් ඔබට ඉන්කියුබේෂන් කාල පරාසය විනාඩි 20 සිට තවත් දිගු කළ හැක.මිනිත්තු 25 නොඉක්මවන්න, ඊට පටහැනිව, ඉන්කියුබේෂන් කාලය නිසි ලෙස කෙටි කරන්න.

12.9 ප්‍රශස්ත ප්‍රතික්‍රියා උෂ්ණත්වය 25℃ වේ.ඉහළ හෝ අඩු උෂ්ණත්වය සංවේදීතාවයේ සහ අවශෝෂණ අගයන්හි වෙනස්කම් වලට තුඩු දෙනු ඇත.

13. ගබඩා කිරීම

ගබඩා තත්ත්වය: 2-8℃.

ගබඩා කාලය: මාස 12 යි.