mal

Prensîba Testê

Ev kît li ser teknolojiya ELISA-ya nerasterast-hevrikî ye.Kulên mîkrotîter bi antîjena hevgirtinê têne pêçandin.Flumequinebermayiya di nimûneyê de bi antîjena ku li ser plakaya mîkrotîterê ji bo antîpodê hatiye pêçan re pêşbaziyê dike.Piştî lêzêdekirina enzîmê ku li dijî-antîpotê hatî nîşankirin, substrata TMB tê bikar anîn da ku reng nîşan bide.Avêtina nimûneyê bi negatîfiya tetracycline ya tê de ye ve girêdayî ye, piştî berhevdana bi Kûreya Standardê, ku bi pirjimara dilopkirinê ve hatî zêdekirin, dikare mîqdara bermayiya Flumequine di nimûneyê de were hesibandin.

Applications

Ev kît dikare di analîza mîqdar û kalîte ya bermahiyên flumequine di hingiv de were bikar anîn.

Xaç-reaksiyonên

Flumequine …………………………………………… 100%

Materyalên Pêdivî ye

Amûrên

┅┅ Spectrophotometer plakaya mîkrotîter (450nm/630nm)

┅┅Homogenîzator an zikê

┅┅Şaker

┅┅Mîksera Vortex

┅┅Sentrifuge

┅┅Balansa analîtîk (înduktans: 0.01g)

┅┅Pîpeta derçûyî: 15 ml

┅┅Lampa pipetê ya lastîkî

┅┅ Tubeya sentrîfujê ya polystyrene: 15ml, 50ml

┅┅ Lûleya testê ya cam: 10ml

┅┅ Micropipettes: 20ml-200ml, 100ml -10000ml,

250 ml - pirpipet

Reagents

┅┅n-hexane(AR)

┅┅Methylene chloride (AR)

┅┅Acetonitrile (AR)

┅┅Ava deyonîzekirî

-----Asîda hîdrochlorîk a konsantre (AR)

Kit Components

● Plateka mîkrotîter a bi 96 bîrên ku bi antigenê ve girêdayî ye

● Çareseriyên standard (6 şûşeyên × 1 ml / şûşe)

0ppb, 0.3ppb, 1.2ppb, 4.8ppb, 19.2ppb, 76.8ppb

● Kontrola standard a giraniya bilind: (1ml / şûşeyek)

………………………………………………………100ppb

● Enzyme conjugate 12ml………………………………

● Çareseriya antibody 7ml …………..………..….…..kapa kesk

● Çareseriya A 7ml…………………………..…………..kapa spî

● Çareseriya B 7ml …………….……………..………… kapika sor

● Çareseriyê rawestîne 7ml ………………………..………kapa zer

● 20XÇareseriya şuştinê ya konsantre 40ml

………………………………………..…..kapa şefaf

●2X Çareseriya derxistinê 50ml……………………… kapa şîn

Amadekirina Reagents

7.1 Nimûneya hingivîn

Çareserî 1: 0,2 M Çareseriya asîda hîdrochloric

Giranî 41,5 ml Asîda hîdrochlorîk a konsantrekirî, bi ava deyonîzekirî heta 500 ml tê rijandin.

Çareserî 2: Çareseriya şuştinê

Çareseriya şuştinê ya konsantrekirî bi ava deionîzekirî di rêjeya 1:19 de, ya ku dê ji bo şuştina lewheyan were bikar anîn, hilweşînin.Çareseriya hûrkirî dikare 1 meh li 4℃ were hilanîn.

Çare3: çareseriya derxistinê

Çareseriya derxistinê ya 2 × konsantrekirî bi ava deyonîzekirî re di rêjeya 1:1 de (an jî li gorî hewcedariyê ve girêdayî ye), ku dê ji bo derxistina nimûneyê were bikar anîn, bişewitînin.Ev çareseriya tîrêjkirî dikare 1 mehê di 4℃ de were parastin.

Sample Preparations

8.1 Hişyar û tedbîrên ji bo bikarhêneran berî xebatê

(a) Ji kerema xwe di pêvajoya ceribandinê de serişteyên yekcar bikar bînin, û gava ku reagentên cihêreng vedigirin serişteyan biguherînin.

(b) Piştrast bikin ku hemî amûrên ceribandinê paqij in, wekî din ew ê bandorê li encama ceribandinê bike.

