தயாரிப்பு

சோதனைக் கோட்பாடு

இந்த கிட் மறைமுக-போட்டி ELISA தொழில்நுட்பத்தை அடிப்படையாகக் கொண்டது.மைக்ரோடிட்டர் கிணறுகள் இணைக்கும் ஆன்டிஜெனுடன் பூசப்பட்டிருக்கும்.ஃப்ளூம்குயின்மாதிரியில் உள்ள எச்சம் ஆன்டிபாடிக்காக மைக்ரோடிட்டர் தட்டில் பூசப்பட்ட ஆன்டிஜெனுடன் போட்டியிடுகிறது.ஆன்டிபாடி என பெயரிடப்பட்ட நொதியைச் சேர்த்த பிறகு, நிறத்தைக் காட்ட TMB அடி மூலக்கூறு பயன்படுத்தப்படுகிறது.மாதிரியின் உறிஞ்சுதல் டெட்ராசைக்ளின் வசிப்பிடத்துடன் எதிர்மறையாக தொடர்புடையது, நிலையான வளைவுடன் ஒப்பிட்டுப் பிறகு, நீர்த்த பலத்தால் பெருக்கப்படுகிறது, மாதிரியில் உள்ள Flumequine எச்சத்தின் அளவைக் கணக்கிடலாம்.

விண்ணப்பங்கள்

தேனில் உள்ள ஃப்ளூமெகுயின் எச்சத்தின் அளவு மற்றும் தரமான பகுப்பாய்வில் இந்த கிட் பயன்படுத்தப்படலாம்.

குறுக்கு எதிர்வினைகள்

ஃப்ளூம்குயின் …………………………………………… 100%

தேவையான பொருட்கள்

உபகரணங்கள்

┅┅மைக்ரோடைட்டர் பிளேட் ஸ்பெக்ட்ரோஃபோட்டோமீட்டர் (450nm/630nm)

┅┅ஒரிசைப்பான் அல்லது வயிறு

┅┅ஷேக்கர்

┅┅சுழல் கலவை

┅┅மையவிலக்கு

┅┅பகுப்பாய்வு சமநிலை (தூண்டல்: 0.01 கிராம்)

┅┅பட்டம் பெற்ற பைப்பெட்: 15 மிலி

┅┅ரப்பர் பைப்பட் பல்ப்

┅┅பாலிஸ்டிரீன் மையவிலக்கு குழாய்: 15மிலி, 50மிலி

┅┅கண்ணாடி சோதனை குழாய்: 10 மிலி

┅┅மைக்ரோபிபெட்டுகள்: 20ml-200ml, 100ml -10000ml,

250 மிலி - பல்முனை

எதிர்வினைகள்

┅┅n-hexane(AR)

┅┅மெத்திலீன் குளோரைடு(AR)

┅┅அசிட்டோனிட்ரைல்(AR)

┅┅டீயோனைஸ் செய்யப்பட்ட நீர்

-----செறிவூட்டப்பட்ட ஹைட்ரோகுளோரிக் அமிலம்(AR)

கிட் கூறுகள்

● ஆன்டிஜென் பூசப்பட்ட 96 கிணறுகள் கொண்ட மைக்ரோடிட்டர் தட்டு

● நிலையான தீர்வுகள்(6 பாட்டில்கள்×1மிலி/பாட்டில்)

0ppb, 0.3ppb, 1.2ppb, 4.8ppb, 19.2ppb, 76.8ppb

● உயர் செறிவு நிலையான கட்டுப்பாடு:(1ml/பாட்டில்)

