արտադրանք

Փորձարկման սկզբունք

Այս փաթեթը հիմնված է անուղղակի մրցակցային ELISA տեխնոլոգիայի վրա:Միկրոտիտրային հորերը պատված են միացնող անտիգենով:ՖլյումեքինՆմուշի մնացորդը հակամարմինների համար մրցում է միկրոտիտրային ափսեի վրա պատված հակագենի հետ:Ֆերմենտով պիտակավորված հակամարմինների ավելացումից հետո TMB սուբստրատն օգտագործվում է գույնը ցույց տալու համար:Նմուշի կլանումը բացասաբար է կապված դրանում առկա տետրացիկլինի հետ, Ստանդարտ կորի հետ համեմատելուց հետո, բազմապատկված նոսրացման բազմապատիկով, կարող է հաշվարկվել ֆլյումեքինի մնացորդի քանակը նմուշում:

Դիմումներ

Այս հավաքածուն կարող է օգտագործվել մեղրի մեջ ֆլյումեքինի մնացորդի քանակական և որակական վերլուծության համար:

Խաչաձև ռեակցիաներ

Ֆլյումեքին ……………………………………………… 100%

Պահանջվող նյութեր

Սարքավորումներ

┅┅Միկրոտիտրային թիթեղային սպեկտրոֆոտոմետր (450նմ/630նմ)

┅┅Հոմոգենիզատոր կամ ստամոքսահյութ

┅┅Շեյքեր

┅┅Վորտեքս խառնիչ

┅┅Ցենտրիֆուգ

┅┅Անալիտիկ հաշվեկշիռ (ինդուկտիվություն՝ 0,01գ)

┅┅Գրաֆիկացված պիպետ՝ 15մլ

┅┅Ռետինե խողովակի լամպ

┅┅Պոլիստիրոլային ցենտրիֆուգային խողովակ՝ 15մլ, 50մլ

┅┅ Ապակե փորձանոթ: 10 մլ

┅┅Միկրոպիպետներ՝ 20մլ-200մլ, 100մլ-10000մլ,

250 մլ - մուլտիպիպետ

Ռեակտիվներ

┅┅n-հեքսան (AR)

┅┅Մեթիլեն քլորիդ (AR)

┅┅Ացետոնիտրիլ (AR)

┅┅Դիոնացված ջուր

-----Խիտ աղաթթու (AR)

Հավաքածուի բաղադրիչներ

● Microtiter ափսե 96 հորեր պատված հակագենով

● Ստանդարտ լուծույթներ (6 շիշ×1մլ/շիշ)

0ppb, 0.3ppb, 1.2ppb, 4.8ppb, 19.2ppb, 76.8ppb

● Բարձր կոնցենտրացիայի ստանդարտ հսկողություն՝ (1մլ/շիշ)

…………………………………………………………..100 ppb

● Ֆերմենտային կոնյուգատ 12 մլ………………………… կարմիր գլխարկ

● Հակամարմինների լուծույթ 7 մլ ………………………..……..կանաչ գլխարկ

● Լուծում A 7 մլ………………………………………..սպիտակ գլխարկ

● Լուծում B 7 մլ ……………………………………… կարմիր գլխարկ

● Ստոպ լուծույթ 7 մլ ……………………………………դեղին գլխարկ

● 20XԽտացված լվացքի լուծույթ 40մլ

………………………………………………..թափանցիկ գլխարկ

●2X Էքստրակցիոն լուծույթ 50 մլ……………………… կապույտ գլխարկ

Ռեակտիվների պատրաստում

7.1 Մեղրի նմուշ

Լուծում 1. 0,2 Մ աղաթթվի լուծույթ

Քաշը 41,5 մլ Խտացրած աղաթթու, նոսրացնել դեոնացված ջրով մինչև 500 մլ:

Լուծում 2. Լվացքի լուծույթ

Լվացքի խտացված լուծույթը նոսրացրեք դեոնացված ջրով 1:19 ծավալային հարաբերակցությամբ, որը կօգտագործվի ափսեները լվանալու համար:նոսրացված լուծույթը կարելի է պահել 4℃ ջերմաստիճանում 1 ամիս:

Լուծում3. արդյունահանման լուծույթ

2×խտացված արդյունահանման լուծույթը նոսրացրեք դեոնացված ջրով 1:1 ծավալային հարաբերակցությամբ (կամ կախված պահանջից), որը կօգտագործվի նմուշի արդյունահանման համար:Այս նոսրացված լուծույթը կարող է պահպանվել 1 ամիս 4℃ ջերմաստիճանում:

Նմուշի պատրաստուկներ

8.1 Ծանուցում և նախազգուշական միջոցներ օգտագործողների համար նախքան շահագործումը

(ա) Խնդրում ենք օգտագործել միանվագ խորհուրդներ փորձի գործընթացում և փոխել ծայրերը, երբ կլանում են տարբեր ռեակտիվներ:

(բ) Համոզվեք, որ բոլոր փորձարարական գործիքները մաքուր են, հակառակ դեպքում դա կազդի վերլուծության արդյունքի վրա:

8.2Մեղրի նմուշ

-----Քաշեք 2գ±0,05գ մեղրի նմուշը 50մլ պոլիստիրոլի ցենտրիֆուգային խողովակի մեջ,

-----Ավելացրեք 2 մլ 0,2 Մ աղաթթվի լուծույթ (լուծույթ 1), պտտեք, որպեսզի այն ամբողջությամբ խառնվի, ապա ավելացրեք 8 մլ մեթիլեն քլորիդ, թափահարեք թափահարելով 5 րոպե, որպեսզի ամբողջությամբ լուծարվի;

-----Ցենտրիֆուգել 10 րոպե, առնվազն 3000գ սենյակային ջերմաստիճանում (20-25℃);

-----Հեռացրեք վերին նյութի փուլը, 2 մլ ենթաշերտի օրգանական լուծույթը տեղափոխեք 10 մլ ապակե խողովակի մեջ: չորացրեք ենթակազմը ազոտի հոսքի ջրային բաղնիքի տակ (50-60℃)

-----Ավելացրեք 1 մլ n-հեքսան, պտտահողմ 30 վրկ, ապա ավելացրեք 1 մլ արդյունահանման լուծույթ (լուծույթ 3), նորից պտտեք 1 րոպե:Ցենտրիֆուգեք 5 րոպե, առնվազն 3000 գ սենյակային ջերմաստիճանում (20-25℃);

-----Հեռացրեք վերին շերտը, վերցրեք 50մլ վերլուծության համար;

9. Վերլուծության գործընթացը

9.1 Ծանուցում նախքան վերլուծությունը

9.1.1 Համոզվեք, որ բոլոր ռեակտիվները և միկրոհորերը գտնվում են սենյակային ջերմաստիճանում (20-25℃):

9.1.2 Բոլոր մնացած ռեակտիվները օգտագործելուց անմիջապես հետո վերադարձրեք 2-8℃ ջերմաստիճանի:

9.1.3 Միկրոհորերի ճիշտ լվացումը կարևոր քայլ է վերլուծության գործընթացում.դա ELISA վերլուծության կրկնվողության կենսական գործոնն է:

9.1.4 Խուսափեք լույսից և ծածկեք միկրոհորերը ինկուբացիայի ընթացքում:

9.2 Վերլուծության քայլեր

9.2.1 Բոլոր ռեակտիվները դուրս հանեք սենյակային ջերմաստիճանում (20-25℃) ավելի քան 30 րոպե, օգտագործելուց առաջ միատարրացրեք:

9.2.2 Դուրս հանեք անհրաժեշտ միկրոհորերը և անմիջապես վերադարձրեք մնացածը 2-8℃ ջերմաստիճանի տակ գտնվող կայծակաճարմանդ տոպրակի մեջ:

9.2.3 Լվացքի նոսրացված լուծույթը օգտագործելուց առաջ պետք է նորից տաքացվի, որպեսզի այն լինի սենյակային ջերմաստիճանում:

9.2.4Թիվ:Համարակալեք յուրաքանչյուր միկրոհորի դիրքը և բոլոր ստանդարտներն ու նմուշները պետք է գործարկվեն կրկնօրինակով:Գրանցեք ստանդարտների և նմուշների դիրքերը:

9.2.5Ավելացնել ստանդարտ լուծում/նմուշ.Համապատասխան հորերին ավելացրեք 50 մկլ ստանդարտ լուծույթ կամ պատրաստված նմուշ:Ավելացնել 50 մկլ հակամարմինների լուծույթ:Մեղմորեն խառնել՝ ձեռքով թափահարելով ափսեը և ինկուբացնել 30 րոպե 25℃ ջերմաստիճանում ծածկով:

9.2.6Լվանալ:Հեռացրեք ծածկը նրբորեն և մաքրեք հեղուկը հորերից և ողողեք միկրոհորերը 250 մկլ նոսրացված լվացքի լուծույթով (լուծույթ 2) 10 վրկ ընդմիջումով 4-5 անգամ:Կլանեք մնացորդային ջուրը ներծծող թղթով (մնացած օդի պղպջակը կարելի է հեռացնել չօգտագործված ծայրով):

9.2.8.Enzyme conjugate:Յուրաքանչյուր հորի մեջ ավելացրեք 100 մլ ֆերմենտային կոնյուգատի լուծույթ, նրբորեն խառնեք ափսեը ձեռքով թափահարելով և 30 րոպե ինկուբացեք 25℃ ջերմաստիճանում ծածկով:Կրկին կրկնեք լվացքի քայլը:

9.2.8Գունավորում:Յուրաքանչյուր հորի մեջ ավելացրեք 50 մկլ լուծույթ A և 50 մկլ լուծույթ B:Մեղմորեն խառնել՝ ձեռքով թափահարելով ափսեը և 15 րոպե ինկուբացնել 25℃ ջերմաստիճանում՝ ծածկով (տես 12.8):