8.2Nimûneya hingivîn

----- 2g±0,05g nimûneya hingivê bixin nav lûleya santrîfujê ya 50ml polîstirenê,

----- 2ml 0,2 M Çareseriya asîda hîdrochloric lê zêde bike (Çareserî 1), vortex bike da ku bi tevahî tevlihev bibe, dûv re 8 ml methylene kloride lê zêde bike, 5 hûrdeman bi şekerê bihejîne ku bi tevahî belav bibe;

----- 10 hûrdeman, herî kêm 3000g li germahiya odeyê (20-25℃) santrîfuj bikin;

----- Qonaxa supernatantê rakin, 2 ml ji çareseriya organîk a substratê bixin lûleyek camê ya 10 ml. Binqertê di bin hemama avê ya herikîna nîtrojenê de hişk bikin (50-60℃)

-----1 ml n-hexane, 30s vortex lê zêde bikin, dûv re 1 ml çareya derxistinê (çareseriya 3) lê zêde bikin, 1 hûrdeman dîsa dor bikin.Ji bo 5 hûrdeman, herî kêm 3000 g li germahiya odeyê (20-25 ℃) santrîfuj bikin;

----- Qonaxa supernatantê rakin, ji bo ceribandinê 50 ml bistînin;

9. Pêvajoya assay

9.1 Berî ceribandinê hişyar bikin

9.1.1 Bawer bikin ku hemî reagent û mîkrobat hemî li germahiya odeyê (20-25℃) bin.

9.1.2 Hemî reagentên mayî tavilê piştî bikar anînê vegerînin 2-8℃.

9.1.3 Şuştina mîkrokan bi rêkûpêk di pêvajoya vekolînê de gavek girîng e;ew faktora girîng a dubarebûna analîza ELISA ye.

9.1.4 Di dema înkubasyonê de ji ronahiyê dûr bikevin û mîkrokaniyan veşêrin.

9.2 Gavên Assay

9.2.1 Hemî reagentan ji 30 hûrdeman zêdetir li germahiya odeyê (20-25℃) derxînin, berî bikar bînin homojen bikin.

9.2.2 Mîkrokên pêwîst derxînin û yên mayî tavilê di 2-8℃ de vegerînin çenteyê zip-lock.

9.2.3 Divê çareserîya şuştinê ya hûrkirî ji nû ve were germ kirin da ku li germahiya odeyê be berî ku were bikar anîn.

9.2.4Jimare:Pêdivî ye ku her pozîsyona mîkroyê bihejmêre û hemî standard û nimûne divê ducar bêne xebitandin.Pîvanên standard û nimûneyan tomar bikin.

9.2.5Çareseriya/nimûneya standard zêde bikin:50 µl çareseriya standard an nimûneya amadekirî li bîrên têkildar zêde bikin.50 μl çareseriya antîpodî lê zêde bikin.Bi hejandina plakaya bi destan bi nermî tevlihev bikin û 30 hûrdeman di 25℃ de bi serşokê vekin.

9.2.6Cil:Serpêlê bi nermî rakin û şilekê ji bîrê paqij bikin û mîkrokaniyan bi 250 μl çareseriya şuştinê (çareseriya 2) di navbera 10 saniyan de 4-5 caran bişon.Ava mayî bi kaxezek vegirtinê veşêrin (baba hewayê ya mayî bi tîpa ku nayê bikar anîn were rakirin).

9.2.8.Enzyme conjugate:100 ml çareseriya konjugata enzîmê li her bîrekê zêde bikin, bi nermî bi hejandina plakê bi destan tevbigerin û 30 hûrdeman li 25 ℃ bi sergirtî vekin.Pêngava şuştinê dîsa dubare bikin.

9.2.8Rengdêr:Li her bîrekê 50 μl çareseriya A û 50 μl çareseriya B zêde bikin.Bi hejandina plakê bi destan ve bi nermî tevlihev bikin û 15 hûrdeman li 25℃ bi serpêçê re bihêlin (binihêre 12.8).

