termék

Teszt elve

Ez a készlet indirekt-kompetitív ELISA technológián alapul.A mikrotiter lyukakat kapcsoló antigénnel vonjuk be.Flumequinea mintában lévő maradék verseng a mikrotiterlemezre bevont antigénnel az antitestért.Az enzimmel jelölt anti-antitest hozzáadása után TMB szubsztrátot használunk a szín kimutatására.A minta abszorbanciája negatívan viszonyul a benne lévő tetraciklin maradékhoz, a standard görbével való összehasonlítás után, megszorozva a hígítási többszörössel, kiszámítható a mintában lévő Flumequine maradék mennyisége.

Alkalmazások

Ez a készlet használható a mézben lévő fluequin maradék mennyiségi és minőségi elemzésére.

Keresztreakciók

Flumequine ……………………………………………… 100%

Szükséges anyagok

Felszerelések

┅┅Mikrotiterlemezes spektrofotométer (450nm/630nm)

┅┅Homogenizátor vagy Stomacher

┅┅ Shaker

┅┅Vortex keverő

┅┅Centrifuga

┅┅Analitikai mérleg (induktivitás: 0,01g)

┅┅Más pipetta: 15ml

┅┅Gumi pipetta izzó

┅┅Polisztirol centrifugacső: 15ml, 50ml

┅┅Üveg kémcső: 10 ml

┅┅Mikropipetták: 20ml-200ml, 100ml-10000ml,

250 ml - multipipetta

Reagensek

┅┅n-hexán (AR)

┅┅Metilén-klorid (AR)

┅┅Acetonitril (AR)

┅┅Ionmentesített víz

-----Tömény sósav (AR)

Kit komponensek

● Antigénnel bevont mikrotiterlemez 96 lyukkal

● Standard oldatok (6 üveg × 1 ml/palack)

0 ppb, 0,3 ppb, 1,2 ppb, 4,8 ppb, 19,2 ppb, 76,8 ppb

● Magas koncentrációjú standard kontroll: (1 ml/palack)

……………………………………………………100 ppb

● Enzim konjugátum 12 ml…………………………... piros kupak

● Antitest oldat 7 ml …………..……..….…..zöld kupak

● A oldat 7 ml…………………………..………..fehér kupak

● B oldat 7 ml …………….…………..………… piros kupak

● Stop oldat 7 ml ……………………..………sárga kupak

● 20X Koncentrált mosóoldat 40 ml

………………………………………..…..átlátszó kupak

●2X extrakciós oldat 50ml…………………… kék kupak

Reagensek előkészítése

7.1 Mézminta

1. oldat: 0,2 M sósavoldat

Súly 41,5 ml Tömény sósav, ionmentesített vízzel 500 ml-re hígítva.

2. megoldás: Mosóoldat

Hígítsa fel a koncentrált mosóoldatot ionmentesített vízzel 1:19 térfogatarányban, amelyet a lemezek mosására használunk.a hígított oldat 4°C-on 1 hónapig tárolható.

Megoldás3: extrakciós oldat

Hígítsa fel a 2x-es tömény extrakciós oldatot ionmentesített vízzel 1:1 térfogatarányban (vagy az igénytől függően), amelyet a minta kivonására használunk.Ez a hígított oldat 4 °C-on 1 hónapig eltartható.

Minta előkészítés

8.1 Figyelmeztetés és óvintézkedések a felhasználók számára a használat előtt

(a) Kérjük, használjon egyszeri hegyeket a kísérlet során, és változtassa meg a hegyeket, ha különböző reagenseket szív fel.

(b) Győződjön meg arról, hogy minden kísérleti műszer tiszta, különben ez befolyásolja a vizsgálat eredményét.

8.2Mézminta

----- Mérjünk be 2 g±0,05 g mézmintát egy 50 ml-es polisztirol centrifugacsőbe,

-----Adjon hozzá 2 ml 0,2 M sósavoldatot (1. oldat), vortexelje, hogy teljesen elkeveredjen, majd adjon hozzá 8 ml metilén-kloridot, rázzuk rázógéppel 5 percig, hogy teljesen feloldódjon;

----- Centrifugáljon 10 percig, legalább 3000 g-vel szobahőmérsékleten (20-25 ℃);

----- Távolítsa el a felülúszó fázist, vegyen 2 ml szubsztrát szerves oldatot egy 10 ml-es üvegcsőbe. szárítsa meg a szubsztrátumot nitrogénáramú vízfürdő alatt (50-60 ℃)

-----Adjunk hozzá 1 ml n-hexánt, vortexeljük 30 másodpercig, majd adjunk hozzá 1 ml extrakciós oldatot (3. oldat), és ismét vortexeljük 1 percig.Centrifugálja 5 percig, legalább 3000 g-vel szobahőmérsékleten (20-25 ℃);

----- Távolítsa el a felülúszó fázist, vegyen 50 ml-t a vizsgálathoz;

9. A vizsgálati eljárás

9.1 Figyelmeztetés a vizsgálat előtt

9.1.1 Győződjön meg arról, hogy minden reagens és mikroüreg szobahőmérsékletű (20-25 ℃).

9.1.2 Használat után azonnal tegye vissza az összes többi reagenst 2-8 ℃-ra.

9.1.3 A mikrolyukak megfelelő mosása fontos lépés a vizsgálati folyamatban;ez létfontosságú tényező az ELISA analízis ismétlődése szempontjából.

