उत्पादन

Flumequine को मात्रात्मक विश्लेषण को लागी प्रतिस्पर्धी इन्जाइम इम्युनोसे किट

छोटो विवरण:

फ्लुमेक्वाइन क्विनोलोन एन्टिब्याक्टेरियलको सदस्य हो, जुन यसको व्यापक स्पेक्ट्रम, उच्च दक्षता, कम विषाक्तता र बलियो टिश्यु प्रवेशको लागि क्लिनिकल पशु चिकित्सा र जलीय उत्पादनहरूमा एक धेरै महत्त्वपूर्ण विरोधी संक्रामक रूपमा प्रयोग गरिन्छ।यो रोग उपचार, रोकथाम र वृद्धि प्रवर्द्धन को लागी पनि प्रयोग गरिन्छ।किनभने यसले औषधि प्रतिरोध र सम्भावित कार्सिनोजेनिसिटी निम्त्याउन सक्छ, जसको उच्च सीमा EU, जापानमा जनावरको तन्तु भित्र तोकिएको छ (उच्च सीमा EU मा 100ppb छ)।

वर्तमानमा, स्पेक्ट्रोफ्लोरोमिटर, ELISA र HPLC फ्लुमेक्वाइन अवशेष पत्ता लगाउने मुख्य विधिहरू हुन्, र ELISA उच्च संवेदनशीलता र सजिलो सञ्चालनको लागि एक नियमित विधि भएको छ।


उत्पादन विवरण

उत्पादन ट्यागहरू

परीक्षण सिद्धान्त

यो किट अप्रत्यक्ष-प्रतिस्पर्धी ELISA प्रविधिमा आधारित छ।माइक्रोटाइटर कुवाहरू युग्मन एन्टिजनको साथ लेपित छन्।फ्लुमेक्वाइननमूनामा रहेको अवशेषले एन्टिबडीका लागि माइक्रोटाइटर प्लेटमा राखिएको एन्टिजेनसँग प्रतिस्पर्धा गर्छ।एन्टिबडी लेबल गरिएको इन्जाइम थपेपछि, रंग देखाउन TMB सब्सट्रेट प्रयोग गरिन्छ।नमूनाको अवशोषण नकारात्मक रूपमा यसमा रहेको टेट्रासाइक्लिनसँग सम्बन्धित छ, मानक वक्रसँग तुलना गरेपछि, डिल्युसन मल्टिपलले गुणा गरेपछि, नमूनामा फ्लुमेक्वाइन अवशेषको मात्रा गणना गर्न सकिन्छ।

अनुप्रयोगहरू

यो किट महमा रहेको फ्लुमेक्वाइन अवशेषको मात्रात्मक र गुणात्मक विश्लेषणमा प्रयोग गर्न सकिन्छ।

क्रस-प्रतिक्रियाहरू

फ्लुमेक्वाइन ……………………………………………… 100%

 

आवश्यक सामग्री

उपकरणहरू

┅┅Microtiter प्लेट स्पेक्ट्रोफोटोमीटर (450nm/630nm)

┅┅होमोजेनाइजर वा पेटर

┅┅ शेकर

┅┅भोर्टेक्स मिक्सर

┅┅ सेन्ट्रीफ्यूज

┅┅ विश्लेषणात्मक सन्तुलन (प्रेरण: ०.०१ ग्राम)

┅┅स्नातक पिपेट: 15ml

┅┅रबर पिपेट बल्ब

┅┅Polystyrene सेन्ट्रीफ्यूज ट्यूब: 15ml, 50ml

┅┅ग्लास टेस्ट ट्यूब: 10ml

┅┅माइक्रोपिपेट्स: 20ml-200ml, 100ml -10000ml,

250 एमएल - मल्टिपिपेट

अभिकर्मकहरू

┅┅n-हेक्सेन (AR)

┅┅मिथाइलीन क्लोराइड (AR)

┅┅Acetonitrile (AR)

┅┅विआयनीकृत पानी

-----केन्द्रित हाइड्रोक्लोरिक एसिड (AR)

 

किट अवयवहरू

● एन्टिजेन लेपित 96 वेलहरू भएको माइक्रोटाइटर प्लेट

● मानक समाधान (6 बोतल × 1ml/बोतल)

0ppb, 0.3ppb, 1.2ppb, 4.8ppb, 19.2ppb, 76.8ppb

● उच्च एकाग्रता मानक नियन्त्रण: (1ml/बोतल)