9.2.9Pîvan:50 μl çareseriya rawestandinê li her bîrekê zêde bikin.Bi hejandina plakê bi destan bi nermî tevbigerin û bi 450 nm li hember hewayek vala bipîvin (pîvana bi dirêjahiya pêlên dualî ya 450/630 nm tê pêşniyar kirin. Piştî lêzêdekirina çareseriya rawestanê encamê di nav 5 hûrdeman de bixwînin. ) (Em dikarin bi dîtinê jî bipîvin. bêyî çareseriya rawestandinê bi kurteya amûra ELIASA)

Encam

10.1 Ji sedî absorbance

Nirxên navînî yên nirxên vegirtinê yên ku ji bo standardan û nimûneyan hatine wergirtin bi nirxa vegirtinê ya standarda yekem (standard sifir) ve têne dabeş kirin û bi 100% têne zêdekirin.Bi vî rengî standarda sifir bi 100% re wekhev tête çêkirin û nirxên vegirtinê bi sedî têne destnîşan kirin.

Absorbance (%) = B/B0 × 100%

B - standarda vegirtinê (an nimûne)

B0 ——standard sifir vegirtinê

10.2 Curve Standard

Ji bo xêzkirina xêzek standard: Nirxa vegirtinê ya standardan wekî y-xebat, nîv logarîtmîkî ya giraniya çareseriya standardên flumequine (ppb) wekî x-xebatê bigirin.

--- Theflumequinegiraniya her nimûneyê (ppb), ku dikare ji kalîbrasyona kalibrasyonê were xwendin, bi pirjimara hûrgelê ya têkildar a her nimûneyek ku tê şopandin, tê zêdekirin, û giraniya rastîn a nimûneyê tê bidestxistin.

Ji bo kêmkirina daneya kîtên ELISA, nermalava taybetî hatî pêşve xistin, ku dikare li ser daxwazê ​​were peyda kirin.

11. Hestiyarî, rastbûn û rastbûn

Test Sensitivity：0.3ppb

Faktora kêmkirina nimûneya hingivîn: 2

Sînorê Detection

Nimûneya hingivê ----------------------------------------------- -1ppb

Tamî

Nimûneya hingivê -------------------------------------------- 90±20 %

Tamî

Rêjeya guherîna kîta ELISA ji %10 kêmtir e.

12. Hişyar bikin

12.1 Ger reagent û nimûne li germahiya odeyê (20-25 ℃) nehatibin rêkûpêk kirin, nirxên navînî yên nirxên vegirtinê yên ku ji bo standard û nimûneyan hatine wergirtin dê kêm bibin.

12.2 Destûr nedin ku mîkro bîr di navbera gavan de zuwa bibin da ku ji dubarebûna neserkeftî dûr bikevin û gava paşîn tavilê piştî lêdana xweya mîkro bîrê bixebitînin.

12.3.Berî ku bikar bînin her reagentê homojen bikin.

12.4.Çermê xwe ji çareseriya rawestandinê dûr bixin ji ber ku ew 2M H ye₂SO₄çare.

12.5 Kitên kevnar bikar neynin.Reagentên beşên cûda neguherînin, ji ber ku ew ê hestiyariyê hilweşîne.

12.6 Rewşa hilanînê:

Kîtên ELISA di 2-8℃ de bihêlin, necemidin.Peleyên mîkroçêla mayînê bixin Di dema hemî inkubasyonê de ji tîrêja tavê ya rasterast dûr bigirin.Tê pêşniyar kirin ku lewheyên mîkrotîter veşêrin.

12.7 Nîşaneyên ji bo xirabbûna reagentan:

Ger ew reng dizivire divê çareseriya substratê were terikandin.

Dibe ku reagent xirab bibin heke nirxa vegirtinê (450/630nm) ya standarda sifir ji 0,5 (A450nm＜0,5) kêmtir be.

12.8 Piştî lêkirina Çareseriya A û Çareseriya B, reaksiyona rengînkirinê 15 min hewce dike. Û hûn dikarin dema înkubasyonê ji 20 hûrdeman dirêjtir bikin ger reng pir sivik be ku nayê destnîşankirin.Tu carî ji 25 hûrdeman derbas nekin, Berevajî vê, dema inkubasyonê bi rêkûpêk kurt bikin.

12.9 Germahiya reaksiyonê ya çêtirîn 25℃ e.Germahiya bilind an nizm dê bibe sedema guheztina nirxên hestiyar û vegirtinê.

13. Storage

Rewşa hilanînê: 2-8℃.

Dema hilanînê: 12 meh.