məhsul

Test prinsipi

Bu dəst dolayı rəqabətli ELISA texnologiyasına əsaslanır.Mikrotiter quyuları birləşdirici antigenlə örtülmüşdür.Flümekinnümunədəki qalıq antikor üçün mikrotitr lövhəsi ilə örtülmüş antigenlə rəqabət aparır.Anti-antikor etiketli ferment əlavə edildikdən sonra rəngi göstərmək üçün TMB substratı istifadə olunur.Nümunənin udulması onun içindəki tetrasiklinlə mənfi əlaqədədir, Standart əyri ilə müqayisə edildikdən sonra, qatılma çoxluğuna vurulur, nümunədəki Flumequine qalıq miqdarı hesablana bilər.

Proqramlar

Bu dəst baldakı flumekin qalığının kəmiyyət və keyfiyyət analizində istifadə edilə bilər.

Çarpaz reaksiyalar

Flümekin …………………..……………………… 100%

Tələb olunan materiallar

Avadanlıqlar

┅┅Mikrotitr lövhə spektrofotometri (450nm/630nm)

┅┅Homojenizator və ya mədə

┅┅Şəkər

┅┅Vortex qarışdırıcı

┅┅Sentrifuqa

┅┅Analitik tarazlıq (induktivlik: 0,01 q)

┅┅Dəyişdirilmiş pipet: 15ml

┅┅Rezin pipet lampası

┅┅Polistirol sentrifuqa borusu: 15ml, 50ml

┅┅Şüşə sınaq borusu: 10ml

┅┅Mikropipetlər: 20ml-200ml, 100ml -10000ml,

250 ml - multipipet

Reagentlər

┅┅n-heksan(AR)

┅┅metilen xlorid(AR)

┅┅Asetonitril(AR)

┅┅Deionlaşdırılmış su

----- Konsentratlı xlor turşusu (AR)

Kit Komponentləri

● Antigenlə örtülmüş 96 quyu olan mikrotitr lövhəsi

● Standart məhlullar (6 şüşə×1ml/şüşə)

0ppb, 0,3ppb, 1,2ppb, 4,8ppb, 19,2ppb, 76,8ppb

● Yüksək konsentrasiyaya standart nəzarət:(1ml/şüşə)

……………………………………………………100ppb

● Ferment konjugatı 12ml……………………… qırmızı qapaq

● Antikor məhlulu 7ml …………..……..….…..yaşıl qapaq

● Məhlul A 7ml……..…………………..………..ağ qapaq

● Məhlul B 7ml …………….…………..………… qırmızı qapaq

● Stop məhlulu 7ml ……………………..………sarı qapaq

● 20XKonsentratlı yuma məhlulu 40ml

………………………………………..…..şəffaf papaq

●2X Ekstraksiya məhlulu 50ml…………………… mavi qapaq

Reagentlərin hazırlanması

7.1 Bal nümunəsi

Həll 1: 0,2 M hidroklor turşusu məhlulu

Çəki 41,5 ml Konsentratlı xlorid turşusu, deionlaşdırılmış su ilə 500 ml-ə qədər seyreltilir.

Həll 2: Məhlulu yuyun

Qatılaşdırılmış yuma məhlulunu plitələrin yuyulması üçün istifadə olunacaq 1:19 həcm nisbətində deionlaşdırılmış su ilə seyreltin.seyreltilmiş məhlul 4°C temperaturda 1 ay saxlanıla bilər.

Həll3: ekstraksiya məhlulu

2 x konsentratlı ekstraksiya məhlulunu 1:1 həcm nisbətində (və ya tələbdən asılı olaraq) deionlaşdırılmış su ilə seyreltin, bu da nümunənin çıxarılması üçün istifadə olunacaq.Bu seyreltilmiş məhlul 4°C temperaturda 1 ay saxlanıla bilər.

Hazırlıq nümunələri

8.1 Əməliyyatdan əvvəl istifadəçilər üçün xəbərdarlıq və ehtiyat tədbirləri

(a) Təcrübə prosesində birdəfəlik məsləhətlərdən istifadə edin və müxtəlif reagentləri uduqda ucları dəyişdirin.

(b) Bütün eksperimental alətlərin təmiz olduğundan əmin olun, əks halda bu, analizin nəticəsinə təsir edəcək.

