produkt

Test princip

Dette sæt er baseret på indirekte konkurrencedygtig ELISA-teknologi.Mikrotiterbrøndene er belagt med koblingsantigen.Flumequinerest i prøven konkurrerer med antigenet coatet på mikrotiterpladen om antistoffet.Efter tilsætning af enzymmærket anti-antistof bruges TMB-substrat til at vise farven.Absorbansen af ​​prøven er negativt relateret til tetracyclin i den, efter sammenligning med standardkurven, ganget med fortyndingsmultiplen, kan Flumequin-restmængden i prøven beregnes.

Ansøgninger

Dette sæt kan bruges til kvantitativ og kvalitativ analyse af flumequinerester i honning.

Krydsreaktioner

Flumequine …………………..……………………………… 100 %

Nødvendige materialer

Udstyr

┅┅Mikrotiterpladespektrofotometer (450nm/630nm)

┅┅ Homogenisator eller mavemiddel

┅┅Shaker

┅┅Vortex mixer

┅┅Centrifuge

┅┅Analytisk balance (induktans: 0,01g)

┅┅ Gradueret pipette: 15 ml

┅┅Gummipipettepære

┅┅Polystyren Centrifugerør: 15ml, 50ml

┅┅Glas reagensglas：10ml

┅┅Mikropipetter: 20ml-200ml, 100ml -10000ml,

250ml -multipipette

Reagenser

┅┅n-hexan(AR)

┅┅Methylenchlorid (AR)

┅┅Acetonitril (AR)

┅┅Deioniseret vand

-----Koncentreret saltsyre (AR)

Sættets komponenter

● Mikrotiterplade med 96 brønde belagt med antigen

● Standardopløsninger (6 flasker×1 ml/flaske)

0ppb, 0,3ppb, 1,2ppb, 4,8ppb, 19,2ppb, 76,8ppb

● Standardkontrol med høj koncentration: (1 ml/flaske)

…………………………………………………………………100 ppb

● Enzymkonjugat 12ml………………………... rød låg

● Antistofopløsning 7ml …………..……..….…..grøn hætte

● Opløsning A 7ml……..………………………………………..hvid låg

● Opløsning B 7ml ………………….…………..………… rød låg

● Stop opløsning 7ml …………………………..………gul hætte

● 20X Koncentreret vaskeopløsning 40ml

………………………………………..…..gennemsigtig hætte

●2X Ekstraktionsopløsning 50ml………………………… blå hætte

Forberedelse af reagenser

7.1 Honningprøve

Opløsning 1: 0,2 M saltsyreopløsning

Vægt 41,5 ml Koncentreret saltsyre, fortyndes med deioniseret vand til 500 ml.

Løsning 2: Vaskeopløsning

Fortynd den koncentrerede vaskeopløsning med deioniseret vand i volumenforholdet 1:19, som skal bruges til at vaske pladerne.den fortyndede opløsning kan opbevares ved 4 ℃ i 1 måned.

Løsning3: ekstraktionsopløsning

Fortynd den 2×koncentrerede ekstraktionsopløsning med deioniseret vand i volumenforholdet 1:1 (eller afhængig af behov), som vil blive brugt til prøveekstraktion.Denne fortyndede opløsning kan opbevares i 1 måned ved 4 ℃.

Prøveforberedelser

8.1 Meddelelse og forholdsregler til brugerne før brug

(a) Brug venligst engangsspidser i forsøgsprocessen, og skift spidserne, når de absorberer forskellige reagenser.

(b) Sørg for, at alle eksperimentelle instrumenter er rene, ellers vil det påvirke analyseresultatet.

8.2Honningprøve

-----Væg 2g±0,05g honningprøve i et 50ml polystyren centrifugerør,

-----Tilsæt 2 ml 0,2 M saltsyreopløsning (løsning 1), vortex for at blande det fuldstændigt, tilsæt derefter 8 ml methylenchlorid, ryst med ryster i 5 minutter for at opløses fuldstændigt;

-----Centrifuger i 10 minutter, mindst 3000 g ved stuetemperatur (20-25 ℃);

-----Fjern supernatantfasen, tag 2 ml af den organiske substratopløsning til et 10 ml glasrør. tør substaten under vandbad af nitrogenstrøm (50-60 ℃)

-----Tilsæt 1 ml n-hexan, vortex i 30 sekunder, tilsæt derefter 1 ml ekstraktionsopløsning (opløsning 3), vortex igen i 1 min.Centrifuger i 5 minutter, mindst 3000 g ved stuetemperatur (20-25 ℃);

-----Fjern supernatantfasen, tag 50 ml til analyse;

9. Assayproces

9.1 Meddelelse før assay

9.1.1 Sørg for, at alle reagenser og mikrobrønde er ved stuetemperatur (20-25 ℃).

9.1.2 Sæt alle de resterende reagenser tilbage til 2-8 ℃ umiddelbart efter brug.

9.1.3 Korrekt vask af mikrobrøndene er et vigtigt trin i analysen;det er den afgørende faktor for gentagelsen af ​​ELISA-analysen.

