Prodotto

Principio di prova

Questo kit si basa sulla tecnologia ELISA a competizione indiretta.I micropozzetti sono rivestiti con l'antigene di accoppiamento.Flumequinaresiduo nel campione compete con l'antigene rivestito sulla micropiastra per l'anticorpo.Dopo l'aggiunta dell'anticorpo marcato con enzima, viene utilizzato il substrato TMB per mostrare il colore.L'assorbanza del campione è correlata negativamente alla presenza di tetraciclina in esso, dopo il confronto con la curva standard, moltiplicata per il multiplo di diluizione, è possibile calcolare la quantità residua di flumechina nel campione.

Applicazioni

Questo kit può essere utilizzato nell'analisi quantitativa e qualitativa dei residui di flumechina nel miele.

Reazioni incrociate

Flumechina …………………..……………………… 100%

Materiali richiesti

Attrezzature

┅┅Spettrofotometro per micropiastre (450nm/630nm)

┅┅Omogeneizzatore o stomacher

┅┅Shaker

┅┅Agitatore Vortex

┅┅Centrifuga

┅┅Bilancio analitico (induttanza: 0,01 g)

┅┅Pipetta graduata: 15ml

┅┅Polpetta pipetta in gomma

┅┅Provetta da centrifuga in polistirolo: 15 ml, 50 ml

┅┅Provetta di vetro：10ml

┅┅Micropipette: 20ml-200ml, 100ml -10000ml,

250 ml - multipipetta

Reagenti

┅┅n-esano(AR)

┅┅cloruro di metilene (AR)

┅┅Acetonitrile(AR)

┅┅Acqua deionizzata

-----Acido cloridrico concentrato (AR)

Componenti del kit

● Piastra per microtitolazione con 96 pozzetti rivestiti con antigene

● Soluzioni standard (6 flaconi×1ml/flacone)

0 ppb, 0,3 ppb, 1,2 ppb, 4,8 ppb, 19,2 ppb, 76,8 ppb

● Controllo standard ad alta concentrazione: (1 ml/flacone)

…………………………………………………......100ppb

● Enzima coniugato 12ml………………………... tappo rosso

● Soluzione anticorpale 7ml …………..……..….…..tappo verde

● Soluzione A 7ml……..…………………..………..tappo bianco

● Soluzione B 7ml …………….…………..………… tappo rosso

● Stop solution 7ml ……………………..………tappo giallo

● 20XSoluzione di lavaggio concentrata 40 ml

………………………………………..…..tappo trasparente

●2X Extraction solution 50ml………………...… tappo blu

Preparazione dei reagenti

7.1 Campione di miele

Soluzione 1: soluzione di acido cloridrico 0,2 M

Peso 41,5 ml Acido cloridrico concentrato, diluire con acqua deionizzata a 500 ml.

Soluzione 2: soluzione di lavaggio

Diluire la soluzione di lavaggio concentrata con acqua deionizzata nel rapporto volumetrico di 1:19, che verrà utilizzata per il lavaggio delle piastre.la soluzione diluita può essere conservata a 4℃ per 1 mese.

Soluzione3: soluzione di estrazione

Diluire la soluzione di estrazione concentrata 2× con acqua deionizzata nel rapporto volumetrico di 1:1 (o dipendere dal requisito), che verrà utilizzata per l'estrazione del campione.Questa soluzione diluita può essere conservata per 1 mese a 4℃.

Preparazioni del campione

8.1 Avviso e precauzioni per gli utenti prima del funzionamento

(a) Si prega di utilizzare punte una tantum nel processo di esperimento e cambiare le punte quando si assorbe un reagente diverso.

(b) Assicurarsi che tutti gli strumenti sperimentali siano puliti, altrimenti influenzerà il risultato del test.

8.2Campione di miele

----- Pesare 2 g ± 0,05 g di campione di miele in una provetta da centrifuga in polistirene da 50 ml,

-----Aggiungere 2 ml di soluzione di acido cloridrico 0,2 M (Soluzione 1), vortexare per miscelare completamente, quindi aggiungere 8 ml di cloruro di metilene, agitare con l'agitatore per 5 minuti per dissolversi completamente;

-----Centrifugare per 10 min, almeno 3000g a temperatura ambiente (20-25℃);

----- Rimuovere la fase supernatante, portare 2 ml della soluzione organica del substrato in una provetta di vetro da 10 ml. Asciugare il sottostato sotto il bagno d'acqua del flusso di azoto (50-60 ℃)

----- Aggiungere 1 ml di n-esano, vortexare per 30 secondi, quindi aggiungere 1 ml di soluzione di estrazione (soluzione 3), vortexare nuovamente per 1 minuto.Centrifugare per 5min, almeno 3000g a temperatura ambiente (20-25℃);

-----Rimuovere la fase supernatante, prendere 50 ml per il dosaggio;

9. Processo di analisi

9.1 Avviso prima del test

9.1.1 Assicurarsi che tutti i reagenti e i micropozzetti siano tutti a temperatura ambiente (20-25 ℃).

9.1.2 Riportare tutti i restanti reagenti a 2-8℃ immediatamente dopo l'uso.

9.1.3 Il lavaggio corretto dei micropozzetti è un passaggio importante nel processo di analisi;è il fattore vitale per la ripetitività dell'analisi ELISA.