………………………………………………………100ppb

● என்சைம் கன்ஜுகேட் 12மிலி……………………………… சிவப்பு தொப்பி

● ஆன்டிபாடி கரைசல் 7மிலி …………………………….. பச்சை தொப்பி

● தீர்வு A 7ml……………………………………………….. வெள்ளை தொப்பி

● கரைசல் B 7ml ………………………………… சிவப்பு தொப்பி

● நிறுத்தக் கரைசல் 7மிலி ………………………………………… மஞ்சள் தொப்பி

● 20Xசெறிவூட்டப்பட்ட கழுவும் கரைசல் 40மிலி

…………………………………………….. வெளிப்படையான தொப்பி

●2X பிரித்தெடுத்தல் தீர்வு 50மிலி………………………… நீல தொப்பி

எதிர்வினைகள் தயாரிப்பு

7.1 தேன் மாதிரி

தீர்வு 1 : 0.2 M ஹைட்ரோகுளோரிக் அமிலக் கரைசல்

எடை 41.5 மிலி செறிவூட்டப்பட்ட ஹைட்ரோகுளோரிக் அமிலம், 500 மிலிக்கு டீயோனைஸ் செய்யப்பட்ட தண்ணீரில் நீர்த்தவும்.

தீர்வு 2: தீர்வு கழுவவும்

1:19 என்ற அளவு விகிதத்தில் டீயோனைஸ் செய்யப்பட்ட தண்ணீரில் செறிவூட்டப்பட்ட கழுவும் கரைசலை நீர்த்துப்போகச் செய்யுங்கள், இது தட்டுகளைக் கழுவுவதற்குப் பயன்படுத்தப்படும்.நீர்த்த கரைசலை 4℃ 1 மாதத்திற்கு சேமிக்கலாம்.

தீர்வு3: பிரித்தெடுத்தல் தீர்வு

2× செறிவூட்டப்பட்ட பிரித்தெடுத்தல் கரைசலை 1:1 அளவு விகிதத்தில் டீயோனைஸ் செய்யப்பட்ட தண்ணீருடன் நீர்த்துப்போகச் செய்யவும் (அல்லது தேவையைப் பொறுத்து), இது மாதிரி பிரித்தெடுக்கப் பயன்படும்.இந்த நீர்த்த கரைசலை 4℃ வெப்பநிலையில் 1 மாதத்திற்கு சேமிக்க முடியும்.

மாதிரி ஏற்பாடுகள்

8.1 செயல்பாட்டிற்கு முன் பயனர்களுக்கான அறிவிப்பு மற்றும் முன்னெச்சரிக்கைகள்

(அ) ​​பரிசோதனையின் செயல்பாட்டில், தயவு செய்து ஒரு முறை உதவிக்குறிப்புகளைப் பயன்படுத்தவும், மேலும் வெவ்வேறு மறுஉருவாக்கத்தை உறிஞ்சும் போது உதவிக்குறிப்புகளை மாற்றவும்.

(ஆ) அனைத்து சோதனைக் கருவிகளும் சுத்தமாக இருப்பதை உறுதிசெய்து கொள்ளுங்கள், இல்லையெனில் அது மதிப்பீட்டு முடிவை பாதிக்கும்.

8.2தேன் மாதிரி

-------ஒரு 50மிலி பாலிஸ்டிரீன் மையவிலக்கு குழாயில் 2g±0.05g தேன் மாதிரியை எடையுங்கள்,

-----2ml 0.2 M ஹைட்ரோகுளோரிக் அமிலக் கரைசலை (தீர்வு 1), சுழலியை முழுமையாகக் கலக்கவும், பின்னர் 8ml மெத்திலீன் குளோரைடைச் சேர்த்து, 5 நிமிடம் ஷேக்கருடன் குலுக்கி முழுமையாகக் கரைக்கவும்;

-----10 நிமிடங்களுக்கு மையவிலக்கு, அறை வெப்பநிலையில் குறைந்தது 3000கிராம் (20-25℃);

-----அதிகப்படியான கட்டத்தை அகற்றி, 2 மில்லி அடி மூலக்கூறு கரிமக் கரைசலை 10 மில்லி கண்ணாடிக் குழாயில் எடுக்கவும். நைட்ரஜன் ஓட்டம் (50-60℃) நீர் குளியல் அடியில் உலர்த்தவும்.

