محصول

د رقابتي انزایم امونوسای کټ د Flumequine کمیتي تحلیل لپاره

لنډ معلومات:

Flumequine د کوینولون انټي باکتریا غړی دی، کوم چې په کلینیکي وترنري او آبي محصولاتو کې د پراخې سپیکٹرم، لوړ موثریت، ټیټ زهرجنیت او قوي نسج د ننوتلو لپاره د خورا مهم انتان ضد په توګه کارول کیږي.دا د ناروغۍ درملنې، مخنیوي او ودې ودې لپاره هم کارول کیږي.ځکه چې دا کولی شي د مخدره توکو مقاومت او احتمالي سرطان لامل شي، لوړ حد چې د څارویو نسج کې دننه په EU، جاپان کې ټاکل شوی (لوړ حد په EU کې 100ppb دی).

په اوس وخت کې، spectrofluorometer، ELISA او HPLC د فلوکوین د پاتې شونو د موندلو اصلي میتودونه دي، او ELISA د لوړ حساسیت او اسانه عملیاتو لپاره یو معمول میتود دی.


د محصول تفصیل

د محصول ټګ

د ازموینې اصول

دا کټ د غیر مستقیم سیالي ELISA ټیکنالوژۍ پراساس دی.د مایکروټیټر څاګانې د کوپلینګ انټيجن سره پوښل شوي.Flumequineپه نمونه کې پاتې شنه د انټي باډي لپاره د مایکروټیټر پلیټ کې پوښل شوي انټيجن سره سیالي کوي.وروسته له دې چې د انټي باډي لیبل شوي انزایم اضافه شي، د TMB سبسټریټ د رنګ ښودلو لپاره کارول کیږي.د نمونې جذب په منفي ډول د ټیتراسایکلین سره تړاو لري چې په دې کې میشته دي، وروسته له دې چې د معیاري منحل سره پرتله شي، د ډیلیشن څو سره ضرب شي، په نمونه کې د فلومیکین د پاتې شونو مقدار محاسبه کیدی شي.

غوښتنلیکونه

دا کټ په شاتو کې د فلومیکین پاتې شونو کمي او کیفیتي تحلیل کې کارول کیدی شي.

متقابل غبرګونونه

فلومیکین …………………………………………… 100٪

 

اړین توکي

تجهیزات

┅┅ مایکروټیټر پلیټ سپیکٹرو فوټومیټر (450nm/630nm)

┅┅ هوموجنائزر یا معدې ورکوونکی

┅┅شیکر

┅┅Vortex مکسر

┅┅Centrifuge

تحلیلي توازن

┅┅ فارغ شوی پایپټ: 15ml

┅┅ د ربړ پایپ بلب

┅┅Polystyrene Centrifuge ټیوب: 15ml، 50ml

┅┅د شیشې ټیسټ ټیوب: 10ml

┅┅Micropipettes: 20ml-200ml، 100ml -10000ml،

250 ملی لیتر - ملټي پیپټ

Reagents

┅┅n-hexane(AR)

┅┅میتیلین کلورایډ (AR)

┅┅Acetonitrile(AR)

┅┅Deionized اوبه

----- متمرکز هایډروکلوریک اسید (AR)

 

د کټ اجزا

● مایکروټیټر پلیټ د 96 څاګانو سره د انټيجن سره پوښل شوی

● معیاري حلونه (6 بوتلونه × 1ml/بوتل)

0ppb، 0.3ppb، 1.2ppb، 4.8ppb، 19.2ppb، 76.8ppb

● د لوړ غلظت معیاري کنټرول: (1ml/بوتل)

………………………………………………………100ppb

● انزایم کنجوګیټ 12 ملی لیتر………………………... سور کیپ

● د انټي باډي محلول 7ml …………………………………….. شین کیپ

● محلول A 7 ملی لیتر ……………………………………….. سپینه خولۍ

● محلول B 7ml …………………………………………… سور خولۍ

● Stop محلول 7ml ……………………..……… ژیړ کیپ

● 20XConcentrated واش محلول 40ml

……………………………………………….. شفاف خولۍ

●2X استخراج محلول 50ml……………………… نیلي کیپ

 

Reagents چمتو کول

7.1 د شاتو نمونه

حل 1 : 0.2 M د هایدروکلوریک اسید محلول

وزن 41.5 ملی لیتر متمرکز هایډروکلوریک اسید، د 500 ملی لیتر ته د ډیونیز شوي اوبو سره حل کړئ.

2 حل: د مینځلو محلول

د مینځلو متمرکز محلول د 1:19 حجم تناسب کې د ډیونیز شوي اوبو سره کم کړئ، کوم چې د پلیټونو مینځلو لپاره کارول کیږي.منحل شوي محلول د یوې میاشتې لپاره په 4 ℃ کې زیرمه کیدی شي.

د حل لاره۳: د استخراج حل

د 2 × متمرکز استخراج محلول د 1: 1 حجم راشن کې د ډیونیز شوي اوبو سره (یا په اړتیا پورې اړه لري) سره کم کړئ ، کوم چې د نمونې استخراج لپاره کارول کیږي.دا حل شوی محلول د 1 میاشتې لپاره په 4 ℃ کې ساتل کیدی شي.

