προϊόν

Αρχή δοκιμής

Αυτό το κιτ βασίζεται στην έμμεση-ανταγωνιστική τεχνολογία ELISA.Τα φρεάτια μικροτιτλοδότησης επικαλύπτονται με αντιγόνο σύζευξης.Flumequineτο υπόλειμμα στο δείγμα ανταγωνίζεται το αντιγόνο που είναι επικαλυμμένο στην πλάκα μικροτιτλοδότησης για το αντίσωμα.Μετά την προσθήκη αντι-αντισώματος σημασμένου με ένζυμο, το υπόστρωμα TMB χρησιμοποιείται για να δείξει το χρώμα.Η απορρόφηση του δείγματος σχετίζεται αρνητικά με την τετρακυκλίνη που βρίσκεται σε αυτό, αφού συγκριθεί με την Πρότυπη Καμπύλη, πολλαπλασιασμένη με το πολλαπλάσιο της αραίωσης, μπορεί να υπολογιστεί η ποσότητα υπολειμμάτων Flumequine στο δείγμα.

Εφαρμογές

Αυτό το κιτ μπορεί να χρησιμοποιηθεί σε ποσοτική και ποιοτική ανάλυση υπολειμμάτων φλουμεκίνης στο μέλι.

Διασταυρούμενες αντιδράσεις

Flumequine ……………………………………………… 100%

Απαιτούμενα υλικά

Εξοπλισμοί

┅┅ Φασματοφωτόμετρο πλακών μικροτιτλοδότησης (450nm/630nm)

┅┅Ομογενοποιητής ή στομαχοποιητής

┅┅Shaker

┅┅Μίκτης Vortex

┅┅Φυγόκεντρος

┅┅ Αναλυτική ισορροπία (επαγωγή: 0,01 g)

┅┅ Διαβαθμισμένη πιπέτα: 15ml

┅┅Λαμπτήρας πιπέτας από καουτσούκ

┅┅Φυγόκεντρος σωλήνας πολυστυρενίου: 15ml, 50ml

┅┅Γυάλινος δοκιμαστικός σωλήνας: 10ml

┅┅Μικροπιπέτες: 20ml-200ml, 100ml -10000ml,

250ml -πολυπιπέτα

Αντιδραστήρια

┅┅n-εξάνιο (AR)

┅┅Μεθυλενοχλωρίδιο (AR)

┅┅Ακετονιτρίλιο (AR)

┅┅Απιονισμένο νερό

-----Πυκνό υδροχλωρικό οξύ (AR)

Εξαρτήματα κιτ

● Πλάκα μικροτιτλοδότησης με 96 φρεάτια επικαλυμμένα με αντιγόνο

● Τυπικά διαλύματα (6 φιάλες×1ml/φιάλη)

0ppb, 0,3ppb, 1,2ppb, 4,8ppb, 19,2ppb, 76,8ppb

● Πρότυπος έλεγχος υψηλής συγκέντρωσης: (1ml/φιάλη)

………………………………………………………100 ppb

● Σύζευγμα ενζύμου 12ml………………………… κόκκινο καπάκι

● Διάλυμα αντισωμάτων 7ml …………..………..….…..πράσινο καπάκι

● Διάλυμα A 7ml……………………………..………..λευκό καπάκι

● Διάλυμα B 7ml …………………………..…………… κόκκινο καπάκι

● Διακοπή διακοπής 7 ml …………………………..………κίτρινο καπάκι

● 20XΣυμπυκνωμένο διάλυμα πλύσης 40ml

………………………………………………..διαφανές καπάκι

●2X Διάλυμα εκχύλισης 50ml……………………… μπλε καπάκι

Προετοιμασία αντιδραστηρίων

7.1 Δείγμα μελιού

Διάλυμα 1: Διάλυμα υδροχλωρικού οξέος 0,2 Μ

Βάρος 41,5 ml Συμπυκνωμένο υδροχλωρικό οξύ, αραιώνεται με απιονισμένο νερό στα 500 ml.

