sản phẩm

Nguyên tắc kiểm tra

Bộ này dựa trên công nghệ ELISA cạnh tranh gián tiếp.Các giếng microtiter được phủ kháng nguyên ghép.ống khóiphần còn lại trong mẫu cạnh tranh với kháng nguyên được phủ trên tấm microtiter để giành kháng thể.Sau khi bổ sung enzyme được đánh dấu kháng thể, chất nền TMB được sử dụng để hiển thị màu.Độ hấp thụ của mẫu có tỷ lệ nghịch với tetracycline cư trú trong đó, sau khi so sánh với Đường chuẩn, nhân với hệ số pha loãng, có thể tính được lượng dư lượng Flumequine trong mẫu.

Các ứng dụng

Bộ dụng cụ này có thể được sử dụng trong phân tích định lượng và định tính dư lượng flumequine trong mật ong.

phản ứng chéo

Flumequine …………………..……………………… 100%

Vật liệu thiết yếu

thiết bị

┅┅Máy quang phổ tấm microtiter (450nm/630nm)

┅┅Homogenizer hoặc dạ dày

┅┅Máy lắc

┅┅Máy trộn xoáy

┅┅Máy ly tâm

┅┅Cân phân tích (độ tự cảm: 0,01g)

┅┅ Pipet chia độ: 15ml

┅┅Bóng pipet cao su

┅┅Ống ly tâm Polystyrene: 15ml, 50ml

┅┅Ống nghiệm thủy tinh：10ml

┅┅Micropipette: 20ml-200ml, 100ml -10000ml,

250ml -multipipette

Thuốc thử

┅┅n-hexan(AR)

┅┅Metylen clorua(AR)

┅┅Acetonitril(AR)

┅┅Nước khử ion

----- Axit clohydric đậm đặc (AR)

Thành phần bộ

● Đĩa microtiter 96 giếng được phủ kháng nguyên

● Dung dịch chuẩn (6chai×1ml/chai)

0ppb, 0,3ppb, 1,2ppb, 4,8ppb, 19,2ppb, 76,8ppb

● Kiểm soát tiêu chuẩn nồng độ cao:(1ml/chai)

………………………………………………………….100ppb

● Enzyme liên hợp 12ml………………………... nắp đỏ

● Dung dịch kháng thể 7ml …………..……..….…..nắp xanh

● Dung dịch A 7ml……..…………………..………..nắp trắng

● Dung dịch B 7ml…………….…………..………… nắp đỏ

● Stop solution 7ml……………………..………nắp vàng

● Dung dịch rửa đậm đặc 20X 40ml

………………………………………..…..nắp trong suốt

●Dung dịch chiết 2X 50ml……………...… nắp xanh

Chuẩn bị thuốc thử

7.1 Mẫu mật ong

Dung dịch 1 : Dung dịch axit clohydric 0,2 M

Trọng lượng 41,5ml Axit clohydric đậm đặc, pha loãng với nước khử ion thành 500 ml.

Giải pháp 2: Dung dịch rửa

Pha loãng dung dịch rửa đậm đặc với nước khử ion theo tỷ lệ thể tích 1:19, sẽ được sử dụng để rửa các tấm.dung dịch đã pha loãng có thể bảo quản ở 4℃ trong 1 tháng.

Dung dịch3: dung dịch chiết

Pha loãng dung dịch chiết cô đặc 2× với nước khử ion theo tỷ lệ thể tích 1:1 (hoặc tùy theo yêu cầu), dung dịch này sẽ được sử dụng để chiết mẫu.Dung dịch pha loãng này có thể được bảo quản trong 1 tháng ở 4℃.

Chuẩn bị mẫu

8.1 Lưu ý và lưu ý cho người sử dụng trước khi vận hành

(a) Vui lòng sử dụng các mẹo một lần trong quá trình thí nghiệm và thay đổi các mẹo khi hấp thụ các thuốc thử khác nhau.

(b) Đảm bảo rằng tất cả các dụng cụ thí nghiệm đều sạch sẽ, nếu không sẽ ảnh hưởng đến kết quả xét nghiệm.