-----1 மில்லி என்-ஹெக்ஸேன், 30 வினாடிகளுக்கு சுழல் சேர்க்கவும், பின்னர் 1மிலி பிரித்தெடுத்தல் கரைசல் (தீர்வு 3) , 1 நிமிடத்திற்கு மீண்டும் சுழல் சேர்க்கவும்.5 நிமிடங்களுக்கு மையவிலக்கு, அறை வெப்பநிலையில் குறைந்தது 3000 கிராம் (20-25℃);

-----மேற்பரப்பு கட்டத்தை அகற்றவும், மதிப்பீட்டிற்கு 50 மிலி எடுக்கவும்;

9. மதிப்பீட்டு செயல்முறை

9.1 மதிப்பீட்டிற்கு முன் கவனிக்கவும்

9.1.1 அனைத்து உலைகளும் மைக்ரோவெல்களும் அறை வெப்பநிலையில் (20-25℃) இருப்பதை உறுதி செய்து கொள்ளவும்.

9.1.2 பயன்படுத்திய உடனேயே மீதமுள்ள அனைத்து வினைகளையும் 2-8℃ க்கு திருப்பி விடுங்கள்.

9.1.3 மைக்ரோவெல்களை சரியாகக் கழுவுவது மதிப்பீட்டின் செயல்பாட்டில் ஒரு முக்கியமான படியாகும்;இது ELISA பகுப்பாய்வின் மறுநிகழ்வுக்கான முக்கிய காரணியாகும்.

9.1.4 அடைகாக்கும் போது ஒளியைத் தவிர்த்து மைக்ரோவெல்களை மூடி வைக்கவும்.

9.2 மதிப்பீடு படிகள்

9.2.1 அறை வெப்பநிலையில் (20-25℃) 30 நிமிடங்களுக்கு மேல் அனைத்து வினைகளையும் எடுத்து, பயன்படுத்துவதற்கு முன் ஒரே மாதிரியாக மாற்றவும்.

9.2.2 தேவையான மைக்ரோவெல்களை வெளியே எடுத்து, மீதமுள்ளவற்றை 2-8℃ இல் உடனடியாக ஜிப்-லாக் பையில் திருப்பி விடுங்கள்.

9.2.3 நீர்த்த வாஷ் கரைசலை பயன்படுத்துவதற்கு முன் அறை வெப்பநிலையில் இருக்கும்படி மீண்டும் சூடாக்க வேண்டும்.

9.2.4எண்:ஒவ்வொரு மைக்ரோவெல் நிலையை எண்ணி அனைத்து தரநிலைகள் மற்றும் மாதிரிகள் நகலில் இயக்கப்பட வேண்டும்.தரநிலைகள் மற்றும் மாதிரிகள் நிலைகளை பதிவு செய்யவும்.

9.2.5நிலையான தீர்வு/மாதிரியைச் சேர்க்கவும்:50 µl நிலையான தீர்வு அல்லது தயாரிக்கப்பட்ட மாதிரியை தொடர்புடைய கிணறுகளில் சேர்க்கவும்.50µl ஆன்டிபாடி கரைசலை சேர்க்கவும்.தட்டை கைமுறையாக அசைப்பதன் மூலம் மெதுவாகக் கலந்து, மூடியுடன் 25 டிகிரியில் 30 நிமிடங்கள் அடைகாக்கவும்.

9.2.6கழுவுதல்:மூடியை மெதுவாக அகற்றி, கிணற்றில் இருந்து திரவத்தை சுத்தப்படுத்தி, மைக்ரோவெல்களை 250µl நீர்த்த வாஷ் கரைசலுடன் (தீர்வு 2) 10 வினாடிகள் இடைவெளியில் 4-5 முறை துவைக்கவும்.எஞ்சியிருக்கும் தண்ணீரை உறிஞ்சக்கூடிய காகிதத்துடன் உறிஞ்சவும் (மீதமுள்ள காற்று குமிழியை பயன்படுத்தாத முனையுடன் அகற்றலாம்).