Λύση 2: Διάλυμα πλύσης

Αραιώστε το συμπυκνωμένο διάλυμα πλύσης με απιονισμένο νερό σε αναλογία όγκου 1:19, το οποίο θα χρησιμοποιηθεί για το πλύσιμο των πλακών.Το αραιωμένο διάλυμα μπορεί να αποθηκευτεί στους 4℃ για 1 μήνα.

Λύση3: διάλυμα εκχύλισης

Αραιώστε το 2×συμπυκνωμένο διάλυμα εκχύλισης με απιονισμένο νερό σε αναλογία όγκου 1:1 (ή ανάλογα με τις απαιτήσεις), που θα χρησιμοποιηθεί για την εκχύλιση του δείγματος.Αυτό το αραιωμένο διάλυμα μπορεί να διατηρηθεί για 1 μήνα στους 4℃.

Παρασκευάσματα δειγμάτων

8.1 Ειδοποίηση και προφυλάξεις για τους χρήστες πριν από τη λειτουργία

(α) Χρησιμοποιήστε μεμονωμένες άκρες στη διαδικασία του πειράματος και αλλάξτε τις άκρες όταν απορροφήσετε διαφορετικά αντιδραστήρια.

(β) Βεβαιωθείτε ότι όλα τα πειραματικά όργανα είναι καθαρά, διαφορετικά θα επηρεάσει το αποτέλεσμα της ανάλυσης.

8.2Δείγμα μελιού

-----Ζυγίστε 2g±0,05g δείγμα μελιού σε σωλήνα φυγοκέντρησης πολυστυρενίου 50ml,

-----Προσθέστε 2 ml διαλύματος υδροχλωρικού οξέος 0,2 M (Διάλυμα 1), ανακατέψτε για να αναμειχθεί πλήρως, στη συνέχεια προσθέστε 8 ml μεθυλενοχλωρίδιο, ανακινήστε με αναδευτήρα για 5 λεπτά για να διαλυθεί πλήρως.

-----Φυγοκεντρήστε για 10 λεπτά, τουλάχιστον 3000g σε θερμοκρασία δωματίου (20-25℃).

-----Αφαιρέστε τη φάση του υπερκείμενου, πάρτε 2 ml από το οργανικό διάλυμα του υποστρώματος σε γυάλινο σωλήνα 10 ml. Στεγνώστε το υπόστρωμα κάτω από υδατόλουτρο ροής αζώτου (50-60℃)

-----Προσθέστε 1 ml n-εξανίου, στροβιλισμού για 30 δευτερόλεπτα, στη συνέχεια προσθέστε 1 ml διαλύματος εκχύλισης (διάλυμα 3), αναδεύστε ξανά για 1 λεπτό.Φυγοκεντρήστε για 5 λεπτά, τουλάχιστον 3000g σε θερμοκρασία δωματίου (20-25℃).

-----Αφαιρέστε τη φάση του υπερκείμενου, λάβετε 50 ml για ανάλυση.

9. Διαδικασία ανάλυσης

9.1 Σημείωση πριν από τον προσδιορισμό

9.1.1 Βεβαιωθείτε ότι όλα τα αντιδραστήρια και τα μικροπηγάδια βρίσκονται σε θερμοκρασία δωματίου (20-25℃).

9.1.2 Επιστρέψτε όλα τα υπόλοιπα αντιδραστήρια στους 2-8℃ αμέσως μετά τη χρήση.

9.1.3 Το σωστό πλύσιμο των μικροβυθισμάτων είναι ένα σημαντικό βήμα στη διαδικασία της ανάλυσης.είναι ο ζωτικός παράγοντας για την επανάληψη της ανάλυσης ELISA.

9.1.4 Αποφύγετε το φως και καλύψτε τα μικροπηγάδια κατά την επώαση.

9.2 Βήματα ανάλυσης

9.2.1 Αφαιρέστε όλα τα αντιδραστήρια σε θερμοκρασία δωματίου (20-25℃) για περισσότερο από 30 λεπτά, ομογενοποιήστε πριν τη χρήση.