9.2.9Չափել:Յուրաքանչյուր հորի մեջ ավելացրեք 50 մկլ կանգառի լուծույթ:Նրբորեն խառնեք՝ ձեռքով թափահարելով թիթեղը և չափեք ներծծումը 450 նմ-ով օդային բշտիկի նկատմամբ (Առաջարկվում է չափել երկակի ալիքի երկարությամբ՝ 450/630 նմ։ Կարդացեք արդյունքը կանգառի լուծույթի ավելացումից հետո 5 րոպեի ընթացքում։) (Մենք կարող ենք նաև չափել հայացքով։ առանց կանգառի լուծույթի կարճ ELIASA գործիքի)

Արդյունքներ

10.1 Տոկոսային կլանումը

Ստանդարտների և նմուշների համար ստացված կլանման արժեքների միջին արժեքները բաժանվում են առաջին ստանդարտի կլանման արժեքի վրա (զրոյական ստանդարտ) և բազմապատկվում 100%-ով:Այսպիսով, զրոյական ստանդարտը հավասար է 100%-ի, իսկ կլանման արժեքները բերվում են տոկոսներով:

Կլանումը (%) = B/B0 ×100%

B —— կլանման ստանդարտ (կամ նմուշ)

B0 —— կլանման զրոյական ստանդարտ

10.2 Ստանդարտ կոր

Ստանդարտ կորը գծելու համար. Ստանդարտների կլանման արժեքը որպես y առանցք, ֆլումեկինի ստանդարտ լուծույթի (ppb) կոնցենտրացիայի կիսալոգարիթմական, որպես x առանցք:

--- Որflumequineյուրաքանչյուր նմուշի կոնցենտրացիան (ppb), որը կարելի է կարդալ տրամաչափման կորից, բազմապատկվում է յուրաքանչյուր հաջորդ նմուշի համապատասխան նոսրացման բազմապատիկով, և ստացվում է նմուշի փաստացի կոնցենտրացիան:

ELISA փաթեթների տվյալների կրճատման համար մշակվել է հատուկ ծրագրակազմ, որը կարող է տրամադրվել ըստ պահանջի:

11. Զգայունություն, ճշգրտություն և ճշգրտություն

Թեստի զգայունություն:0.3 ppb

Մեղր Նմուշի նոսրացման գործակիցը՝ 2

Հայտնաբերման սահմանաչափ

Մեղրի նմուշ----------------------------------------------- - 1 ppb

Ճշգրտություն

Մեղրի նմուշ --------------------------------------------- 90±20 %

Ճշգրտություն

ELISA հավաքածուի տատանումների գործակիցը 10%-ից պակաս է:

12. Ծանուցում

12.1 Ստանդարտների և նմուշների համար ստացված կլանման արժեքների միջին արժեքները կնվազեն, եթե ռեակտիվները և նմուշները չեն կարգավորվել սենյակային ջերմաստիճանում (20-25℃):

12.2 Թույլ մի տվեք, որ միկրոհորերը չորանան քայլերի միջև, որպեսզի խուսափեք անհաջող կրկնությունից և գործարկեք հաջորդ քայլը միկրոհորերի ամրացմանը հպելուց անմիջապես հետո:

12.3.Օգտագործելուց առաջ յուրաքանչյուր ռեակտիվը միատարրացրեք:

12.4.Ձեր մաշկը հեռու պահեք կանգառի լուծույթից, քանի որ այն 2M H է₂SO₄լուծում.

12.5 Մի օգտագործեք հնացած փաթեթները:Մի փոխանակեք տարբեր խմբաքանակների ռեագենտները, քանի որ դա կնվազեցնի զգայունությունը:

12.6 Պահպանման պայման.

Պահպանեք ELISA փաթեթները 2-8℃ ջերմաստիճանում, մի սառեցրեք:Կնքված միկրոհորերի ափսեները Խուսափեք արևի ուղիղ ճառագայթներից բոլոր ինկուբացիաների ընթացքում:Խորհուրդ է տրվում ծածկել միկրոտիտրային թիթեղները:

12.7 Ռեակտիվների վատթարացման ցուցումներ.

Ենթաշերտի լուծույթը պետք է հրաժարվել, եթե այն գույներ է ստանում:

Ռեակտիվները կարող են վատանալ, եթե զրոյական ստանդարտի կլանման արժեքը (450/630 նմ) ​​փոքր է 0,5-ից (A450nm-0,5):

12.8 Գունավորման ռեակցիային անհրաժեշտ է 15 րոպե՝ A և B լուծույթները ավելացնելուց հետո: Եվ դուք կարող եք երկարացնել ինկուբացիոն ժամանակը 20 րոպեից ավելի, եթե գույնը չափազանց բաց է որոշելու համար:Երբեք մի գերազանցեք 25 րոպեն, ընդհակառակը, պատշաճ կերպով կրճատեք ինկուբացիոն ժամանակը:

12.9 Օպտիմալ ռեակցիայի ջերմաստիճանը 25℃ է:Ավելի բարձր կամ ցածր ջերմաստիճանը կհանգեցնի զգայունության և կլանման արժեքների փոփոխության:

13. Պահպանում

Պահպանման վիճակ՝ 2-8℃։

Պահպանման ժամկետը՝ 12 ամիս։