د نمونې تیاری

8.1 د عملیاتو دمخه د کاروونکو لپاره خبرتیا او احتیاطي تدابیر

(a) مهرباني وکړئ د تجربې په پروسه کې یو اړخیزه لارښوونې وکاروئ، او لارښوونې بدل کړئ کله چې مختلف ریجنټ جذب کړئ.

(b) ډاډ ترلاسه کړئ چې ټول تجرباتي وسایل پاک دي، که نه نو دا به د ارزونې پایله اغیزه وکړي.

8.2د شاتو نمونه

----- 2g±0.05g د شاتو نمونه په 50ml پولی سټیرین سینټرفیوج ټیوب کې وزن کړئ،

----- 2ml 0.2 M هایدروکلوریک اسید محلول (حل 1) اضافه کړئ، ورټیکس په بشپړه توګه مخلوط کړئ، بیا 8ml میتیلین کلورایډ اضافه کړئ، د 5 دقیقو لپاره د شیکر سره وخورئ ترڅو په بشپړه توګه منحل شي؛

----- د 10 دقیقو لپاره سینټرفیوج، لږترلږه 3000 ګرامه د خونې په حرارت کې (20-25 ℃)؛

----- د سپرناټینټ مرحله لیرې کړئ، 2 ملی لیتره عضوي محلول د 10 ملی لیتر شیش ټیوب ته واچوئ. د نایتروجن جریان (50-60 ℃) د اوبو حمام لاندې فرعي سټیټ وچ کړئ.

----- 1 ml n-hexane، vortex د 30s لپاره اضافه کړئ، بیا د 1ml استخراج محلول (حل 3) اضافه کړئ، بیا د 1 دقیقو لپاره vortex.د 5 دقیقو لپاره سینټرفیوج، لږترلږه 3000 ګرامه د خونې په حرارت کې (20-25 ℃)؛

----- د سپرناټینټ مرحله لیرې کړئ، د ارزونې لپاره 50ml واخلئ؛

9. د ارزونې پروسه

9.1 د ارزونې دمخه خبرتیا

9.1.1 ډاډ ترلاسه کړئ چې ټول ریجنټ او مایکرو ویل ټول د خونې په حرارت درجه کې دي (20-25℃).

9.1.2 د کارولو وروسته سمدلاسه ټول پاتې ریجنټونه 2-8 ℃ ته بیرته ورکړئ.

9.1.3 د مایکرو ویلونو مینځل په سمه توګه د ارزونې په پروسه کې یو مهم ګام دی.دا د ELISA تحلیل د تکرار لپاره حیاتي فاکتور دی.

9.1.4 د ر lightا څخه ډډه وکړئ او د انکیوبیشن پرمهال مایکرو ویلونه پوښئ.

9.2 د ارزونې مرحلې

9.2.1 د خونې په حرارت (20-25 ℃) کې د 30 دقیقو څخه ډیر لپاره ټول ریجنټونه وباسئ، مخکې له دې چې استعمال شي یو شان کړئ.

9.2.2 د اړتیا وړ مایکرو ویلونه ترلاسه کړئ او پاتې نور سمدلاسه په 2-8 ℃ کې د زپ لاک کڅوړې ته راستانه کړئ.

9.2.3 د مینځلو محلول باید د کارولو دمخه د خونې په حرارت درجه کې بیا ګرم شي.

9.2.4شمېره:د هر مایکرویل موقعیت شمیره او ټول معیارونه او نمونې باید په نقل سره پرمخ وړل شي.د معیارونو او نمونو پوستونه ثبت کړئ.

9.2.5معیاري حل / نمونه اضافه کړئ:50 µl معیاري محلول یا چمتو شوي نمونې په اړوندو څاګانو کې اضافه کړئ.50µl انټي باډي محلول اضافه کړئ.په لاسي ډول د پلیټ په وهلو سره په نرمۍ سره مخلوط کړئ او د 30 دقیقو لپاره په 25 ℃ کې د پوښ سره سینګار کړئ.

9.2.6مینځل:پوښ په نرمۍ سره لرې کړئ او مایع له څاه څخه پاک کړئ او مایکرو ویلونه د 250µl د مینځلو محلول (حل 2) سره د 4-5 ځله لپاره د 10 ثانیو په وقفه کې ومینځئ.پاتې اوبه د جاذب کاغذ سره جذب کړئ (باقي هوا بلبل د غیر استعمال شوي ټیپ سره له مینځه وړل کیدی شي).

9.2.8.د انزایمونو ترکیب:په هر څاه کې 100 ملی لیتر انزایم کنجوګیټ محلول اضافه کړئ، په لاسي ډول د پلیټ په وهلو سره په نرمۍ سره مخلوط کړئ او د 30 دقیقو لپاره په 25 ℃ کې د پوښ سره سینګار کړئ.د مینځلو مرحله بیا تکرار کړئ.

9.2.8رنګ:هر څاه ته 50µl محلول A او 50µl محلول B اضافه کړئ.په لاسي ډول د پلیټ په وهلو سره په نرمۍ سره مخلوط کړئ او د 15 دقیقو لپاره په 25 ℃ کې د پوښ سره سینګار کړئ (12.8 وګورئ).