9.2.8.என்சைம் இணைப்பு:ஒவ்வொரு கிணற்றிலும் 100மிலி என்சைம் கான்ஜுகேட் கரைசலைச் சேர்த்து, தட்டைக் கைமுறையாக அசைப்பதன் மூலம் மெதுவாகக் கலந்து, மூடியுடன் 25℃ 30 நிமிடங்களுக்கு அடைகாக்கவும்.கழுவும் படியை மீண்டும் செய்யவும்.

9.2.8வண்ணம்:ஒவ்வொரு கிணற்றிலும் 50µl கரைசல் A மற்றும் 50µl கரைசல் B சேர்க்கவும்.தட்டை கைமுறையாக அசைப்பதன் மூலம் மெதுவாகக் கலந்து, 15 நிமிடங்களுக்கு 25℃ க்கு அடைகாக்கவும் (பார்க்க 12.8).

9.2.9அளவீடு:ஒவ்வொரு கிணற்றிலும் 50µl நிறுத்தக் கரைசலைச் சேர்க்கவும்.தட்டைக் கைமுறையாக அசைப்பதன் மூலம் மெதுவாகக் கலக்கவும் மற்றும் காற்றின் வெற்றிடத்திற்கு எதிராக 450nm இல் உறிஞ்சுதலை அளவிடவும் (இது 450/630nm என்ற இரட்டை அலைநீளத்துடன் அளவிட பரிந்துரைக்கப்படுகிறது. ஸ்டாப் கரைசலைச் சேர்த்த பிறகு 5 நிமிடங்களுக்குள் முடிவைப் படிக்கவும். ) (பார்வை மூலமும் நாம் அளவிடலாம். ELIASA கருவியின் சுருக்கத்தில் நிறுத்த தீர்வு இல்லாமல்)

முடிவுகள்

10.1 சதவீதம் உறிஞ்சுதல்

தரநிலைகள் மற்றும் மாதிரிகளுக்கு பெறப்பட்ட உறிஞ்சுதல் மதிப்புகளின் சராசரி மதிப்புகள் முதல் தரநிலையின் (பூஜ்ஜிய தரநிலை) உறிஞ்சுதல் மதிப்பால் வகுக்கப்படுகின்றன மற்றும் 100% ஆல் பெருக்கப்படுகின்றன.பூஜ்ஜிய தரநிலையானது 100% க்கு சமமாக செய்யப்படுகிறது மற்றும் உறிஞ்சுதல் மதிப்புகள் சதவீதங்களில் மேற்கோள் காட்டப்படுகின்றன.

உறிஞ்சுதல் (%) = B/B0 × 100%

B ——உறிஞ்சும் தரநிலை (அல்லது மாதிரி)

B0 ——உறிஞ்சுதல் பூஜ்ஜிய தரநிலை

10.2 நிலையான வளைவு

ஒரு நிலையான வளைவை வரைய: தரங்களின் உறிஞ்சுதல் மதிப்பை y-அச்சு, செமி மடக்கை ஃப்ளூமெகுயின் ஸ்டாண்டர்ட்ஸ் கரைசலின் (பிபிபி) செறிவு x-அச்சாக எடுத்துக்கொள்ளவும்.

--- திஃப்ளூம்குயின்ஒவ்வொரு மாதிரியின் செறிவு (பிபிபி), அளவுத்திருத்த வளைவில் இருந்து படிக்க முடியும், பின்தொடரும் ஒவ்வொரு மாதிரியின் தொடர்புடைய நீர்த்துப்போகினால் பெருக்கப்படுகிறது, மேலும் மாதிரியின் உண்மையான செறிவு பெறப்படுகிறது.

ELISA கருவிகளின் தரவு குறைப்புக்காக, சிறப்பு மென்பொருள் உருவாக்கப்பட்டுள்ளது, இது கோரிக்கையின் பேரில் வழங்கப்படலாம்.

