produk

Prinsip Tes

Kit iki adhedhasar teknologi ELISA sing kompetitif ora langsung.Sumur mikrotiter dilapisi karo antigen kopling.Flumequineresidu ing sampel saingan karo antigen dilapisi ing piring microtiter kanggo antibodi.Sawise tambahan enzim sing dilabel anti-antibodi, substrat TMB digunakake kanggo nuduhake warna.Penyerapan sampel ana hubungane negatif karo tetracycline sing ana ing kono, sawise mbandhingake karo Kurva Standar, dikalikan karo pirang-pirang pengenceran, jumlah residu Flumequine ing sampel bisa diitung.

Aplikasi

Kit iki bisa digunakake ing analisis kuantitatif lan kualitatif saka residu flumequine ing madu.

Reaksi silang

Flumequine ………………………………………………… 100%

Bahan sing dibutuhake

prabotan

┅┅Microtiter plate spectrophotometer (450nm/630nm)

┅┅Homogenizer utawa weteng

┅┅Shaker

┅┅Vortex mixer

┅┅Centrifuge

┅┅Timbangan analitik (induktansi: 0,01g)

┅┅Pipet ukur : 15 ml

┅┅Lampu pipet karet

┅┅Polystyrene Centrifuge tabung: 15ml, 50ml

┅┅Tabung kaca: 10ml

┅┅Mikropipet: 20ml-200ml, 100ml -10000ml,

250 ml - multipipet

Reagen

┅┅n-heksana(AR)

┅┅Metilen klorida (AR)

┅┅Asetonitril (AR)

┅┅Banyu deionisasi

-----Asam klorida pekat (AR)

Komponen Kit

● Piring microtiter kanthi 96 sumur sing dilapisi antigen

● Solusi standar (6 botol×1ml/botol)

0ppb, 0.3ppb, 1.2ppb, 4.8ppb, 19.2ppb, 76.8ppb

● Kontrol standar konsentrasi dhuwur:(1ml/botol)

………………………………………………………100ppb

● Enzim konjugat 12ml……………………………… tutup abang

● Solusi antibodi 7ml …………………………………………….. tutup ijo

● Solusi A 7ml……………………………………….. tutup putih

● Solusi B 7ml …………………………………………………… tutup abang

● Stop solution 7ml …………………………………………………… tutup kuning

● 20XConcentrated wisuh solusi 40ml

………………………………………………………. tutup transparan

●2X Solusi ekstraksi 50ml…………………………… tutup biru

Preparation Reagen

7.1 Sampel madu

Solusi 1: 0,2 M larutan asam klorida

Bobot 41,5ml Asam klorida pekat, diencerke karo banyu deionisasi nganti 500 ml.

Solusi 2: Solusi ngumbah

Dilute solusi wisuh klempakan karo banyu deionized ing rasio volume 1:19, kang bakal digunakake kanggo ngumbah piring.solusi diencerke bisa disimpen ing 4 ℃ kanggo 1 sasi.

Solusi3: solusi extraction

Dilute 2 × solusi ekstraksi klempakan karo banyu deionized ing jatah volume 1: 1 (utawa gumantung ing requirement), kang bakal digunakake kanggo extraction sampel.Solusi sing diencerke iki bisa disimpen sajrone 1 wulan ing suhu 4 ℃.

Preparasi Sampel

8.1 Kabar lan pancegahan kanggo pangguna sadurunge operasi

(a) Gunakake tips siji-mati ing proses eksperimen, lan ngganti tips nalika nyerep reagen beda.

(b) Priksa manawa kabeh instrumen eksperimen resik, yen ora bakal nyebabake asil tes.

8.2Sampel madu

----- Timbang 2g ± 0.05g sampel madu menyang tabung centrifuge polystyrene 50ml,

-----Tambahake 2ml 0,2 M larutan asam klorida (Solusi 1), vortex kanggo nyampur kanthi lengkap, banjur tambahake 8ml metilen klorida, goyangake nganggo shaker nganti 5 menit nganti larut;

----- Centrifuge kanggo 10 min, paling 3000g ing suhu kamar (20-25 ℃);

----- Copot fase supernatant, njupuk 2 ml saka substrat solusi organik menyang 10 ml tabung kaca. garing substate ing banyu adus aliran Nitrogen (50-60 ℃)

-----Tambah 1 ml n-heksana,vortex kanggo 30s, banjur nambah 1ml solusi ekstraksi (solusi 3), vortex maneh kanggo 1min.Centrifuge kanggo 5min, paling 3000g ing suhu kamar (20-25 ℃);

----- Copot fase supernatant, njupuk 50ml kanggo assay;

9. Proses Pengujian

9.1 Kabar sadurunge tes

9.1.1 Priksa manawa kabeh reagen lan microwells kabeh ing suhu kamar (20-25 ℃).

9.1.2 Bali kabeh reagen liyane kanggo 2-8 ℃ sanalika sawise digunakake.

9.1.3 Ngumbah microwells kanthi bener minangka langkah penting ing proses tes;iku faktor penting kanggo repetitiveness saka analisis ELISA.

9.1.4 Nyingkiri cahya lan nutupi microwells nalika inkubasi.

9.2 Langkah-langkah Pengujian

9.2.1 Njupuk kabeh reagen metu ing suhu kamar (20-25 ℃) kanggo luwih saka 30min, homogenize sadurunge digunakake.

9.2.2 Entuk microwells sing dibutuhake lan bali liyane menyang tas zip-kunci ing 2-8 ℃ langsung.

9.2.3 Solusi cuci sing diencerake kudu dipanasake maneh ing suhu kamar sadurunge digunakake.

9.2.4nomer:Nomer saben posisi microwell lan kabeh standar lan conto kudu mbukak ing duplikat.Rekam standar lan posisi sampel.

