produk

Prinsip Ujian

Kit ieu dumasar kana téknologi ELISA anu kompetitif teu langsung.Sumur microtiter dilapis ku antigen gandeng.Flumequinerésidu dina sampel bersaing jeung antigén coated on plat microtiter pikeun antibodi.Saatos tambihan énzim anu dilabélan anti-antibodi, substrat TMB dianggo pikeun nunjukkeun warna.Nyerep sampel négatip patali jeung tetracycline reside di dinya, sanggeus ngabandingkeun jeung Kurva Standar, dikali sababaraha éncér, kuantitas résidu Flumequine dina sampel bisa diitung.

Aplikasi

Kit ieu tiasa dianggo dina analisis kuantitatif sareng kualitatif résidu flumequine dina madu.

Réaksi silang

Flumequine ………………………………………………… 100%

Bahan Diperlukeun

Parabot

┅┅Microtiter plat spéktrofotométer (450nm/630nm)

┅┅Homogenizer atanapi stomacher

┅┅Shaker

┅┅Vortex mixer

┅┅Centrifuge

┅┅Kaimbangan analitik (induktansi: 0.01g)

┅┅Pipet ukur: 15 ml

┅┅Botol pipet karét

┅┅Polystyrene Centrifuge tube: 15ml, 50ml

┅┅ Tabung uji kaca: 10ml

┅┅Mikropét: 20ml-200ml, 100ml -10000ml,

250ml - multipipet

réagen

┅┅n-héksana(AR)

┅┅Metiléna klorida (AR)

┅┅Acetonitril (AR)

┅┅Deionized cai

----- Asam hidroklorat pekat (AR)

Komponén Kit

● plat Microtiter kalawan 96 sumur coated kalawan antigen

● Solusi standar (6 botol × 1ml / botol)

0ppb, 0.3ppb, 1.2ppb, 4.8ppb, 19.2ppb, 76.8ppb

● kontrol standar konsentrasi luhur: (1ml / botol)

…………………………………………………………………100ppb

● Énzim conjugate 12ml………………………………………… tutup beureum

● Solusi antibodi 7ml ………………………………………………..topi héjo

● Solusi A 7ml…………………………………………………..topi bodas

● Solusi B 7ml ……………………………………………………. tutup beureum

● Eureun solusi 7ml ………………………………………………. tutup konéng

● 20XConcentrated nyeuseuh solusi 40ml

……………………………………………..cap transparan

●2X solusi ékstraksi 50ml…………………………… cap biru

Persiapan réagen

7.1 Sampel madu

Solusi 1: 0,2 M larutan asam hidroklorat

Beurat 41,5ml Asam hidroklorat pekat, éncér sareng cai deionisasi dugi ka 500 ml.

Solusi 2: Ngumbah solusi

Éncér solusi cuci kentel jeung cai deionized dina nisbah volume 1:19, nu bakal dipaké pikeun ngumbah piring.solusi éncér bisa disimpen dina 4 ℃ salila 1 bulan.

Solusi3: solusi ékstraksi

Éncér 2 × solusi ékstraksi kentel jeung cai deionized dina jatah volume 1: 1 (atawa gumantung kana sarat), nu bakal dipaké pikeun ékstraksi sampel.Solusi éncér ieu tiasa disimpen salami 1 bulan dina suhu 4 ℃.

Persiapan Sampel

8.1 Bewara sareng pancegahan pikeun pangguna sateuacan operasi

(a) Punten pigunakeun tip sakali dina prosés ékspérimén, sareng robih tip nalika nyerep réagen anu béda.

(b) Pastikeun yén sadaya instrumén ékspérimén beresih, upami henteu bakal mangaruhan hasil tés.

8.2Sampel madu

----- Beurat 2g ± 0.05g sampel madu kana 50ml polystyrene centrifuge tube,

-----Tambahkeun 2ml 0,2 M leyuran asam hidroklorat (Solusi 1), vortex nyampur lengkep, lajeng nambahkeun 8ml métilén klorida, ngocok jeung shaker pikeun 5min ngaleyurkeun lengkep;

----- Centrifuge pikeun 10 mnt, sahenteuna 3000g dina suhu kamar (20-25 ℃);

----- Leupaskeun fase supernatant, nyandak 2 ml larutan organik substrat kana tube kaca 10 ml. garing substate handapeun cai mandi aliran Nitrogén (50-60 ℃)

-----Tambahkeun 1 ml n-heksana,vortex pikeun 30s, lajeng nambahkeun 1ml solusi ékstraksi (solusi 3), vortex deui pikeun 1min.Centrifuge pikeun 5min, sahenteuna 3000g dina suhu kamar (20-25 ℃);

----- Leupaskeun fase supernatant, nyandak 50ml pikeun assay;

9. Prosés assay

9.1 Bewara saméméh assay

9.1.1 Pastikeun sadaya réagen sareng microwells sadayana dina suhu kamar (20-25 ℃).

9.1.2 Balikkeun sakabéh réagen sésana ka 2-8 ℃ langsung saatos dipaké.

9.1.3 Ngumbah microwells leres mangrupa hambalan penting dina prosés assay;éta faktor vital pikeun repetitiveness tina analisis ELISA.