9.1.4 Az inkubáció során kerülje a fényt, és fedje le a mikrolyukakat.

9.2 A vizsgálat lépései

9.2.1 Vegyen ki minden reagenst szobahőmérsékleten (20-25 ℃) több mint 30 percre, használat előtt homogenizálja.

9.2.2 Vegye ki a szükséges mikrolyukakat, a többit pedig azonnal tegye vissza a cipzáras zacskóba 2-8°C-on.

9.2.3 A hígított mosóoldatot használat előtt szobahőmérsékletűre kell felmelegíteni.

9.2.4Szám:Számozzon meg minden mikrolyuk pozíciót, valamint minden standardot és mintát két példányban kell futtatni.Jegyezze fel a standardokat és a minták helyzetét.

9.2.5Adjon hozzá standard oldatot/mintát:Adjon 50 µl standard oldatot vagy előkészített mintát a megfelelő üregekbe.Adjon hozzá 50 µl antitest oldatot.Óvatosan keverje össze a lemez kézi rázatásával, és inkubálja 30 percig 25 °C-on lefedve.

9.2.6Mosás:Óvatosan távolítsa el a fedelet, és tisztítsa ki a folyadékot az üregekből, majd öblítse ki a mikrolyukakat 250 µl hígított mosóoldattal (2. oldat) 10 másodpercenként 4-5 alkalommal.A maradék vizet nedvszívó papírral itassuk fel (a maradék levegőbuborék a fel nem használt heggyel eltávolítható).

9.2.8.Enzim konjugátum:Adjon 100 ml enzimkonjugátum oldatot mindegyik lyukba, óvatosan keverje össze a lemez manuális rázásával, és inkubálja 30 percig 25 °C-on lefedve.Ismételje meg a mosási lépést.

9.2.8Színezés:Adjon 50 µl A oldatot és 50 µl B oldatot mindegyik lyukba.Óvatosan keverje össze a lemez kézi rázásával, és inkubálja 15 percig 25 °C-on fedővel (lásd 12.8).

9.2.9Intézkedés:Adjon 50 µl leállító oldatot mindegyik lyukba.Óvatosan keverje össze a lemez kézi rázásával, és mérje meg az abszorbanciát 450 nm-en egy levegős vakpróbával szemben (a javasolt mérés 450/630 nm kettős hullámhosszal. Olvassa le az eredményt a stopoldat hozzáadása után 5 percen belül.) (Mérhet látásból is. stop megoldás nélkül az ELIASA műszerhez képest)

Eredmények

10.1 Százalékos abszorbancia

A standardokra és a mintákra kapott abszorbanciaértékek átlagértékeit elosztjuk az első standard (nulla standard) abszorbancia értékével, és megszorozzuk 100%-kal.A nulla standard így egyenlő 100%-kal, és az abszorbancia értékeket százalékban adjuk meg.

Abszorbancia (%) = B/B0 × 100%

B — abszorbancia standard (vagy minta)

B0 — abszorbancia nulla szabvány

10.2 Standard görbe

Standard görbe rajzolása: Vegyük a standardok abszorbancia értékét az y tengelynek, a fluequine standard oldat koncentrációjának féllogaritmikus értékét (ppb) az x tengelynek.

--- Azflumequinea kalibrációs görbéről leolvasható minden minta koncentrációját (ppb) megszorozzuk az egyes követett minták megfelelő hígítási többszörösével, és megkapjuk a minta tényleges koncentrációját.

Az ELISA készletek adatcsökkentésére speciális szoftvert fejlesztettek ki, amelyet kérésre biztosítunk.

11. Érzékenység, pontosság és precizitás

Teszt érzékenység:0,3 ppb

Méz A minta hígítási tényezője: 2

Észlelési határ

Mézminta ------------------------------------------------- -1 ppb

Pontosság

Mézminta --------------------------------------------- 90±20 %

Pontosság

Az ELISA kit variációs együtthatója kevesebb, mint 10%.

12. Figyelmeztetés

12.1 A standardokra és a mintákra kapott abszorbancia értékek átlagértékei csökkennek, ha a reagenseket és a mintákat nem szabályozták szobahőmérsékletre (20-25 ℃).

12.2 Ne hagyja, hogy a mikroüregek megszáradjanak a lépések között, hogy elkerüljék a sikertelen ismétlődést, és a következő lépést azonnal végezze el, miután megérinti a mikroüregtartót.

12.3.Használat előtt minden reagenst homogenizáljon.

12.4.Tartsa távol bőrét a stop oldattól, mert ez a 2M H₂SO₄megoldás.

12.5 Ne használja az elavult készleteket.Ne cserélje ki a különböző tételek reagenseit, mert az csökkenti az érzékenységet.

12.6 Tárolási állapot:

Tartsa az ELISA készleteket 2-8°C-on, ne fagyassza le.Zárja le a mikroüreges lemezeket. Kerülje az egyenes napsugárzást minden inkubáció alatt.A mikrotiterlemezek lefedése javasolt.

12.7 A reagensek meghibásodásának jelzései:

Az aljzatoldatot el kell hagyni, ha elszíneződik.

A reagensek megromolhatnak, ha a nulla standard abszorbancia értéke (450/630 nm) kisebb, mint 0,5 (A450 nm＜ 0,5).

12.8 A színezési reakcióhoz 15 percre van szükség az A oldat és a B oldat hozzáadása után. És meghosszabbíthatja az inkubációs időt 20 percről többre, ha a szín túl világos ahhoz, hogy meghatározható legyen.Soha ne haladja meg a 25 percet, ellenkezőleg, megfelelően rövidítse le az inkubációs időt.

12.9 Az optimális reakcióhőmérséklet 25 ℃.A magasabb vagy alacsonyabb hőmérséklet az érzékenység és az abszorbancia értékek változásához vezet.

13. Tárolás

Tárolási állapot: 2-8℃.

Tárolási idő: 12 hónap.