9.1.4 Undgå lyset og dæk mikrobrøndene under inkubation.

9.2 Analysetrin

9.2.1 Tag alle reagenser ud ved stuetemperatur (20-25 ℃) i mere end 30 minutter, homogeniser før brug.

9.2.2 Få de nødvendige mikrobrønde ud og læg resten tilbage i zip-lock-posen ved 2-8 ℃ med det samme.

9.2.3 Den fortyndede vaskeopløsning skal genopvarmes til stuetemperatur før brug.

9.2.4Nummer:Nummer hver mikrobrøndposition, og alle standarder og prøver skal køres i to eksemplarer.Registrer standarderne og prøvepositionerne.

9.2.5Tilføj standardopløsning/prøve:Tilsæt 50 µl standardopløsning eller forberedt prøve til tilsvarende brønde.Tilsæt 50 µl antistofopløsning.Bland forsigtigt ved at ryste pladen manuelt og inkuber i 30 minutter ved 25 ℃ med låg.

9.2.6Vask:Fjern forsigtigt låget og rens væsken ud af brøndene og skyl mikrobrøndene med 250 µl fortyndet vaskeopløsning (opløsning 2) med et interval på 10 s i 4-5 gange.Absorber det resterende vand med absorberende papir (restluftboblen kan fjernes med ubrugt spids).

9.2.8.Enzymkonjugat:Tilføj enzymkonjugatopløsning 100 ml til hver brønd, bland forsigtigt ved at ryste pladen manuelt og inkuber i 30 minutter ved 25 ℃ med låg.Gentag vasketrinnet igen.

9.2.8Farve:Tilsæt 50 µl opløsning A og 50 µl opløsning B til hver brønd.Bland forsigtigt ved at ryste pladen manuelt og inkuber i 15 minutter ved 25 ℃ med låg (se 12.8).

9.2.9Måle:Tilsæt 50 µl stopopløsningen til hver brønd.Bland forsigtigt ved at ryste pladen manuelt og mål absorbansen ved 450 nm mod et luftemne (det foreslås at måle med dobbeltbølgelængden på 450/630 nm. Læs resultatet inden for 5 minutter efter tilsætning af stopopløsning. ) (Vi kan også måle ved synet. uden stopløsning i stedet for ELIASA-instrumentet)

Resultater

10.1 Procent absorbans

Middelværdierne af absorbansværdierne opnået for standarderne og prøverne divideres med absorbansværdien af ​​den første standard (nulstandard) og ganges med 100%.Nulstandarden er således gjort lig med 100%, og absorbansværdierne er angivet i procenter.

Absorbans (%) = B/B0 ×100 %

B - Absorbansstandard (eller prøve)

B0 ——absorbans nul standard

10.2 Standardkurve

Sådan tegnes en standardkurve: Tag absorbansværdien af ​​standarder som y-akse, semi-logaritmisk af koncentrationen af ​​flumequine standardopløsningen (ppb) som x-akse.

--- Detflumequinekoncentrationen af ​​hver prøve (ppb), som kan aflæses fra kalibreringskurven, multipliceres med den tilsvarende fortyndingsmultipel af hver prøve, som følges, og den faktiske koncentration af prøven opnås.

Til datareduktion af ELISA-kittene er der udviklet speciel software, som kan leveres på forespørgsel.

11. Følsomhed, nøjagtighed og præcision

Test følsomhed:0,3 ppb

Honningprøvefortyndingsfaktor: 2

Detektionsgrænse

Honningprøve------------------------------------------------- -1 ppb

Nøjagtighed

Honningprøve ---------------------------------------------------- 90±20 %

Præcision

Variationskoefficienten for ELISA-kittet er mindre end 10 %.

12. Meddelelse

12.1 Middelværdierne af absorbansværdierne opnået for standarderne og prøverne vil blive reduceret, hvis reagenserne og prøverne ikke er blevet reguleret til stuetemperatur (20-25℃).

12.2 Lad ikke mikrobrønde tørre mellem trinene for at undgå mislykkede gentagelser, og udfør næste trin umiddelbart efter at have banket på mikrobrøndholderen.

12.3.Homogeniser hvert reagens før brug.

12.4.Hold din hud væk fra stopopløsningen, for det er 2M H₂SO₄løsning.

12.5 Brug ikke sættene forældede.Udskift ikke reagenserne fra forskellige batches, for det vil falde følsomheden.

12.6 Opbevaringstilstand:

Opbevar ELISA-sættene ved 2-8 ℃, frys ikke.Forsegl hvile mikrobrønds plader Undgå direkte sollys under alle inkubationer.Det anbefales at dække mikrotiterpladerne.

12.7 Indikationer for, at reagenserne bliver dårlige:

Substratopløsningen bør opgives, hvis den får farve.

Reagenserne kan blive dårlige, hvis absorbansværdien (450/630nm) af nulstandarden er mindre end 0,5 (A450nm＜0,5).

12.8 Farvningsreaktionen behøver 15 minutter efter tilsætning af opløsning A og opløsning B. Og du kan forlænge inkubationstiden fra 20 minutter til mere, hvis farven er for lys til at kunne bestemmes.Overskrid aldrig 25min. Tværtimod, forkort inkubationstiden ordentligt.

12.9 Den optimale reaktionstemperatur er 25℃.Højere eller lavere temperatur vil føre til ændringer af følsomheds- og absorbansværdier.

13. Opbevaring

Opbevaringstilstand: 2-8 ℃.

Opbevaringstid: 12 måneder.