9.1.4 Hindarkeun cahaya sareng nutupan microwells salami inkubasi.

9.2 Léngkah Assay

9.2.1 Candak sadaya réagen kaluar dina suhu kamar (20-25 ℃) pikeun leuwih ti 30min, homogenize saméméh pamakéan.

9.2.2 Kéngingkeun microwells anu diperyogikeun teras balikkeun sésa-sésa kana kantong zip-lock dina suhu 2-8 ℃ langsung.

9.2.3 Solusi cuci anu éncér kedah dipanaskeun deui dina suhu kamar sateuacan dianggo.

9.2.4Jumlah:Nomeran unggal posisi microwell sareng sadaya standar sareng conto kedah dijalankeun dina duplikat.Rékam standar sareng posisi sampel.

9.2.5Tambahkeun solusi standar / sampel:Tambahkeun 50 µl larutan standar atanapi sampel anu disiapkeun ka sumur anu cocog.Tambahkeun 50µl larutan antibodi.Campur gently ku oyag piring sacara manual tur incubate pikeun 30min dina 25 ℃ kalawan panutup.

9.2.6nyeuseuh:Cabut panutupna sacara lembut sareng bersihkeun cairan tina sumur sareng bilas microwells kalayan larutan cuci éncér 250µl (solusi 2) dina interval 10 detik salami 4-5 kali.Nyerep cai sésa-sésa ku kertas nyerep (sésana gelembung hawa tiasa dileungitkeun ku tip anu henteu dianggo).

9.2.8.Conjugate énzim:Tambahkeun solusi énzim conjugate 100ml ka unggal sumur, Campur gently ku oyag piring sacara manual tur incubate pikeun 30min dina 25 ℃ kalawan panutup.Malikan deui léngkah nyeuseuh.

9.2.8Warna:Tambahkan 50µl larutan A dan 50µl larutan B pada tiap sumur.Campur gently ku oyag piring ku cara manual tur incubate pikeun 15 mnt dina 25 ℃ kalawan panutup (tingali 12.8).

9.2.9Ukur:Tambahkeun 50µl stop solution ka unggal sumur.Campur gently ku oyag piring sacara manual tur ngukur absorbance dina 450nm ngalawan hiji kosong hawa (Ieu ngusulkeun ukuran jeung dual-panjang gelombang 450 / 630nm. Baca hasilna dina 5min sanggeus nambahkeun solusi eureun. ) (Urang ogé bisa ngukur ku tetempoan. tanpa solusi eureun di pondok tina instrumen ELIASA)

Hasilna

10.1 Persentase nyerep

Nilai rata-rata nilai absorbansi diala pikeun standar jeung sampel dibagi ku nilai absorbansi tina standar kahiji (standar enol) jeung dikali 100%.Standar enol dijieun sarua jeung 100% jeung nilai absorbance dicutat dina percentages.

Nyerep (%) = B/B0 ×100%

B --standar nyerep (atawa sampel)

B0 --nyerep nol baku

10.2 Kurva baku

Ngagambar kurva baku: Candak nilai absorbansi standar salaku sumbu-y, semi logaritmik tina konsentrasi larutan standar flumequine (ppb) salaku sumbu-x.

--- Anuflumequinekonsentrasi unggal sampel (ppb), nu bisa dibaca tina kurva calibration, dikalikeun sababaraha éncér pakait unggal sampel dituturkeun, sarta konsentrasi sabenerna sampel dicandak.

Pikeun pangurangan data kit ELISA, parangkat lunak khusus parantos dikembangkeun, anu tiasa disayogikeun upami dipénta.

11. Sensitipitas, akurasi sarta precision

Sensitipitas tés:0,3 ppb

Faktor éncér sampel madu: 2

wates deteksi

Sampel madu ------------------------------------------------ -1 pb

Akurasi

Sampel madu ---------------------------------------------- 90±20 %

Precision

Koéfisién variasi kit ELISA kirang ti 10%.

12. Bewara

12.1 Nilai rata-rata tina nilai absorbansi anu dicandak pikeun standar sareng sampel bakal dikirangan upami réagen sareng conto henteu diatur kana suhu kamar (20-25 ℃).

12.2 Ulah ngantep microwells garing antara hambalan pikeun nyegah repetitiveness gagal tur ngajalankeun lengkah saterusna langsung saatos ketok wadah microwells.

12.3.Homogénisasi unggal réagen sateuacan dianggo.

12.4.Jauhkeun kulit anjeun tina solusi eureun pikeun éta nyaéta 2M H₂SO₄solusi.

12.5 Entong nganggo kit anu kadaluwarsa.Entong tukeur réagen tina bets anu béda, sabab éta bakal ngirangan sensitipitas.

12.6 Kaayaan neundeun:

Simpen kit ELISA dina 2-8 ℃, ulah beku.Segel piring microwell sésana Hindarkeun sinar panonpoé langsung salila sakabéh inkubasi.Disarankeun nutupan piring microtiter.

12.7 Indikasi pikeun réagen goréng:

Solusi substrat kedah ditinggalkeun upami janten warna.

Réagen tiasa janten goréng upami nilai absorbansi (450/630nm) tina standar enol kirang ti 0.5 (A450nm <0.5).

12.8 Réaksi pewarnaan peryogi 15min saatos nambihan Solusi A sareng Solusi B. Sareng anjeun tiasa manjangkeun waktos inkubasi ti 20min langkung seueur upami warnana terang teuing pikeun ditangtukeun.Pernah ngaleuwihan 25min, Sabalikna, shorten waktos inkubasi leres.

12.9 Suhu réaksi optimal nyaéta 25 ℃.Suhu anu langkung luhur atanapi langkung handap bakal nyababkeun parobahan sensitipitas sareng nilai nyerep.

13. Panyimpenan

Kaayaan gudang: 2-8 ℃.

Mangsa neundeun: 12 bulan.