производ

Принцип теста

Овај комплет је заснован на индиректно-компетитивној ЕЛИСА технологији.Јамице за микротитар су обложене купложним антигеном.Флумекуинеостатак у узорку се такмичи са антигеном обложеним на микротитарској плочи за антитело.Након додавања анти-антитела обележеног ензима, ТМБ супстрат се користи да би се приказала боја.Апсорбанца узорка је негативно повезана са тетрациклином који се налази у њему, након поређења са стандардном кривом, помноженом са вишеструким разблажењем, може се израчунати количина остатка Флумекуине у узорку.

Апликације

Овај комплет се може користити у квантитативној и квалитативној анализи остатка флумекина у меду.

Унакрсне реакције

Флумекуине …………………………………………… 100%

Потребни материјали

Опрема

┅┅ Спектрофотометар микротитарске плоче (450нм/630нм)

┅┅Хомогенизатор или стомацхер

┅┅Схакер

┅┅Вортек миксер

┅┅Центрифуга

┅┅Аналитичка вага (индуктивност: 0,01 г)

┅┅Градована пипета: 15мл

┅┅Гумена сијалица за пипету

┅┅ Полистиренска епрувета за центрифугу: 15мл, 50мл

┅┅Стаклена епрувета: 10мл

┅┅Микропипете: 20мл-200мл, 100мл-10000мл,

250мл -мултипипета

Реагенси

┅┅н-хексан (АР)

┅┅Метилен хлорид (АР)

┅┅ацетонитрил (АР)

┅┅Дејонизована вода

----- Концентрована хлороводонична киселина (АР)

Компоненте комплета

● Микротитарска плоча са 96 јажица обложених антигеном

● Стандардни раствори (6 боца×1мл/боца)

0ппб, 0,3ппб, 1,2ппб, 4,8ппб, 19,2ппб, 76,8ппб

● Стандардна контрола високе концентрације: (1мл/боца)

……………………………………………………………………………100ппб

● Ензимски коњугат 12мл………………………………... црвена капица

● Раствор антитела 7мл …………..……..….…..зелена капица

● Раствор А 7мл……..…………………..………..бели поклопац

● Раствор Б 7мл …………….…………..………… црвена капица

● Стоп раствор 7мл ……………………..………жути поклопац

● 20КСКонцентровани раствор за прање 40мл

………………………………………..…..провидна капа

●2Кс раствор за екстракцију 50мл……………………………… плави поклопац

Припрема реагенса

7.1 Узорак меда

Раствор 1: 0,2 М раствор хлороводоничне киселине

Тежина 41,5 мл Концентрована хлороводонична киселина, разблажена дејонизованом водом до 500 мл.

Решење 2: Раствор за прање

Концентровани раствор за прање разблажите дејонизованом водом у запреминском односу 1:19, која ће се користити за прање плоча.разблажени раствор се може чувати на 4℃ 1 месец.

Решење3: раствор за екстракцију

Разблажите 2×концентровани раствор за екстракцију дејонизованом водом у запреминском односу 1:1 (или зависно од захтева), који ће се користити за екстракцију узорка.Овај разблажени раствор се може чувати 1 месец на 4℃.

Припреме узорака

8.1 Обавештење и мере предострожности за кориснике пре рада

(а) Користите једнократне врхове у процесу експеримента и промените врхове када апсорбујете другачији реагенс.

(б) Уверите се да су сви експериментални инструменти чисти, иначе ће утицати на резултат анализе.

8.2Узорак меда

----- Измерити 2 г ± 0,05 г узорка меда у епрувету за центрифугу од полистирена од 50 мл,

-----Додајте 2мл 0,2М раствора хлороводоничне киселине (раствор 1), промешајте да се потпуно измеша, затим додајте 8мл метилен хлорида, мућкајте 5 мин да се потпуно раствори;

-----Центрифугирајте 10 мин, најмање 3000г на собној температури (20-25℃);

----- Уклоните супернатантну фазу, узмите 2 мл органског раствора супстрата у стаклену епрувету од 10 мл. осушите подлогу у воденом купатилу са протоком азота (50-60℃)

-----Додајте 1 мл н-хексана, мешајте 30 секунди, затим додајте 1 мл раствора за екстракцију (раствор 3), поново мешајте 1 мин.Центрифугирајте 5 минута, најмање 3000 г на собној температури (20-25 ℃);

-----Уклонити фазу супернатанта, узети 50мл за анализу;

9. Процес анализе

9.1 Обавештење пре анализе

9.1.1 Уверите се да су сви реагенси и микројажице на собној температури (20-25℃).

9.1.2 Вратите све остале реагенсе на 2-8℃ одмах након употребе.

9.1.3 Правилно прање микро-јажица је важан корак у процесу анализе;то је витални фактор за понављање ЕЛИСА анализе.

9.1.4 Избегавајте светлост и покријте микро јажице током инкубације.

9.2 Кораци теста

9.2.1 Извадите све реагенсе на собној температури (20-25℃) дуже од 30 минута, хомогенизујте пре употребе.