8.2Bal nümunəsi

----- 2g±0.05q bal nümunəsini 50ml polistirol santrifüj borusuna çəkin,

----- 2 ml 0,2 M hidroklor turşusu məhlulu (məhlul 1) əlavə edin, onu tam qarışdırmaq üçün burulğan edin, sonra 8 ml metilen xlorid əlavə edin, tamamilə həll etmək üçün çalkalayıcı ilə 5 dəqiqə silkələyin;

-----Otaq temperaturunda (20-25 ℃) 10 dəqiqə, ən azı 3000 q sentrifuqa edin;

----- Üst fazanı çıxarın, 2 ml substratın üzvi məhlulunu 10 ml şüşə boruya götürün. Substatı azot axını (50-60 ℃) su banyosunda qurutun.

-----1 ml n-heksan əlavə edin, 30 saniyə burulğan edin, sonra 1 ml ekstraksiya məhlulu (məhlul 3) əlavə edin, yenidən 1 dəqiqə burulğan edin.5 dəqiqə, otaq temperaturunda (20-25 ℃) ən azı 3000 q santrifüj edin;

----- Supernatant fazasını çıxarın, analiz üçün 50 ml götürün;

9. Təhlil prosesi

9.1 Təhlildən əvvəl xəbərdarlıq

9.1.1 Bütün reagentlərin və mikro quyuların hamısının otaq temperaturunda (20-25 ℃) olduğundan əmin olun.

9.1.2 İstifadə edildikdən dərhal sonra bütün qalan reagentləri 2-8 ℃ temperatura qaytarın.

9.1.3 Mikro quyuların düzgün yuyulması analiz prosesində mühüm addımdır;bu, ELISA analizinin təkrarlanması üçün vacib amildir.

9.1.4 İnkubasiya zamanı işıqdan çəkinin və mikroquyuları örtün.

9.2 Təhlil addımları

9.2.1 Bütün reagentləri otaq temperaturunda (20-25 ℃) 30 dəqiqədən çox çıxarın, istifadə etməzdən əvvəl homojenləşdirin.

9.2.2 Lazım olan mikro quyuları çıxarın və qalanlarını dərhal 2-8 ℃ temperaturda kilidli çantaya qaytarın.

9.2.3 İstifadədən əvvəl seyreltilmiş yuma məhlulu otaq temperaturunda yenidən qızdırılmalıdır.

9.2.4Nömrə:Hər mikroquyuğun mövqeyini nömrələyin və bütün standartlar və nümunələr iki nüsxədə işlənməlidir.Standartları və nümunə mövqelərini qeyd edin.

9.2.5Standart həll/nümunə əlavə edin:Müvafiq quyulara 50 µl standart məhlul və ya hazırlanmış nümunə əlavə edin.50 µl antikor məhlulu əlavə edin.Plitəni əl ilə silkələməklə yavaş-yavaş qarışdırın və qapaq ilə 25 ℃ temperaturda 30 dəqiqə inkubasiya edin.

9.2.6Yuma:Qapağı yumşaq bir şəkildə çıxarın və mayeni quyulardan təmizləyin və mikro quyuları 250 µl seyreltilmiş yuma məhlulu (məhlul 2) ilə 10 saniyəlik fasilələrlə 4-5 dəfə yuyun.Qalıq suyu uducu kağızla udun (qalan hava qabarcığını istifadə olunmamış uc ilə çıxarmaq olar).

9.2.8.Enzim konjugatı:Hər quyuya 100 ml ferment konjugat məhlulu əlavə edin, boşqab əl ilə silkələməklə yumşaq qarışdırın və qapaqla 25°C temperaturda 30 dəqiqə inkubasiya edin.Yuma addımını yenidən təkrarlayın.

9.2.8Rəngləmə:Hər quyuya 50µl A məhlulu və 50µl B məhlulu əlavə edin.Plitəni əl ilə silkələməklə yavaş-yavaş qarışdırın və qapaq ilə 25 ℃ temperaturda 15 dəqiqə inkubasiya edin (bax 12.8).

