produkto

Competitive Enzyme Immunoassay Kit para sa Quantitative analysis ng Flumequine

Maikling Paglalarawan:

Ang Flumequine ay isang miyembro ng quinolone antibacterial, na ginagamit bilang isang napakahalagang anti infective sa clinical veterinary at aquatic na produkto para sa malawak na spectrum, mataas na kahusayan, mababang toxicity at malakas na pagtagos ng tissue.Ginagamit din ito para sa therapy sa sakit, pag-iwas at pagsulong ng paglago.Dahil maaari itong humantong sa paglaban sa droga at potensyal na carcinogenicity, ang mataas na limitasyon kung saan sa loob ng tissue ng hayop ay inireseta sa EU, Japan (ang mataas na limitasyon ay 100ppb sa EU).

Sa kasalukuyan, ang spectrofluorometer, ELISA at HPLC ay ang mga pangunahing pamamaraan upang makita ang nalalabi ng flumequine, at ang ELISA ay naging isang nakagawiang pamamaraan para sa mataas na sensitivity at madaling operasyon.


Detalye ng Produkto

Mga Tag ng Produkto

Prinsipyo ng Pagsubok

Ang kit na ito ay batay sa hindi direktang mapagkumpitensyang teknolohiyang ELISA.Ang mga balon ng microtiter ay pinahiran ng coupling antigen.FlumequineAng nalalabi sa sample ay nakikipagkumpitensya sa antigen na pinahiran sa microtiter plate para sa antibody.Pagkatapos ng pagdaragdag ng enzyme na may label na anti-antibody, ang TMB substrate ay ginagamit upang ipakita ang kulay.Ang pagsipsip ng sample ay negatibong nauugnay sa tetracycline na naninirahan dito, pagkatapos ikumpara sa Standard Curve, na pinarami ng dilution multiple, maaaring kalkulahin ang dami ng nalalabi ng Flumequine sa sample.

Mga aplikasyon

Ang kit na ito ay maaaring gamitin sa quantitative at qualitative analysis ng flumequine residue sa honey.

Mga cross-reaksyon

Flumequine ……………………………………………………… 100%

 

Mga Materyales na Kinakailangan

Mga kagamitan

┅┅Microtiter plate spectrophotometer (450nm/630nm)

┅┅Homogenizer o tiyani

┅┅Kalog

┅┅Vortex mixer

┅┅Centrifuge

┅┅Analytical na balanse (inductance: 0.01g)

┅┅Nagtapos na pipette: 15ml

┅┅Goma na pipette na bombilya

┅┅Polystyrene Centrifuge tube: 15ml, 50ml

┅┅Glass test tube:10ml

┅┅Micropipettes: 20ml-200ml, 100ml -10000ml,

250ml -multipipette

Mga reagents

┅┅n-hexane(AR)

┅┅Methylene chloride(AR)

┅┅Acetonitrile(AR)

┅┅Deionized na tubig

-----Concentrated hydrochloric acid(AR)

 

Mga Bahagi ng Kit

● Microtiter plate na may 96 na balon na pinahiran ng antigen

● Mga karaniwang solusyon(6 na bote×1ml/bote)

0ppb, 0.3ppb, 1.2ppb, 4.8ppb, 19.2ppb, 76.8ppb

● Mataas na konsentrasyon ng karaniwang kontrol:(1ml/bote)

…………………………………………………………………100ppb

● Enzyme conjugate 12ml……………………………… pulang takip

● Antibody solution 7ml ………………………..………..berdeng takip

● Solusyon A 7ml……..……………………………………..puting takip

● Solusyon B 7ml …………………………………………………… pulang takip

● Itigil ang solusyon 7ml ………………………..………dilaw na takip

● 20XConcentrated wash solution 40ml

……………………………………………...transparent na takip

●2X Extraction solution 50ml…………………………… asul na takip

 

Paghahanda ng mga Reagents

7.1 Sampol ng pulot

Solusyon 1 : 0.2 M Hydrochloric acid solution

Timbang 41.5ml Concentrated hydrochloric acid , dilute na may deionized na tubig hanggang 500 ml.

Solusyon 2: Hugasan ang solusyon

Dilute ang concentrated wash solution na may deionized na tubig sa volume ratio na 1:19, na gagamitin para sa paghuhugas ng mga plato.ang diluted na solusyon ay maaaring itago sa 4 ℃ sa loob ng 1 buwan.

Solusyon3: solusyon sa pagkuha

Dilute ang 2×concentrated extraction solution na may deionized na tubig sa dami ng rasyon na 1:1 (o depende sa kinakailangan), na gagamitin para sa sample extraction.Ang diluted na solusyon na ito ay maaaring mapanatili sa loob ng 1 buwan sa 4 ℃.