9.2.2 Βγάλτε τα μικροβυθίσματα που χρειάζονται και επιστρέψτε τα υπόλοιπα στη σακούλα με φερμουάρ στους 2-8℃ αμέσως.

9.2.3 Το αραιωμένο διάλυμα πλύσης θα πρέπει να ξαναθερμανθεί για να είναι σε θερμοκρασία δωματίου πριν από τη χρήση.

9.2.4Αριθμός:Αριθμήστε κάθε θέση μικροβυθίσματος και όλα τα πρότυπα και τα δείγματα θα πρέπει να εκτελούνται εις διπλούν.Καταγράψτε τα πρότυπα και τις θέσεις των δειγμάτων.

9.2.5Προσθέστε πρότυπο διάλυμα/δείγμα:Προσθέστε 50 µl πρότυπου διαλύµατος ή παρασκευασµένου δείγµατος σε αντίστοιχα φρεάτια.Προσθέστε 50 μl διαλύματος αντισώματος.Ανακατεύουμε απαλά ανακινώντας το πιάτο με το χέρι και επωάζουμε για 30 λεπτά στους 25℃ με κάλυμμα.

9.2.6Πλύση:Αφαιρέστε απαλά το κάλυμμα και καθαρίστε το υγρό από τα πηγαδάκια και ξεπλύνετε τα μικροβυθίσματα με 250 μl αραιωμένου διαλύματος πλύσης (διάλυμα 2) σε διάστημα 10 δευτερολέπτων για 4-5 φορές.Απορροφήστε το υπόλοιπο νερό με απορροφητικό χαρτί (η υπόλοιπη φυσαλίδα αέρα μπορεί να εξαλειφθεί με αχρησιμοποίητο άκρο).

9.2.8.Σύζευγμα ενζύμου:Προσθέστε διάλυμα συζυγούς ενζύμου 100 ml σε κάθε φρεάτιο, Ανακατέψτε απαλά ανακινώντας χειροκίνητα την πλάκα και επωάστε για 30 λεπτά στους 25℃ με κάλυμμα.Επαναλάβετε ξανά το βήμα πλύσης.

9.2.8Χρωματισμός:Προσθέστε 50 μl διαλύματος Α και 50 μl διαλύματος Β σε κάθε φρεάτιο.Ανακατέψτε απαλά ανακινώντας την πλάκα με το χέρι και επωάστε για 15 λεπτά στους 25℃ με κάλυμμα (βλ. 12.8).

9.2.9Μετρήσει:Προσθέστε 50µl διαλύματος τερματισμού σε κάθε φρεάτιο.Ανακατέψτε απαλά ανακινώντας χειροκίνητα την πλάκα και μετρήστε την απορρόφηση στα 450 nm έναντι ενός τυφλού αέρα (Συνιστάται μέτρηση με το διπλό μήκος κύματος 450/630 nm. Διαβάστε το αποτέλεσμα εντός 5 λεπτών μετά την προσθήκη του διαλύματος διακοπής. ) (Μπορούμε επίσης να μετρήσουμε με όραση χωρίς λύση στοπ σε συντομία του οργάνου ELIASA)

Αποτελέσματα

10.1 Ποσοστό απορρόφησης

Οι μέσες τιμές των τιμών απορρόφησης που λαμβάνονται για τα πρότυπα και τα δείγματα διαιρούνται με την τιμή απορρόφησης του πρώτου προτύπου (μηδενικό πρότυπο) και πολλαπλασιάζονται επί 100%.Το μηδενικό πρότυπο γίνεται έτσι ίσο με 100% και οι τιμές απορρόφησης αναφέρονται σε ποσοστά.

Απορρόφηση (%) = B/B0 ×100%

Β ——πρότυπο απορρόφησης (ή δείγμα)

B0 ——πρότυπο μηδενικής απορρόφησης

10.2 Τυπική καμπύλη

Για να σχεδιάσετε μια τυπική καμπύλη: Πάρτε την τιμή απορρόφησης των προτύπων ως άξονα y, ημιλογαριθμική της συγκέντρωσης του διαλύματος προτύπων flumequine (ppb) ως άξονα x.