………………………………………………………100ppb

● इन्जाइम कन्जुगेट १२ एमएल………………………... रातो टोपी

● एन्टिबडी समाधान 7 एमएल ……………………………………….. हरियो टोपी

● समाधान A 7ml………………………………………..सेतो टोपी

● समाधान B 7ml ……………………………………… रातो टोपी

● स्टप समाधान 7ml ……………………………… पहेंलो टोपी

● 20Xकेन्द्रित धुने समाधान 40ml

………………………………………………………पारदर्शी टोपी

●2X एक्स्ट्र्याक्शन सोल्युशन 50ml………………………… नीलो टोपी

 

अभिकर्मक तयारी

7.1 मह नमूना

समाधान १ : ०.२ एम हाइड्रोक्लोरिक एसिडको घोल

तौल ४१.५ एमएल कन्सेन्ट्रेटेड हाइड्रोक्लोरिक एसिड, डियोनाइज्ड पानीले ५०० एमएलमा पातलो गर्नुहोस्।

समाधान 2: समाधान धुनुहोस्

1:19 को भोल्युम अनुपातमा डियोनाइज्ड पानीको साथ केन्द्रित धुने समाधान पातलो गर्नुहोस्, जुन प्लेटहरू धुनका लागि प्रयोग गरिनेछ।पातलो समाधान 1 महिनाको लागि 4℃ मा भण्डारण गर्न सकिन्छ।

समाधान3: निकासी समाधान

1:1 (वा आवश्यकतामा निर्भर) को भोल्युम रासनमा डिआयोनाइज्ड पानीको साथ 2×केन्द्रित निकासी समाधान पातलो गर्नुहोस्, जुन नमूना निकासीको लागि प्रयोग गरिनेछ।यो पातलो घोल 1 महिनाको लागि 4 ℃ मा सुरक्षित गर्न सकिन्छ।

नमूना तयारीहरू

8.1 सञ्चालन गर्नु अघि प्रयोगकर्ताहरूको लागि सूचना र सावधानीहरू

(a) कृपया प्रयोगको प्रक्रियामा एक-अफ सुझावहरू प्रयोग गर्नुहोस्, र विभिन्न अभिकर्मकहरू अवशोषित गर्दा सुझावहरू परिवर्तन गर्नुहोस्।

(b) सुनिश्चित गर्नुहोस् कि सबै प्रयोगात्मक उपकरणहरू सफा छन्, अन्यथा यसले परख परिणामलाई असर गर्नेछ।

८.२मह नमूना

----- 2g±0.05g महको नमूना 50ml polystyrene सेन्ट्रीफ्यूज ट्यूबमा तौल गर्नुहोस्,

----- 2ml 0.2 M हाइड्रोक्लोरिक एसिड घोल (समाधान 1) थप्नुहोस्, यसलाई पूर्ण रूपमा मिलाउन भर्टेक्स, त्यसपछि 8ml मिथाइलिन क्लोराइड थप्नुहोस्, पूर्ण रूपमा भंग गर्न 5 मिनेटको लागि शेकरसँग हल्लाउनुहोस्;

----- १० मिनेटको लागि सेन्ट्रीफ्यूज, कम्तिमा ३००० ग्राम कोठाको तापक्रममा (२०-२५ डिग्री सेल्सियस);

-----सुपरनेटेन्ट चरण हटाउनुहोस्, 10 मिलीलीटर गिलास ट्यूबमा 2 मिली सब्सट्रेट अर्गानिक समाधान लिनुहोस्। नाइट्रोजन प्रवाह (50-60 डिग्री सेल्सियस) को पानी नुहाउने सबस्टेटलाई सुकाउनुहोस्।

-----1 ml n-hexane, 30s को लागि भोर्टेक्स थप्नुहोस्, त्यसपछि 1ml एक्स्ट्र्याक्सन समाधान (समाधान 3) थप्नुहोस्, 1 मिनेटको लागि फेरि भर्टेक्स गर्नुहोस्।5 मिनेटको लागि अपकेंद्रित्र, कम्तिमा 3000 ग्राम कोठाको तापक्रममा (20-25 ℃);

----- सुपरनेटेन्ट चरण हटाउनुहोस्, परखको लागि 50ml लिनुहोस्;

9. परख प्रक्रिया

9.1 परीक्षा अघि सूचना

9.1.1 सुनिश्चित गर्नुहोस् कि सबै अभिकर्मकहरू र माइक्रोवेलहरू सबै कोठाको तापक्रम (20-25 ℃) मा छन्।

