продукт

Принцип тестування

Цей набір заснований на технології непрямого конкурентного ELISA.Лунки мікротитратора покриті антигеном зв’язування.Флумехінзалишок у зразку конкурує за антитіло з антигеном, покритим пластиною для мікротитрації.Після додавання антитіла, міченого ферментом, для відображення кольору використовується субстрат ТМВ.Абсорбція зразка негативно пов’язана з вмістом тетрацикліну в ньому, після порівняння зі стандартною кривою, помноженою на кратне розведення, можна розрахувати кількість залишку флумехіну в зразку.

Додатки

Цей набір можна використовувати для кількісного та якісного аналізу залишків флумехіну в меді.

Перехресні реакції

Флумеквін …………………..……………………… 100%

Необхідні матеріали

Обладнання

┅┅Спектрофотометр для мікропланшетів (450 нм/630 нм)

┅┅Гомогенізатор або стомахер

┅┅Шейкер

┅┅Вихровий змішувач

┅┅Центрифуга

┅┅Аналітичні ваги (індуктивність: 0,01g)

┅┅Градуйована піпетка: 15 мл

┅┅Гумова піпетка

┅┅Полістирольна центрифужна пробірка: 15 мл, 50 мл

┅┅Скляна пробірка: 10 мл

┅┅Мікропіпетки: 20мл-200мл, 100мл -10000мл,

250 мл - мультипіпетка

Реагенти

┅┅н-гексан (AR)

┅┅Метиленхлорид (AR)

┅┅Ацетонітрил (AR)

┅┅Деіонізована вода

-----Концентрована соляна кислота (АР)

Компоненти набору

● Мікротитровальний планшет із 96 лунками, покритими антигеном

● Стандартні розчини (6 пляшок × 1 мл/пляшка)

0ppb, 0,3ppb, 1,2ppb, 4,8ppb, 19,2ppb, 76,8ppb

● Стандартний контроль високої концентрації: (1 мл/пляшка)

…………………………………………………......100ppb

● Ферментний кон'югат 12 мл………………………... червоний ковпачок

● Розчин антитіл 7 мл …………..……..….…..зелений ковпачок

● Розчин А 7 мл………………………..………..білий ковпачок

● Розчин B 7 мл …………….…………..………… червоний ковпачок

● Стоп розчин 7 мл ……………………..………жовтий ковпачок

● 20X Концентрований миючий розчин 40 мл

………………………………………..…..прозорий ковпачок

●2X Екстракційний розчин 50мл………………...… блакитний ковпачок

Приготування реагентів

7.1 Проба меду

Розчин 1: 0,2 М розчин соляної кислоти

Вага 41,5 мл Концентрована соляна кислота, розвести деіонізованою водою до 500 мл.

Розчин 2: Промивний розчин

Розведіть концентрований промивний розчин деіонізованою водою в об'ємному співвідношенні 1:19, яка буде використовуватися для промивання пластин.розведений розчин можна зберігати при 4 ℃ протягом 1 місяця.

Рішення3: екстракційний розчин

Розведіть 2× концентрований екстракційний розчин деіонізованою водою в об’ємному співвідношенні 1:1 (або в залежності від вимоги), який буде використовуватися для екстракції зразка.Цей розведений розчин можна зберігати протягом 1 місяця при 4 ℃.

Приготування зразків

8.1 Повідомлення та запобіжні заходи для користувачів перед початком роботи

(a) Будь ласка, використовуйте одноразові наконечники в процесі експерименту та змінюйте наконечники, коли поглинаєте інший реагент.

(b) Переконайтеся, що всі експериментальні інструменти чисті, інакше це вплине на результат аналізу.

8.2Зразок меду

----- Зважте 2 г ± 0,05 г зразка меду в полістирольну центрифужну пробірку на 50 мл,

-----Додайте 2 мл 0,2 М розчину соляної кислоти (розчин 1), перемішайте, щоб повністю перемішати, потім додайте 8 мл метиленхлориду, струшуйте шейкером протягом 5 хвилин, щоб повністю розчинити;

----- Центрифуга протягом 10 хвилин, принаймні 3000g при кімнатній температурі (20-25 ℃);

-----Видаліть надосадову фазу, наберіть 2 мл органічного розчину субстрату в скляну пробірку на 10 мл. Висушіть субстрат під водяною банею в потокі азоту (50-60 ℃)

----- Додайте 1 мл н-гексану, перемішайте протягом 30 секунд, потім додайте 1 мл екстракційного розчину (розчин 3), знову перемішайте протягом 1 хв.Центрифугувати протягом 5 хвилин, принаймні 3000 g при кімнатній температурі (20-25 ℃);

-----Видалити супернатантну фазу, взяти 50 мл для аналізу;

9. Процес аналізу

9.1 Повідомлення перед аналізом

9.1.1 Переконайтеся, що всі реагенти та мікролунки мають кімнатну температуру (20-25 ℃).

9.1.2 Поверніть усі інші реагенти до 2-8 ℃ одразу після використання.

9.1.3 Правильне промивання мікролунок є важливим етапом у процесі аналізу;це життєво важливий фактор для повторюваності аналізу ELISA.

9.1.4 Уникайте світла та накривайте мікролунки під час інкубації.