Mga Halimbawang Paghahanda

8.1 Paunawa at pag-iingat para sa mga gumagamit bago ang operasyon

(a) Mangyaring gumamit ng mga one-off na tip sa proseso ng eksperimento, at baguhin ang mga tip kapag sumipsip ng ibang reagent.

(b) Siguraduhing malinis ang lahat ng pang-eksperimentong instrumento, kung hindi, makakaapekto ito sa resulta ng assay.

8.2Sampol ng pulot

-----Timbangin ang 2g±0.05g honey sample sa isang 50ml polystyrene centrifuge tube,

-----Magdagdag ng 2ml 0.2 M Hydrochloric acid solution (Solusyon 1), puyo ng tubig upang ganap itong ihalo, pagkatapos ay magdagdag ng 8ml methylene chloride, kalugin gamit ang shaker para sa 5min upang ganap na matunaw;

-----Centrifuge para sa 10 min, hindi bababa sa 3000g sa temperatura ng silid (20-25 ℃);

-----Alisin ang supernatant phase, dalhin ang 2 ml ng substrate na organic solution sa isang 10 ml glass tube. patuyuin ang substate sa ilalim ng water bath ng daloy ng Nitrogen ( 50-60 ℃)

-----Magdagdag ng 1 ml n-hexane,vortex para sa 30s, pagkatapos ay magdagdag ng 1ml extraction solution(solusyon 3), vortex muli sa loob ng 1min.Centrifuge para sa 5min, hindi bababa sa 3000g sa temperatura ng silid (20-25 ℃);

-----Alisin ang supernatant phase, kumuha ng 50ml para sa assay;

9. Proseso ng pagsusuri

9.1 Pansinin bago ang pagsusuri

9.1.1 Siguraduhin na ang lahat ng reagents at microwell ay nasa temperatura ng kwarto (20-25 ℃).

9.1.2 Ibalik ang lahat ng natitirang reagents sa 2-8 ℃ kaagad pagkatapos gamitin.

9.1.3 Ang wastong paghuhugas ng mga microwell ay isang mahalagang hakbang sa proseso ng pagsusuri;ito ang mahalagang salik sa pag-uulit ng pagsusuri sa ELISA.

9.1.4 Iwasan ang liwanag at takpan ang mga microwell sa panahon ng pagpapapisa ng itlog.

9.2 Mga Hakbang sa Pagsusuri

9.2.1 Ilabas ang lahat ng reagents sa temperatura ng silid (20-25 ℃) nang higit sa 30min, i-homogenize bago gamitin.

9.2.2 Ilabas ang mga microwell na kailangan at ibalik kaagad ang natitira sa zip-lock bag sa 2-8 ℃.

9.2.3 Ang diluted na wash solution ay dapat na painitin muli upang nasa temperatura ng silid bago gamitin.

9.2.4Numero:Lagyan ng numero ang bawat posisyon ng microwell at lahat ng mga pamantayan at sample ay dapat tumakbo nang doble.Itala ang mga pamantayan at mga sample na posisyon.

9.2.5Magdagdag ng karaniwang solusyon/sample:Magdagdag ng 50 µl ng karaniwang solusyon o inihandang sample sa kaukulang mga balon.Magdagdag ng 50µl antibody solution.Malumanay na paghaluin sa pamamagitan ng mano-manong pag-alog ng plato at i-incubate ng 30min sa 25 ℃ na may takip.

9.2.6Hugasan:Dahan-dahang tanggalin ang takip at dalisayin ang likido mula sa mga balon at banlawan ang mga microwell gamit ang 250µl diluted wash solution (solusyon 2) sa pagitan ng 10s para sa 4-5 beses.Sipsipin ang natitirang tubig gamit ang sumisipsip na papel (ang natitirang bula ng hangin ay maaaring alisin gamit ang hindi nagamit na tip).

9.2.8.Enzyme conjugate:Magdagdag ng enzyme conjugate solution na 100ml sa bawat balon, Haluin nang malumanay sa pamamagitan ng mano-manong pag-alog ng plato at i-incubate ng 30min sa 25℃ na may takip.Ulitin muli ang hakbang sa paghuhugas.

9.2.8Kulay:Magdagdag ng 50µl solution A at 50µl solution B sa bawat balon.Malumanay na paghaluin sa pamamagitan ng mano-manong pag-alog ng plato at i-incubate ng 15 min sa 25 ℃ na may takip (tingnan ang 12.8).