9.2.9اندازه کول:هر څاه ته 50µl د سټاپ محلول اضافه کړئ.په لاسي ډول د پلیټ په وهلو سره په نرمۍ سره مخلوط کړئ او د هوا د خالي په مقابل کې په 450nm کې جذب اندازه کړئ (دا وړاندیز شوی اندازه د 450/630nm دوه اړخیز طول موج سره. د سټاپ محلول اضافه کولو وروسته په 5 دقیقو کې پایله ولولئ.) (موږ د لید له لارې هم اندازه کولی شو. د ELIASA وسیلې په لنډه کې د سټاپ حل پرته)

پایلې

10.1 سلنه جذب

د معیارونو او نمونو لپاره ترلاسه شوي د جذب ارزښتونو اوسط ارزښتونه د لومړي معیار (صفر معیار) د جذب ارزښت لخوا ویشل شوي او د 100٪ لخوا ضرب کیږي.د صفر معیار په دې توګه د 100٪ سره برابر شوی او د جذب ارزښتونه په فیصدو کې حواله شوي.

جذب (٪) = B/B0 × 100٪

B ——جذب معیار (یا نمونه)

B0 —— جذب صفر معیار

10.2 معیاري وکر

د معیاري منحني د رسم کولو لپاره: د معیارونو جاذب ارزښت د y-axis په توګه واخلئ، د x-axis په توګه د فلومیکین معیاري محلول (ppb) غلظت نیم لوګاریتمیک.

--- دفلومیکیند هرې نمونې غلظت (ppb)، چې د کیلیبریشن منحني څخه لوستل کیدی شي، د تعقیب شوي هرې نمونې د اړونده کمولو څو څو سره ضرب کیږي، او د نمونې اصلي غلظت ترلاسه کیږي.

د ELISA کټونو د معلوماتو کمولو لپاره، ځانګړی سافټویر رامینځته شوی، کوم چې د غوښتنې سره سم چمتو کیدی شي.

11. حساسیت، دقت او دقیقیت

د ازموینې حساسیت:0.3ppb

د شاتو نمونه د کمولو عامل: 2

د کشف حد

د شاتو نمونه ---------------------------------- -1ppb

دقت

د شاتو نمونه -------------------------------------------------------- 90±20 %

دقیقیت

د ELISA کټ د تغیر مجموعه له 10٪ څخه کمه ده.

12. خبرتیا

12.1 د معیارونو او نمونو لپاره ترلاسه شوي د جذب ارزښتونو اوسط ارزښتونه به راټیټ شي که چیرې ریجنټونه او نمونې د خونې د تودوخې (20-25 ℃) سره تنظیم شوي نه وي.

12.2 مایکرو ویل ته اجازه مه ورکوئ چې د مرحلو په مینځ کې وچ شي ترڅو د ناکام تکرار مخه ونیسي او د مایکرو ویل هولډر له نل کولو وروسته سمدلاسه بل ګام پرمخ بوځي.

12.3.د کارولو دمخه د هر ریجنټ سره همغږي کړئ.

12.4.خپل پوټکی د سټاپ محلول څخه لرې وساتئ ځکه چې دا د 2M H دی2SO4حل

12.5 زاړه کټونه مه کاروئ.د مختلفو بستونو ریجنټ مه تبادله کوئ، ځکه چې دا به حساسیت کم کړي.

12.6 د ذخیره کولو حالت:

د ELISA کټونه په 2-8 ℃ کې وساتئ، کنګل مه کوئ.د آرام مایکرویل پلیټونه مهر کړئ د ټولو انکیوبیشن پرمهال د مستقیم لمر وړانګو څخه مخنیوی وکړئ.د مایکروټیټر پلیټونو پوښل سپارښتنه کیږي.

12.7 د ریجنټونو د خرابیدو نښې:

د سبسټریټ محلول باید پریښودل شي که چیرې دا رنګ بدل کړي.

ریجنټونه ممکن خراب شي که چیرې د صفر معیار د جذب ارزښت (450/630nm) له 0.5 (A450nm<0.5) څخه کم وي.

12.8 د محلول A او محلول B اضافه کولو وروسته د رنګ کولو عکس العمل 15 دقیقو ته اړتیا لري. او تاسو کولی شئ د انکیوبیشن وخت له 20 دقیقو څخه ډیر اوږد کړئ که چیرې رنګ ډیر روښانه وي د ټاکلو لپاره.هیڅکله د 25 دقیقو څخه ډیر مه کوئ، برعکس، د انکیوبیشن وخت په سمه توګه لنډ کړئ.

12.9 د عکس العمل غوره تودوخه 25 ℃ ده.لوړه یا ټیټه تودوخه به د حساسیت او جذب ارزښتونو بدلون لامل شي.

13. ذخیره کول

د ذخیره کولو حالت: 2-8℃

د ذخیره کولو موده: 12 میاشتې.


  • مخکینی:
  • بل:

  • خپل پیغام دلته ولیکئ او موږ ته یې واستوئ