8.2mẫu mật ong

----- Cân 2g ± 0,05g mẫu mật ong cho vào ống ly tâm polystyrene 50ml,

----- Thêm 2ml dung dịch axit clohydric 0,2 M (Dung dịch 1), lắc đều để trộn đều, sau đó thêm 8ml metylen clorua, lắc bằng máy lắc trong 5 phút để hòa tan hoàn toàn;

----- Ly tâm trong 10 phút, ít nhất 3000g ở nhiệt độ phòng (20-25℃);

----- Loại bỏ pha nổi phía trên, lấy 2 ml dung dịch hữu cơ cơ chất cho vào ống thủy tinh 10 ml. Làm khô chất nền dưới bể nước có dòng Nitơ (50-60 ℃)

-----Thêm 1 ml n-hexane, xoáy trong 30 giây, sau đó thêm 1ml dung dịch chiết (dung dịch 3), xoáy lại trong 1 phút.Ly tâm trong 5 phút, ít nhất 3000g ở nhiệt độ phòng (20-25℃);

----- Loại bỏ phần nổi phía trên, lấy 50ml để xét nghiệm;

9. Quy trình xét nghiệm

9.1 Lưu ý trước khi xét nghiệm

9.1.1 Đảm bảo tất cả thuốc thử và giếng vi thể đều ở nhiệt độ phòng (20-25℃).

9.1.2 Đưa tất cả thuốc thử còn lại về 2-8℃ ngay sau khi sử dụng.

9.1.3 Rửa vi giếng đúng cách là một bước quan trọng trong quy trình xét nghiệm;nó là yếu tố quan trọng đối với tính lặp lại của phân tích ELISA.

9.1.4 Tránh ánh sáng và đậy nắp vi giếng trong quá trình ủ.

9.2 Các bước xét nghiệm

9.2.1 Lấy tất cả thuốc thử ra ngoài ở nhiệt độ phòng (20-25℃) trong hơn 30 phút, đồng nhất hóa trước khi sử dụng.

9.2.2 Lấy các giếng vi sóng cần thiết ra ngoài và cho phần còn lại vào túi khóa zip ở 2-8℃ ngay lập tức.

9.2.3 Dung dịch rửa đã pha loãng phải được hâm nóng lại ở nhiệt độ phòng trước khi sử dụng.

9.2.4Con số:Đánh số mọi vị trí vi giếng và tất cả các chất chuẩn và mẫu phải được chạy trùng lặp.Ghi lại các tiêu chuẩn và vị trí mẫu.

9.2.5Thêm dung dịch/mẫu chuẩn:Thêm 50 µl dung dịch chuẩn hoặc mẫu đã chuẩn bị vào các giếng tương ứng.Thêm 50µl dung dịch kháng thể.Trộn nhẹ bằng cách lắc đĩa bằng tay và ủ trong 30 phút ở 25℃ có đậy nắp.

9.2.6Rửa:Nhẹ nhàng tháo nắp và làm sạch chất lỏng ra khỏi giếng và rửa sạch microwell bằng 250µl dung dịch rửa pha loãng (dung dịch 2) với khoảng thời gian 10 giây trong 4-5 lần.Thấm nước còn lại bằng giấy thấm (có thể loại bỏ bọt khí còn lại bằng đầu chưa sử dụng).

9.2.8.Liên hợp enzym:Thêm 100ml dung dịch enzyme cộng hợp vào mỗi giếng, trộn nhẹ bằng cách lắc đĩa bằng tay và ủ trong 30 phút ở 25℃ có đậy nắp.Lặp lại bước rửa một lần nữa.

9.2.8Màu sắc:Thêm 50µl dung dịch A và 50µl dung dịch B vào mỗi giếng.Trộn nhẹ bằng cách lắc đĩa bằng tay và ủ trong 15 phút ở 25℃ có đậy nắp (xem 12.8).