9.2.9Sukatin:Magdagdag ng 50µl na stop solution sa bawat balon.Malumanay na paghaluin sa pamamagitan ng mano-manong pag-alog ng plato at sukatin ang absorbance sa 450nm laban sa isang blangko ng hangin (Ito ay iminungkahing sukatan na may dual-wavelength na 450/630nm. Basahin ang resulta sa loob ng 5min pagkatapos magdagdag ng stop solution. ) (Maaari rin nating sukatin sa pamamagitan ng paningin walang tigil na solusyon sa maikling instrumento ng ELIASA)

Mga resulta

10.1 Porsiyento ng pagsipsip

Ang ibig sabihin ng mga halaga ng absorbance na nakuha para sa mga pamantayan at ang mga sample ay hinati sa halaga ng absorbance ng unang pamantayan (zero standard) at pinarami ng 100%.Ang zero standard ay ginawang katumbas ng 100% at ang mga halaga ng absorbance ay sinipi sa mga porsyento.

Pagsipsip (%) = B/B0 ×100%

B ——pamantayang pagsipsip (o sample)

B0 ——absorbance zero standard

10.2 Standard Curve

Upang gumuhit ng karaniwang kurba: Kunin ang absorbance value ng mga pamantayan bilang y-axis, semi logarithmic ng konsentrasyon ng flumequine standards solution (ppb) bilang x-axis.

--- AngflumequineAng konsentrasyon ng bawat sample (ppb), na mababasa mula sa calibration curve, ay pinarami ng katumbas na dilution multiple ng bawat sample na sinundan, at ang aktwal na konsentrasyon ng sample ay nakuha.

Para sa pagbabawas ng data ng mga ELISA kit, ang espesyal na software ay binuo, na maaaring ibigay kapag hiniling.

11. Sensitivity, katumpakan at katumpakan

Test Sensitivity0.3ppb

Honey Sample ng dilution factor: 2

Limitasyon sa pagtuklas

Sampol ng pulot------------------------------------------------ -1ppb

Katumpakan

Sampol ng pulot ------------------------------------------- 90±20 %

Katumpakan

Ang koepisyent ng pagkakaiba-iba ng ELISA kit ay mas mababa sa 10%.

12. Pansinin

12.1 Ang ibig sabihin ng mga halaga ng mga halaga ng absorbance na nakuha para sa mga pamantayan at ang mga sample ay mababawasan kung ang mga reagents at sample ay hindi na-regulate sa temperatura ng silid (20-25 ℃).

12.2 Huwag hayaang matuyo ang mga microwell sa pagitan ng mga hakbang upang maiwasan ang hindi matagumpay na pag-uulit at patakbuhin ang susunod na hakbang kaagad pagkatapos tapikin ang lalagyan ng microwells.

12.3.I-homogenize ang bawat reagent bago gamitin.

12.4.Ilayo ang iyong balat sa stop solution dahil ito ang 2M H2SO4solusyon.

12.5 Huwag gamitin ang mga kit na luma na.Huwag palitan ang mga reagents ng iba't ibang mga batch, dahil mababawasan nito ang sensitivity.

12.6 Kondisyon ng imbakan:

Panatilihin ang ELISA kit sa 2-8 ℃, huwag mag-freeze.Seal rest microwell plates Iwasan ang direktang sikat ng araw sa lahat ng incubation.Inirerekomenda na takpan ang mga plato ng microtiter.

12.7 Mga indikasyon para sa mga reagents na nagiging masama:

Ang solusyon sa substrate ay dapat na iwanan kung ito ay nagiging kulay.

Ang mga reagents ay maaaring maging masama kung ang absorbance value (450/630nm) ng zero standard ay mas mababa sa 0.5 (A450nm<0.5).

12.8 Ang reaksyon ng kulay ay nangangailangan ng 15min pagkatapos idagdag ang Solusyon A at Solusyon B. At maaari mong pahabain ang mga saklaw ng oras ng pagpapapisa ng itlog mula 20min hanggang higit pa kung ang kulay ay masyadong magaan upang matukoy.Huwag lumampas sa 25min, Sa kabaligtaran, paikliin ang oras ng pagpapapisa ng itlog nang maayos.

12.9 Ang pinakamainam na temperatura ng reaksyon ay 25 ℃.Ang mas mataas o mas mababang temperatura ay hahantong sa mga pagbabago ng sensitivity at absorbance value.

13. Imbakan

Kondisyon ng imbakan: 2-8 ℃.

Panahon ng imbakan: 12 buwan.


  • Nakaraan:
  • Susunod:

  • Isulat ang iyong mensahe dito at ipadala ito sa amin