9.1.4 Evitare la luce e coprire i micropozzetti durante l'incubazione.

9.2 Fasi del test

9.2.1 Estrarre tutti i reagenti a temperatura ambiente (20-25 ℃) per più di 30 minuti, omogeneizzare prima dell'uso.

9.2.2 Estrarre i micropozzetti necessari e rimettere immediatamente il resto nel sacchetto con chiusura lampo a 2-8℃.

9.2.3 La soluzione di lavaggio diluita deve essere riscaldata a temperatura ambiente prima dell'uso.

9.2.4Numero:Numerare ogni posizione del micropozzetto e tutti gli standard ei campioni devono essere analizzati in duplicato.Registrare le posizioni degli standard e dei campioni.

9.2.5Aggiungi soluzione/campione standard:Aggiungere 50 µl di soluzione standard o campione preparato nei pozzetti corrispondenti.Aggiungere 50 µl di soluzione anticorpale.Miscelare delicatamente agitando manualmente la piastra e incubare per 30 minuti a 25°C con coperchio.

9.2.6Lavaggio:Rimuovere delicatamente il coperchio e purificare il liquido dai pozzetti e sciacquare i micropozzetti con 250 µl di soluzione di lavaggio diluita (soluzione 2) a intervalli di 10 secondi per 4-5 volte.Assorbire l'acqua residua con carta assorbente (la bolla d'aria residua può essere eliminata con la punta inutilizzata).

9.2.8.Enzima coniugato:Aggiungere 100 ml di soluzione di coniugato enzimatico a ciascun pozzetto, mescolare delicatamente agitando manualmente la piastra e incubare per 30 minuti a 25 ℃ con coperchio.Ripeti di nuovo la fase di lavaggio.

9.2.8Colorazione:Aggiungere 50 µl di soluzione A e 50 µl di soluzione B in ciascun pozzetto.Mescolare delicatamente agitando manualmente la piastra e incubare per 15 min a 25℃ con coperchio (vedi 12.8).

9.2.9Misurare:Aggiungere 50 µl della soluzione di arresto in ciascun pozzetto.Miscelare delicatamente agitando manualmente la piastra e misurare l'assorbanza a 450 nm rispetto a un vuoto d'aria (si consiglia di misurare con la doppia lunghezza d'onda di 450/630 nm. Leggere il risultato entro 5 minuti dall'aggiunta della soluzione di arresto.) (Possiamo anche misurare a vista senza soluzione di arresto in breve dello strumento ELIASA)

Risultati

10.1 Assorbanza percentuale

I valori medi dei valori di assorbanza ottenuti per gli standard ei campioni vengono divisi per il valore di assorbanza del primo standard (standard zero) e moltiplicati per 100%.Lo standard zero è quindi reso uguale al 100% ei valori di assorbanza sono riportati in percentuale.

Assorbanza (%) = B/B0 ×100%

B ——standard di assorbanza (o campione)

B0 ——assorbanza zero standard

10.2 Curva standard

Per tracciare una curva standard: Prendere il valore di assorbanza degli standard come asse y, semilogaritmico della concentrazione della soluzione standard flumequina (ppb) come asse x.

--- IlflumequinaLa concentrazione di ciascun campione (ppb), che può essere letta dalla curva di calibrazione, viene moltiplicata per il corrispondente multiplo di diluizione di ciascun campione seguito e si ottiene la concentrazione effettiva del campione.

Per la riduzione dei dati dei kit ELISA è stato sviluppato un software speciale, che può essere fornito su richiesta.

11. Sensibilità, accuratezza e precisione

Prova la sensibilità：0,3ppb

Miele Fattore di diluizione del campione: 2

Limite di rilevamento

Campione di miele------------------------------------------------ -1ppb

Precisione

Campione di miele -------------------------------------------- 90±20 %

Precisione

Il coefficiente di variazione del kit ELISA è inferiore al 10%.

12. Avviso

12.1 I valori medi dei valori di assorbanza ottenuti per gli standard e i campioni saranno ridotti se i reagenti e i campioni non sono stati regolati a temperatura ambiente (20-25 ℃).

12.2 Non lasciare che i micropozzetti si asciughino tra una fase e l'altra per evitare ripetizioni infruttuose e passare alla fase successiva immediatamente dopo aver picchiettato il supporto per micropozzetti.

12.3.Omogeneizzare ogni reagente prima dell'uso.

12.4.Tieni la pelle lontana dalla soluzione di arresto perché è il 2M H₂SO₄soluzione.

12.5 Non utilizzare i kit scaduti.Non scambiare i reagenti di lotti diversi, perché diminuirà la sensibilità.

12.6 Condizioni di conservazione:

Conservare i kit ELISA a 2-8℃, non congelare.Sigillare le piastre per micropozzetti Evitare la luce diretta del sole durante tutte le incubazioni.Si consiglia di coprire le micropiastre.

12.7 Indicazioni di cattivo funzionamento dei reagenti:

La soluzione del substrato dovrebbe essere abbandonata se vira i colori.

I reagenti possono deteriorarsi se il valore di assorbanza (450/630nm) dello standard zero è inferiore a 0,5 (A450nm<0,5).

12.8 La reazione di colorazione richiede 15 minuti dopo l'aggiunta della soluzione A e della soluzione B. Inoltre, è possibile prolungare l'intervallo del tempo di incubazione da 20 minuti a più se il colore è troppo chiaro per essere determinato.Non superare mai i 25min, anzi accorciare adeguatamente il tempo di incubazione.

12.9 La temperatura di reazione ottimale è 25℃.Una temperatura più alta o più bassa porterà a cambiamenti dei valori di sensibilità e assorbanza.

13. Stoccaggio

Condizioni di conservazione: 2-8 ℃.

Periodo di conservazione: 12 mesi.