9.2.9Ölçü:Hər quyuya 50 µl stop məhlulu əlavə edin.Lövhəni əl ilə silkələməklə yavaş-yavaş qarışdırın və udma qabiliyyətini 450nm-də hava blankına qarşı ölçün (450/630nm ikili dalğa uzunluğu ilə ölçülməsi tövsiyə olunur. Nəticəni dayandırma məhlulu əlavə edildikdən sonra 5 dəqiqə ərzində oxuyun. ) (Görmə ilə də ölçə bilərik. ELIASA alətindən qısaca dayanmadan həll)

Nəticələr

10.1 Faiz absorbsiyası

Standartlar və nümunələr üçün alınmış absorbans qiymətlərinin orta qiymətləri birinci standartın (sıfır standart) absorbsiya qiymətinə bölünür və 100%-ə vurulur.Beləliklə, sıfır standartı 100%-ə bərabər tutulur və absorbans dəyərləri faizlə ifadə edilir.

Absorbans (%) = B/B0 ×100%

B ——udma standartı (və ya nümunə)

B0 ——udma sıfır standartı

10.2 Standart əyri

Standart əyri çəkmək üçün: Standartların udma dəyərini y oxu kimi, flumekin standart məhlulunun konsentrasiyasının (ppb) yarı loqarifmikini x oxu kimi götürün.

--- Theflumekinkalibrləmə əyrisindən oxuna bilən hər bir nümunənin konsentrasiyası (ppb) izlənilən hər nümunənin müvafiq qatılma qatına vurulur və nümunənin faktiki konsentrasiyası əldə edilir.

ELISA dəstlərinin məlumatlarının azaldılması üçün xüsusi proqram təminatı hazırlanmışdır ki, bu da istək əsasında təqdim edilə bilər.

11. Həssaslıq, dəqiqlik və dəqiqlik

Test Həssaslığı:0,3 ppb

Bal Nümunəsinin seyreltmə faktoru: 2

Aşkarlama həddi

Bal nümunəsi------------------------------------------------- -1ppb

Dəqiqlik

Bal nümunəsi --------------------------------------------- 90±20 %

Dəqiqlik

ELISA dəstinin dəyişmə əmsalı 10%-dən azdır.

12. Qeyd

12.1 Reagentlər və nümunələr otaq temperaturuna (20-25 ℃) qədər tənzimlənmədikdə, standartlar və nümunələr üçün alınmış absorbans dəyərlərinin orta dəyərləri azalacaq.

12.2 Uğursuz təkrarlanmanın qarşısını almaq üçün mikro quyuların addımlar arasında qurumasına icazə verməyin və mikroquyuların saxlayıcısına toxunduqdan dərhal sonra növbəti addımı işə salın.

12.3.İstifadə etməzdən əvvəl hər bir reagenti homojenləşdirin.

12.4.Dərinizi dayandırıcı məhluldan uzaq tutun, çünki o, 2M H₂SO₄həll.

12.5 Vaxtı keçmiş dəstlərdən istifadə etməyin.Müxtəlif partiyaların reagentlərini dəyişdirməyin, çünki bu, həssaslığı aşağı salacaq.

12.6 Saxlama şəraiti:

ELISA dəstlərini 2-8 ℃ temperaturda saxlayın, dondurmayın.Mikro quyu boşqablarını möhürləyin Bütün inkubasiyalar zamanı düz günəş işığından çəkinin.Mikrotitr plitələrinin örtülməsi tövsiyə olunur.

12.7 Reagentlərin pis getməsinə dair göstərişlər:

Substrat məhlulu rənglərə çevrilirsə, ondan imtina edilməlidir.

Sıfır standartın udma dəyəri (450/630nm) 0,5-dən (A450nm＜0,5) az olarsa, reagentlər pisləşə bilər.

12.8 Rənglənmə reaksiyasına A məhlulu və B məhlulu əlavə edildikdən sonra 15 dəqiqə lazımdır. Rəng müəyyən etmək üçün çox açıqdırsa, inkubasiya müddətini 20 dəqiqədən daha çox uzada bilərsiniz.Heç vaxt 25 dəqiqədən çox olmayın, əksinə, inkubasiya müddətini düzgün şəkildə qısaltın.

12.9 Optimal reaksiya temperaturu 25℃-dir.Yüksək və ya aşağı temperatur həssaslıq və absorbans dəyərlərinin dəyişməsinə səbəb olacaq.

13. Saxlama

Saxlama şəraiti: 2-8 ℃.

Saxlama müddəti: 12 ay.