9.2.9Đo lường:Thêm 50µl dung dịch dừng vào mỗi giếng.Trộn nhẹ bằng cách lắc tấm thủ công và đo độ hấp thụ ở bước sóng 450nm so với mẫu trắng không khí (Bạn nên đo với bước sóng kép 450/630nm. Đọc kết quả trong vòng 5 phút sau khi thêm dung dịch dừng.) (Chúng tôi cũng có thể đo bằng mắt giải pháp không dừng trong trường hợp thiếu thiết bị ELIASA)

Kết quả

10.1 Phần trăm độ hấp thụ

Giá trị trung bình của các giá trị độ hấp thụ thu được đối với các tiêu chuẩn và các mẫu được chia cho giá trị độ hấp thụ của tiêu chuẩn đầu tiên (chuẩn không) và nhân với 100%.Do đó, tiêu chuẩn không được thực hiện bằng 100% và các giá trị độ hấp thụ được trích dẫn theo tỷ lệ phần trăm.

Độ hấp thụ (%) = B/B0 ×100%

B ——tiêu chuẩn hấp thụ (hoặc mẫu)

B0 ——tiêu chuẩn hấp thụ bằng không

10.2 Đường cong chuẩn

Để vẽ đường chuẩn: Lấy giá trị độ hấp thụ của chất chuẩn làm trục y, bán logarit nồng độ của dung dịch chất chuẩn flumequine (ppb) làm trục x.

--- Cácsáo trúcnồng độ của từng mẫu (ppb), có thể đọc được từ đường chuẩn, được nhân với bội số pha loãng tương ứng của từng mẫu sau đó và thu được nồng độ thực tế của mẫu.

Để giảm thiểu dữ liệu của bộ dụng cụ ELISA, phần mềm đặc biệt đã được phát triển, có thể được cung cấp theo yêu cầu.

11. Độ nhạy, độ đúng và độ chính xác

kiểm tra độ nhạy：0,3ppb

Mật ong Hệ số pha loãng mẫu: 2

giới hạn phát hiện

Mẫu mật ong------------------------------------------------ -1ppb

Sự chính xác

Mẫu mật ong --------------------------------------------- 90±20 %

Độ chính xác

Hệ số biến đổi của bộ ELISA nhỏ hơn 10%.

12. Thông báo

12.1 Giá trị trung bình của các giá trị độ hấp thụ thu được đối với chất chuẩn và mẫu sẽ bị giảm nếu thuốc thử và mẫu không được điều chỉnh ở nhiệt độ phòng (20-25℃).

12.2 Không để các giếng vi thể khô giữa các bước để tránh lặp lại không thành công và vận hành bước tiếp theo ngay sau khi chạm vào giá đỡ vi giếng.

12.3.Đồng nhất hóa từng thuốc thử trước khi sử dụng.

12.4.Giữ cho làn da của bạn tránh xa dung dịch ngăn chặn vì nó là 2M H₂SO₄giải pháp.

12.5 Không sử dụng bộ dụng cụ đã lỗi thời.Không trao đổi thuốc thử của các lô khác nhau, vì nó sẽ làm giảm độ nhạy.

12.6 Điều kiện bảo quản:

Giữ bộ dụng cụ ELISA ở 2-8℃, không bị đóng băng.Đậy kín các đĩa vi giếng còn lại Tránh ánh nắng trực tiếp trong suốt quá trình ủ.Nên che phủ các tấm microtiter.

12.7 Các dấu hiệu cho thấy thuốc thử bị hỏng:

Dung dịch chất nền nên được loại bỏ nếu nó chuyển sang màu sắc.

Thuốc thử có thể bị hỏng nếu giá trị độ hấp thụ (450/630nm) của chuẩn 0 nhỏ hơn 0,5 (A450nm＜0,5).

12.8 Phản ứng tạo màu cần 15 phút sau khi thêm Dung dịch A và Dung dịch B. Và bạn có thể kéo dài thời gian ủ từ 20 phút trở lên nếu màu quá nhạt không thể xác định được.Không bao giờ vượt quá 25 phút, ngược lại, rút ​​ngắn thời gian ủ đúng cách.

12.9 Nhiệt độ phản ứng tối ưu là 25℃.Nhiệt độ cao hơn hoặc thấp hơn sẽ dẫn đến sự thay đổi giá trị độ nhạy và độ hấp thụ.

13. Lưu trữ

Điều kiện bảo quản: 2-8℃.

Thời gian lưu trữ: 12 tháng.