9.1.2 सबै बाँकी अभिकर्मकहरू प्रयोग गरेपछि तुरुन्तै 2-8 ℃ मा फर्काउनुहोस्।

9.1.3 सही तरिकाले माइक्रोवेल धुनु परख को प्रक्रिया मा एक महत्वपूर्ण कदम हो;यो ELISA विश्लेषणको पुनरावृत्तिको लागि महत्त्वपूर्ण कारक हो।

9.1.4 इन्क्युबेशनको समयमा प्रकाशबाट बच्नुहोस् र माइक्रोवेलहरू छोप्नुहोस्।

9.2 परख चरणहरू

9.2.1 सबै अभिकर्मकहरू कोठाको तापक्रम (20-25 ℃) मा 30 मिनेट भन्दा बढीको लागि बाहिर निकाल्नुहोस्, प्रयोग गर्नु अघि एकरूपता बनाउनुहोस्।

9.2.2 आवश्यक माइक्रोवेलहरू बाहिर निकाल्नुहोस् र बाँकीलाई 2-8℃ मा तुरुन्तै जिप-लक झोलामा फर्काउनुहोस्।

9.2.3 पातलो धुने घोललाई प्रयोग गर्नु अघि कोठाको तापक्रममा पुन: वार्म गरिनुपर्छ।

९.२.४नम्बर:प्रत्येक माइक्रोवेल स्थिति नम्बर र सबै मापदण्ड र नमूनाहरू नक्कलमा चलाइनुपर्छ।मापदण्ड र नमूना स्थितिहरू रेकर्ड गर्नुहोस्।

९.२.५मानक समाधान/नमूना थप्नुहोस्:50 μl मानक समाधान वा तयार नमूना सम्बन्धित इनारहरूमा थप्नुहोस्।50μl एन्टिबडी समाधान थप्नुहोस्।प्लेटलाई हातले हल्लाएर बिस्तारै मिलाउनुहोस् र कभरको साथ 25 डिग्री सेल्सियसमा 30 मिनेटको लागि इन्क्युबेट गर्नुहोस्।

९.२.६धुनुहोस्:ढकनीलाई बिस्तारै हटाउनुहोस् र इनारबाट तरल पदार्थ शुद्ध गर्नुहोस् र 4-5 पटकको लागि 10 सेकेन्डको अन्तरालमा 250µl पातलो धुने समाधान (समाधान 2) ले माइक्रोवेलहरू कुल्ला गर्नुहोस्।अवशोषक कागजको साथ अवशिष्ट पानी अवशोषित गर्नुहोस् (बाँकी हावाको बबल प्रयोग नगरिएको टिपको साथ हटाउन सकिन्छ)।

९.२.८।इन्जाइम कन्जुगेट:प्रत्येक कुवामा १०० एमएल इन्जाइम कन्जुगेट समाधान थप्नुहोस्, प्लेटलाई हातले हल्लाएर बिस्तारै मिलाउनुहोस् र कभरको साथ 25 डिग्री सेल्सियसमा 30 मिनेटको लागि इन्क्युबेट गर्नुहोस्।पुन: धुने चरण दोहोर्याउनुहोस्।

९.२.८रंग:प्रत्येक इनारमा 50µl समाधान A र 50µl समाधान B थप्नुहोस्।प्लेटलाई हातले हल्लाएर बिस्तारै मिलाउनुहोस् र कभरसहित २५ डिग्री सेल्सियसमा १५ मिनेट इन्क्युबेट गर्नुहोस् (१२.८ हेर्नुहोस्)।

९.२.९मापन:प्रत्येक कुवामा 50µl स्टप समाधान थप्नुहोस्।प्लेटलाई म्यानुअल रूपमा हल्लाएर बिस्तारै मिलाउनुहोस् र एयर ब्ल्याक विरुद्ध 450nm मा अवशोषण मापन गर्नुहोस् (यसलाई 450/630nm को दोहोरो-तरंग लम्बाइको साथ मापन गर्न सुझाव दिइएको छ। स्टप समाधान थपेपछि 5 मिनेट भित्र नतिजा पढ्नुहोस्।) (हामी दृष्टिबाट पनि मापन गर्न सक्छौं। ELIASA उपकरणको छोटोमा रोक्ने समाधान बिना)

परिणामहरू

10.1 प्रतिशत अवशोषण

मानकहरू र नमूनाहरूका लागि प्राप्त गरिएको अवशोषण मानहरूको औसत मानहरूलाई पहिलो मानक (शून्य मानक) को अवशोषण मानले विभाजित गरी 100% ले गुणन गरिन्छ।यसरी शून्य मानकलाई १००% बराबर बनाइन्छ र अवशोषण मानहरू प्रतिशतमा उद्धृत गरिन्छ।