--- ΟφλουμεκίνηΗ συγκέντρωση κάθε δείγματος (ppb), η οποία μπορεί να διαβαστεί από την καμπύλη βαθμονόμησης, πολλαπλασιάζεται με το αντίστοιχο πολλαπλάσιο αραίωσης κάθε δείγματος που ακολουθείται και προκύπτει η πραγματική συγκέντρωση του δείγματος.

Για τη μείωση δεδομένων των κιτ ELISA, έχει αναπτυχθεί ειδικό λογισμικό, το οποίο μπορεί να παρασχεθεί κατόπιν αιτήματος.

11. Ευαισθησία, ακρίβεια και ακρίβεια

Ευαισθησία δοκιμής:0,3 ppb

Συντελεστής αραίωσης δείγματος μελιού: 2

Οριο ανίχνευσης

Δείγμα μελιού------------------------------------------------ -1 ppb

Ακρίβεια

Δείγμα μελιού --------------------------------------------- 90±20 %

Ακρίβεια

Ο συντελεστής διακύμανσης του κιτ ELISA είναι μικρότερος από 10%.

12. Ειδοποίηση

12.1 Οι μέσες τιμές των τιμών απορρόφησης που λαμβάνονται για τα πρότυπα και τα δείγματα θα μειωθούν εάν τα αντιδραστήρια και τα δείγματα δεν έχουν ρυθμιστεί σε θερμοκρασία δωματίου (20-25℃).

12.2 Μην αφήνετε τα μικροπηγαδάκια να στεγνώνουν μεταξύ των βημάτων για να αποφύγετε την ανεπιτυχή επανάληψη και λειτουργήστε το επόμενο βήμα αμέσως μετά το χτύπημα της θήκης μικροϋποδοχών.

12.3.Ομογενοποιήστε κάθε αντιδραστήριο πριν από τη χρήση.

12.4.Κρατήστε το δέρμα σας μακριά από το διάλυμα στοπ γιατί είναι το 2M H₂SO₄λύση.

12.5 Μη χρησιμοποιείτε τα κιτ ξεπερασμένα.Μην αλλάζετε τα αντιδραστήρια διαφορετικών παρτίδων, γιατί θα μειώσει την ευαισθησία.

12.6 Κατάσταση αποθήκευσης:

Διατηρήστε τα κιτ ELISA στους 2-8℃, μην παγώσετε.Πλάκες μικροπηγαδιών υποδοχέα σφράγισης Αποφύγετε το άμεσο ηλιακό φως κατά τη διάρκεια όλων των επωάσεων.Συνιστάται η κάλυψη των πλακών μικροτιτλοδότησης.

12.7 Ενδείξεις για την κακή λειτουργία των αντιδραστηρίων:

Το διάλυμα υποστρώματος θα πρέπει να εγκαταλειφθεί εάν πάρει χρώμα.

Τα αντιδραστήρια μπορεί να είναι χαλασμένα εάν η τιμή απορρόφησης (450/630 nm) του μηδενικού προτύπου είναι μικρότερη από 0,5 (A450nm＜0,5).

12.8 Η αντίδραση χρωματισμού χρειάζεται 15 λεπτά μετά την προσθήκη του διαλύματος Α και του διαλύματος Β. Και μπορείτε να παρατείνετε το χρόνο επώασης από 20 λεπτά σε περισσότερο εάν το χρώμα είναι πολύ ανοιχτό για να προσδιοριστεί.Μην υπερβαίνετε ποτέ τα 25 λεπτά, Αντίθετα, μειώστε σωστά τον χρόνο επώασης.

12.9 Η βέλτιστη θερμοκρασία αντίδρασης είναι 25℃.Υψηλότερη ή χαμηλότερη θερμοκρασία θα οδηγήσει σε αλλαγές στην ευαισθησία και τις τιμές απορρόφησης.

13. Αποθήκευση

Κατάσταση αποθήκευσης: 2-8℃.

Χρόνος αποθήκευσης: 12 μήνες.