9.2.5Tambah solusi standar / sampel:Tambah 50 µl larutan standar utawa sampel sing disiapake menyang sumur sing cocog.Tambah 50µl larutan antibodi.Nyampur alon-alon kanthi goyangake piring kanthi manual lan inkubasi nganti 30 menit ing 25 ℃ kanthi tutup.

9.2.6Wisuh:Copot tutup alon-alon lan resiki cairan metu saka sumur lan mbilas microwell kanthi larutan cuci 250µl (solusi 2) kanthi interval 10 detik kaping 4-5.Nyerep banyu sing isih ana nganggo kertas penyerap (sisa gelembung udara bisa diilangi nganggo tip sing ora digunakake).

9.2.8.Konjugasi enzim:Tambah solusi konjugasi enzim 100ml ing saben sumur, aduk alon-alon kanthi goyangake piring kanthi manual lan inkubasi 30 menit ing 25 ℃ kanthi tutup.Baleni maneh langkah wisuh.

9.2.8Werna:Tambahkan 50µl larutan A dan 50µl larutan B pada masing-masing sumuran.Nyampur alon-alon kanthi goyangake piring kanthi manual lan inkubasi nganti 15 menit ing 25 ℃ kanthi tutup (pirsani 12.8).

9.2.9ukuran:Tambahkan 50µl stop solution pada masing-masing sumuran.Nyampur alon-alon kanthi goyangake piring kanthi manual lan ngukur absorbansi ing 450nm marang kothong udhara (Disaranake ukuran kanthi dawa gelombang dual 450 / 630nm. Waca asil ing 5min sawise nambah solusi mandeg. ) (Kita uga bisa ngukur kanthi ndeleng. tanpa solusi stop ing cendhak instrumen ELIASA)

Asil

10.1 Penyerapan persentasi

Nilai rata-rata saka nilai absorbansi sing dipikolehi kanggo standar lan sampel dibagi karo nilai absorbansi standar pisanan (standar nol) lan dikali 100%.Standar nol digawe padha karo 100% lan nilai absorbansi dipetik ing persentase.

Penyerapan (%) = B/B0 × 100%

B ——standar panyerepan (utawa sampel)

B0 ——standar nol penyerapan

10.2 Kurva Standar

Kanggo nggambar kurva standar: Njupuk nilai absorbansi standar minangka sumbu y, semi logaritma saka konsentrasi larutan standar flumequine (ppb) minangka sumbu x.

--- IngflumequineKonsentrasi saben sampel (ppb), sing bisa diwaca saka kurva kalibrasi, dikalikan karo pirang-pirang pengenceran sing cocog saka saben sampel sing diterusake, lan konsentrasi sampel sing nyata ditampa.

Kanggo nyuda data kit ELISA, piranti lunak khusus wis dikembangake, sing bisa diwenehake kanthi panyuwunan.

11. Sensitivitas, akurasi lan presisi

Tes Sensitivitas:0,3 pb

Faktor pengenceran sampel madu: 2

watesan deteksi

Sampel madu ------------------------------------------------ -1 pb

Akurasi

Sampel madu --------------------------------------------------- 90±20 %

Precision

Koefisien variasi kit ELISA kurang saka 10%.

12. Wara-wara

12.1 Nilai rata-rata saka nilai absorbansi sing dipikolehi kanggo standar lan conto bakal suda yen reagen lan conto durung diatur ing suhu kamar (20-25 ℃).

12.2 Aja ngidini microwells garing ing antarane langkah-langkah kanggo ngindhari repetitiveness ora kasil lan operate langkah sabanjure sanalika sawise nutul wadhah microwells.

12.3.Homogenize saben reagen sadurunge nggunakake.

12.4.Supaya kulit adoh saka solusi stop kanggo iku 2M H₂SO₄solusi.

12.5 Aja nggunakake kits out of date.Aja ngganti reagen saka macem-macem kelompok, amarga bakal nyuda sensitivitas.

12.6 Kondisi panyimpenan:

Simpen kit ELISA ing 2-8 ℃, aja beku.Segel piring microwell liyane Aja sinar srengenge langsung sajrone kabeh inkubasi.Nutupi piring microtiter dianjurake.

12.7 Indikasi kanggo reagen dadi ala:

Solusi substrat kudu ditinggalake yen dadi warna.

Reagen bisa dadi ala yen nilai absorbansi (450/630nm) saka standar nol kurang saka 0,5 (A450nm <0,5).

12.8 Reaksi pewarnaan mbutuhake 15min sawise nambahake Solusi A lan Solusi B. Lan sampeyan bisa ndawakake wektu inkubasi saka 20min nganti luwih yen werna banget entheng kanggo ditemtokake.Aja ngluwihi 25min, Kosok baline, nyepetake wektu inkubasi kanthi bener.

12.9 Suhu reaksi optimal yaiku 25 ℃.Suhu sing luwih dhuwur utawa luwih murah bakal nyebabake owah-owahan sensitivitas lan nilai absorbansi.

13. Panyimpenan

Kondisi panyimpenan: 2-8 ℃.

Periode panyimpenan: 12 sasi.