11. உணர்திறன், துல்லியம் மற்றும் துல்லியம்

சோதனை உணர்திறன்：0.3பிபிபி

தேன் மாதிரி நீர்த்த காரணி: 2

கண்டறிதல் வரம்பு

தேன் மாதிரி ---------------------------------------------- -1 பிபிபி

துல்லியம்

தேன் மாதிரி ------------------------------------------- 90±20 %

துல்லியம்

ELISA கிட்டின் மாறுபாடு குணகம் 10% க்கும் குறைவாக உள்ளது.

12. கவனிக்கவும்

12.1 வினைப்பொருட்கள் மற்றும் மாதிரிகள் அறை வெப்பநிலையில் (20-25℃) ஒழுங்குபடுத்தப்படாவிட்டால், தரநிலைகள் மற்றும் மாதிரிகளுக்கு பெறப்பட்ட உறிஞ்சுதல் மதிப்புகளின் சராசரி மதிப்புகள் குறைக்கப்படும்.

12.2 மீண்டும் மீண்டும் நிகழும் தோல்வியைத் தவிர்க்க, மைக்ரோவெல்ஸ் ஹோல்டரைத் தட்டிய உடனேயே அடுத்த படியை இயக்குவதற்கு படிகளுக்கு இடையில் மைக்ரோவெல்களை உலர அனுமதிக்காதீர்கள்.

12.3பயன்படுத்துவதற்கு முன் ஒவ்வொரு மறுஉருவாக்கத்தையும் ஒரே மாதிரியாக மாற்றவும்.

12.4உங்கள் தோலை நிறுத்தும் தீர்விலிருந்து விலக்கி வைக்கவும், அது 2M H ஆகும்₂SO₄தீர்வு.

12.5 காலாவதியான கருவிகளைப் பயன்படுத்த வேண்டாம்.வெவ்வேறு தொகுதிகளின் எதிர்வினைகளை மாற்ற வேண்டாம், ஏனெனில் அது உணர்திறனைக் குறைக்கும்.

12.6 சேமிப்பக நிலை:

ELISA கருவிகளை 2-8℃ இல் வைத்திருங்கள், உறைய வைக்க வேண்டாம்.சீல் ரெஸ்ட் மைக்ரோவெல் தகடுகள் அனைத்து அடைகாக்கும் போது நேராக சூரிய ஒளியை தவிர்க்கவும்.மைக்ரோடிட்டர் தட்டுகளை மூடுவது பரிந்துரைக்கப்படுகிறது.

12.7 எதிர்வினைகள் மோசமாகப் போவதற்கான அறிகுறிகள்:

அடி மூலக்கூறு தீர்வு நிறமாக மாறினால் கைவிடப்பட வேண்டும்.

பூஜ்ஜிய தரநிலையின் உறிஞ்சுதல் மதிப்பு (450/630nm) 0.5 (A450nm＜0.5) க்கும் குறைவாக இருந்தால், எதிர்வினைகள் மோசமாக இருக்கலாம்.

12.8 தீர்வு A மற்றும் தீர்வு B ஆகியவற்றைச் சேர்த்த பிறகு வண்ணமயமாக்கல் எதிர்வினைக்கு 15 நிமிடம் தேவைப்படுகிறது. மேலும் நிறத்தை தீர்மானிக்க முடியாத அளவுக்கு இலகுவானதாக இருந்தால், அடைகாக்கும் நேரத்தை 20 நிமிடங்களில் இருந்து மேலும் நீடிக்கலாம்.25 நிமிடங்களுக்கு மேல் இருக்கக்கூடாது, மாறாக, அடைகாக்கும் நேரத்தை சரியாகக் குறைக்கவும்.

12.9 உகந்த எதிர்வினை வெப்பநிலை 25℃.அதிக அல்லது குறைந்த வெப்பநிலை உணர்திறன் மற்றும் உறிஞ்சுதல் மதிப்புகளில் மாற்றங்களுக்கு வழிவகுக்கும்.

13. சேமிப்பு

சேமிப்பு நிலை: 2-8℃.

சேமிப்பு காலம்: 12 மாதங்கள்.