9.2 Етапи аналізу

9.2.1 Вийміть усі реагенти при кімнатній температурі (20-25 ℃) більше ніж на 30 хвилин, гомогенізуйте перед використанням.

9.2.2 Вийміть необхідні мікролунки та негайно помістіть решту в мішок на блискавці при 2-8 ℃.

9.2.3 Перед використанням розведений промивний розчин слід нагріти до кімнатної температури.

9.2.4номер:Пронумеруйте кожну позицію мікролунки, і всі стандарти та зразки повинні бути використані в двох примірниках.Запишіть положення стандартів і зразків.

9.2.5Додайте стандартний розчин/зразок:Додайте 50 мкл стандартного розчину або готового зразка у відповідні лунки.Додайте 50 мкл розчину антитіл.Обережно перемішайте, струшуючи планшет вручну, і інкубуйте протягом 30 хвилин при 25 ℃ під кришкою.

9.2.6мити:Обережно зніміть кришку, видаліть рідину з лунок і промийте мікролунки 250 мкл розведеного промивного розчину (розчин 2) з інтервалом 10 секунд 4-5 разів.Вбирайте залишки води абсорбуючим папером (залишки бульбашок повітря можна видалити невикористаним наконечником).

9.2.8.Ферментний кон'югат:Додайте 100 мл розчину ферментного кон’югату в кожну лунку, обережно перемішайте, струшуючи планшет вручну, і інкубуйте протягом 30 хвилин при 25 ℃ під кришкою.Повторіть крок прання ще раз.

9.2.8Забарвлення:Додайте 50 мкл розчину A та 50 мкл розчину B до кожної лунки.Обережно перемішайте, струшуючи планшет вручну, та інкубуйте протягом 15 хвилин при 25 ℃ під кришкою (див. 12.8).

9.2.9міра:Додайте 50 мкл стоп-розчину в кожну лунку.Обережно перемішайте, струшуючи пластину вручну, і виміряйте оптичну густину при 450 нм проти повітряного холостого зразка (рекомендується вимірювати з подвійною довжиною хвилі 450/630 нм. Зчитайте результат протягом 5 хвилин після додавання стоп-розчину.) (Ми також можемо вимірювати візуально). без розчину для зупинки (коротше про інструмент ELIASA)

Результати

10.1 Відсоткове поглинання

Середні значення значень абсорбції, отримані для стандартів і зразків, ділять на значення абсорбції першого стандарту (нульового стандарту) і множать на 100%.Таким чином, нульовий стандарт дорівнює 100%, а значення абсорбції наводяться у відсотках.

Поглинання (%) = B/B0 × 100%

B — стандарт абсорбції (або зразок)

B0 ——нульовий стандарт абсорбції

10.2 Стандартна крива

Щоб намалювати стандартну криву: Візьміть значення абсорбції стандартів як вісь ординат, напівлогарифмічне значення концентрації стандартного розчину флумехіну (ppb) як вісь абсцисс.

--- Theфлумехінконцентрація кожного зразка (ppb), яку можна прочитати з калібрувальної кривої, множиться на відповідне кратне розведення кожного зразка, що слідує, і отримується фактична концентрація зразка.

Для зменшення даних наборів ІФА розроблено спеціальне програмне забезпечення, яке надається за запитом.

11. Чуйність, точність і точність

Тест на чутливість:0,3ppb

Коефіцієнт розведення зразка меду: 2

Межа виявлення

Проба меду ------------------------------------------------- -1ppb

Точність

Проба меду -------------------------------------------------- 90±20 %

Точність

Коефіцієнт варіації набору ІФА менше 10%.

12. Повідомлення

12.1 Середні значення значень абсорбції, отримані для стандартів і зразків, будуть зменшені, якщо реагенти і зразки не були доведені до кімнатної температури (20-25 ℃).

12.2 Не дозволяйте мікролункам висихати між етапами, щоб уникнути невдалого повторення, і виконуйте наступний крок відразу після постукування тримача мікролунок.

12.3.Гомогенізуйте кожен реагент перед використанням.

12.4.Тримайте шкіру подалі від стоп-розчину, оскільки це 2M H₂SO₄рішення.

12.5 Не використовуйте прострочені комплекти.Не міняйте реагенти різних партій, оскільки це знизить чутливість.

12.6 Умови зберігання:

Зберігайте набори ELISA при 2-8 ℃, не заморожуйте.Уникайте прямого сонячного світла під час усіх інкубацій.Рекомендовано накривати мікропланшети.

12.7 Ознаки несправності реагентів:

Від розчину субстрату слід відмовитися, якщо він забарвлюється.

Реагенти можуть бути поганими, якщо значення абсорбції (450/630 нм) нульового стандарту менше 0,5 (A450 нм <0,5).

12.8 Реакція забарвлення потребує 15 хвилин після додавання розчину A та розчину B. І ви можете продовжити діапазон часу інкубації від 20 хвилин до більше, якщо колір занадто світлий для визначення.Ніколи не перевищуйте 25 хв. Навпаки, належним чином скоротіть час інкубації.

12.9 Оптимальна температура реакції становить 25 ℃.Вища або нижча температура призведе до змін чутливості та значень поглинання.

13. Зберігання

Умови зберігання: 2-8 ℃.

Термін зберігання: 12 місяців.