9.2.2 Извадите потребне микро-јажице, а остатак одмах вратите у врећу са затварачем на 2-8 ℃.

9.2.3 Разблажени раствор за прање треба поново загрејати да буде на собној температури пре употребе.

9.2.4Број:Означите сваку позицију микробужица и све стандарде и узорке треба изводити у дупликату.Забележите положаје стандарда и узорака.

9.2.5Додајте стандардни раствор/узорак:Додајте 50 µл стандардног раствора или припремљеног узорка у одговарајуће бунарчиће.Додати 50 µл раствора антитела.Лагано промешајте ручним протресањем плоче и инкубирајте 30 минута на 25 ℃ са поклопцем.

9.2.6прање:Пажљиво уклоните поклопац и пречистите течност из јажица и исперите микро-јажице са 250 µл разблаженог раствора за прање (раствор 2) у интервалима од 10 секунди 4-5 пута.Преосталу воду апсорбујте упијајућим папиром (остатак мехурића ваздуха се може елиминисати неискоришћеним врхом).

9.2.8.Ензимски коњугат:Додати раствор ензимског коњугата 100 мл у сваки бунар, лагано промешати ручним протресањем плоче и инкубирати 30 минута на 25 ℃ са поклопцем.Поновите корак прања поново.

9.2.8Боја:Додајте 50 µл раствора А и 50 µл раствора Б у сваки бунар.Лагано промешајте ручним протресањем плоче и инкубирајте 15 минута на 25℃ са поклопцем (видети 12.8).

9.2.9мера:Додајте 50 µл раствора за заустављање у сваки бунар.Пажљиво промешајте ручно протресајући плочу и измерите апсорбанцију на 450 нм у односу на празну површину (Предлаже се мерење са двоструком таласном дужином од 450/630 нм. Очитајте резултат у року од 5 минута након додавања стоп раствора.) (Такође можемо мерити очима без решења за заустављање у кратком року од ЕЛИАСА инструмента)

Резултати

10.1 Проценат апсорпције

Средње вредности вредности апсорпције добијене за стандарде и узорке подељене су са вредношћу апсорпције првог стандарда (нулти стандард) и помножене са 100%.Нулти стандард је на тај начин једнак 100%, а вредности апсорпције су наведене у процентима.

Апсорбанца (%) = Б/Б0 ×100%

Б ——стандард апсорпције (или узорак)

Б0 —— стандард нулте апсорпције

10.2 Стандардна крива

Да бисте нацртали стандардну криву: Узмите вредност апсорпције стандарда као и-осу, полулогаритамску од концентрације раствора стандарда флумеквина (ппб) као к-осу.

--- Тхефлумекинконцентрација сваког узорка (ппб), која се може очитати из калибрационе криве, множи се одговарајућим вишекратником разблажења сваког узорка који се прати, и добија се стварна концентрација узорка.

За редукцију података ЕЛИСА комплета развијен је посебан софтвер који се може обезбедити на захтев.

11. Осетљивост, тачност и прецизност

Тест Сенситивити:0.3ппб

Мед Фактор разблажења узорка: 2

Граница детекције

Узорак меда------------------------------------------------ -1ппб

Прецизност

Узорак меда ----------------------------------------------------- 90±20 %

Прецизност

Коефицијент варијације ЕЛИСА комплета је мањи од 10%.

12. Обавештење

12.1 Средње вредности вредности апсорпције добијене за стандарде и узорке биће смањене ако реагенси и узорци нису подешени на собну температуру (20-25℃).

12.2 Не дозволите да се микро-јажице осуше између корака да бисте избегли неуспешно понављање и извршите следећи корак одмах након додиривања држача микро-јажица.

12.3.Хомогенизирајте сваки реагенс пре употребе.

12.4.Држите кожу даље од решења за заустављање јер је то 2М Х₂SO₄решење.

12.5 Не користите комплете који су застарели.Не мењајте реагенсе различитих серија, јер ће то пасти осетљивост.

12.6 Услови складиштења:

Држите ЕЛИСА комплете на 2-8 ℃, немојте замрзавати.Заптивне плоче са микро јажицом Избегавајте директну сунчеву светлост током свих инкубација.Препоручује се покривање микротитарских плоча.

12.7 Индикације да се реагенси покваре:

Раствор супстрата треба напустити ако добије боју.

Реагенси могу бити лоши ако је вредност апсорпције (450/630нм) нултог стандарда мања од 0,5 (А450нм＜0,5).

12.8 За реакцију бојења потребно је 15 минута након додавања раствора А и раствора Б. Можете продужити време инкубације од 20 минута на више ако је боја превише светла да би се одредила.Никада не прелазите 25 минута, напротив, правилно скратите време инкубације.

12.9 Оптимална температура реакције је 25 ℃.Виша или нижа температура ће довести до промене вредности осетљивости и апсорпције.

13. Складиштење

Услови складиштења: 2-8 ℃.

Период складиштења: 12 месеци.