अवशोषण (%) = B/B0 × 100%

B ——अवशोषण मानक (वा नमूना)

B0 — शोषण शून्य मानक

10.2 मानक वक्र

मानक वक्र कोर्नका लागि: एक्स-अक्षको रूपमा फ्लुमेक्वाइन मानक समाधान (ppb) को एकाग्रताको y-axis को रूपमा मानकहरूको अवशोषण मान लिनुहोस्।

--- दफ्लुमेक्वाइनप्रत्येक नमूना (ppb) को एकाग्रता, जुन क्यालिब्रेसन कर्भबाट पढ्न सकिन्छ, प्रत्येक नमूनाको संगत कमजोरी मल्टिपलद्वारा गुणन गरिन्छ, र नमूनाको वास्तविक एकाग्रता प्राप्त हुन्छ।

ELISA किटहरूको डाटा घटाउनको लागि, विशेष सफ्टवेयर विकास गरिएको छ, जुन अनुरोधमा प्रदान गर्न सकिन्छ।

11. संवेदनशीलता, शुद्धता र परिशुद्धता

परीक्षण संवेदनशीलता:0.3ppb

मह नमूना कमजोरी कारक: 2

पत्ता लगाउने सीमा

मह नमूना -------------------------------------------------- -1ppb

शुद्धता

मह नमूना ---------------------------------------------------------- ९०±२० %

परिशुद्धता

ELISA किट को भिन्नता गुणांक 10% भन्दा कम छ।

12. सूचना

12.1 मापदण्ड र नमूनाहरूको लागि प्राप्त गरिएको अवशोषण मानहरूको औसत मान घटाइनेछ यदि अभिकर्मक र नमूनाहरू कोठाको तापक्रम (20-25 ℃) मा विनियमित गरिएको छैन भने।

12.2 असफल पुनरावृत्तिबाट बच्न र माइक्रोवेल होल्डरलाई ट्याप गरेपछि तुरुन्तै अर्को चरण सञ्चालन गर्न चरणहरू बीचमा माइक्रोवेलहरू सुक्न नदिनुहोस्।

१२.३।प्रयोग गर्नु अघि प्रत्येक अभिकर्मक एकरूप बनाउनुहोस्।

१२.४।तपाईंको छालालाई स्टप समाधानबाट टाढा राख्नुहोस् किनभने यो 2M H हो2SO4समाधान।

12.5 पुराना किटहरू प्रयोग नगर्नुहोस्।विभिन्न ब्याचका अभिकर्मकहरू साटासाट नगर्नुहोस्, किनकि यसले संवेदनशीलता घटाउनेछ।

१२.६ भण्डारण अवस्था:

ELISA किटहरू 2-8 ℃ मा राख्नुहोस्, फ्रिज नगर्नुहोस्।आराम माइक्रोवेल प्लेटहरू सील गर्नुहोस् सबै इन्क्युबेशनको समयमा सीधा सूर्यको किरणबाट बच्नुहोस्।माइक्रोटाइटर प्लेटहरू ढाक्न सिफारिस गरिन्छ।

12.7 नराम्रो हुने अभिकर्मकहरूको लागि संकेतहरू:

सब्सट्रेट समाधान त्यागिनुपर्छ यदि यसले रंग बदल्छ।

यदि शून्य मानकको अवशोषण मान (450/630nm) 0.5 (A450nm<0.5) भन्दा कम छ भने अभिकर्मकहरू खराब हुन सक्छन्।

12.8 समाधान A र समाधान B थपे पछि रङ प्रतिक्रियालाई 15 मिनेट चाहिन्छ। र यदि रंग निर्धारण गर्न धेरै हल्का छ भने तपाईले इन्क्युबेशन समयको दायरा 20 मिनेटबाट लम्ब्याउन सक्नुहुन्छ।25 मिनेट भन्दा बढी कहिल्यै नगर्नुहोस्, यसको विपरित, इन्क्युबेशन समय ठीकसँग छोटो पार्नुहोस्।

12.9 इष्टतम प्रतिक्रिया तापमान 25 ℃ हो।उच्च वा कम तापमानले संवेदनशीलता र अवशोषण मानहरूमा परिवर्तन ल्याउनेछ।

13. भण्डारण

भण्डारण अवस्था: 2-8 ℃।

भण्डारण अवधि: 12 महिना।


  • अघिल्लो:
  • अर्को:

  • यहाँ आफ्नो सन्देश लेख्नुहोस् र हामीलाई पठाउनुहोस्