ürün

Flumequine'in Kantitatif analizi için Rekabetçi Enzim İmmünoassay Kiti

Kısa Açıklama:

Flumequine, geniş spektrumu, yüksek etkinliği, düşük toksisitesi ve güçlü doku penetrasyonu nedeniyle klinik veterinerlik ve su ürünlerinde çok önemli bir anti-enfektif olarak kullanılan kinolon antibakteriyelin bir üyesidir.Ayrıca hastalık tedavisi, önleme ve büyüme teşviki için kullanılır.İlaç direncine ve potansiyel kanserojenliğe yol açabileceğinden, hayvan dokusu içindeki en yüksek sınırı AB, Japonya'da öngörülmüştür (AB'de en yüksek sınır 100 ppb'dir).

Şu anda, spektroflorometre, ELISA ve HPLC, flumekin kalıntısını saptamak için ana yöntemlerdir ve ELISA, yüksek hassasiyet ve kolay kullanım için rutin bir yöntem olmuştur.


Ürün ayrıntısı

Ürün etiketleri

Test Prensibi

Bu kit, dolaylı rekabetçi ELISA teknolojisine dayanmaktadır.Mikrotiter oyukları, birleştirme antijeni ile kaplanır.Flumekinnumunedeki kalıntı, antikor için mikrotitre plakası üzerinde kaplanmış antijen ile rekabet eder.Enzim işaretli anti-antikor eklendikten sonra, rengi göstermek için TMB substratı kullanılır.Numunenin absorbansı, içinde bulunan tetrasiklin ile negatif ilişkilidir, Standart Eğri ile karşılaştırılarak dilüsyon çarpanı ile çarpıldıktan sonra, numunedeki Flumequine kalıntı miktarı hesaplanabilir.

Uygulamalar

Bu kit baldaki flumekin kalıntısının kantitatif ve kalitatif analizinde kullanılabilir.

çapraz reaksiyonlar

Flumekin …………………..……………………… %100

 

Gerekli malzemeler

Ekipmanlar

┅┅Mikrotiter plaka spektrofotometresi (450nm/630nm)

┅┅Homojenleştirici veya mide açıcı

┅┅Çalkalayıcı

┅┅Vorteks karıştırıcı

┅┅Santrifüj

┅┅Analitik terazi (endüktans: 0,01g)

┅┅Dereceli pipet: 15ml

┅┅Kauçuk pipet ampulü

┅┅Polistiren Santrifüj tüpü: 15ml, 50ml

┅┅Cam test tüpü:10ml

┅┅Mikropipetler: 20ml-200ml, 100ml -10000ml,

250ml -çoklu pipet

reaktifler

┅┅n-heksan(AR)

┅┅Metilen klorür(AR)

┅┅Asetonitril(AR)

┅┅Deiyonize su

-----Konsantre hidroklorik asit(AR)

 

Kit Bileşenleri

● Antijenle kaplanmış 96 kuyucuklu mikrotitre plakası

● Standart çözümler (6 şişe×1 ml/şişe)

0ppb, 0,3ppb, 1,2ppb, 4,8ppb, 19,2ppb, 76,8ppb

● Yüksek konsantrasyonlu standart kontrol:(1 ml/şişe)

………………………………………………………100ppb

● Enzim konjugatı 12ml……………………... kırmızı kapak

● Antikor solüsyonu 7ml …………..……..….…..yeşil kapak

● Çözüm A 7ml……..………………..…………..beyaz kapak

● Çözelti B 7ml ………….…………..………… kırmızı kapak

● Durdurma solüsyonu 7ml ……………………..………sarı kapak

● 20XKonsantre yıkama solüsyonu 40ml

……………………………………..…..şeffaf kapak

●2X Ekstraksiyon solüsyonu 50ml………………...… mavi kapak

 

Reaktiflerin Hazırlanması

7.1 Bal örneği

Çözüm 1 : 0,2 M Hidroklorik asit çözeltisi

Ağırlık 41,5 ml Konsantre hidroklorik asit, deiyonize su ile 500 ml'ye seyreltin.

2. Çözüm: Yıkama solüsyonu

Konsantre yıkama solüsyonunu, plakaları yıkamak için kullanılacak olan 1:19 hacim oranında deiyonize suyla seyreltin.seyreltilmiş solüsyon 4°C'de 1 ay saklanabilir.

Çözüm3: ekstraksiyon çözümü

2xkonsantre ekstraksiyon solüsyonunu, numune ekstraksiyonu için kullanılacak olan 1:1 hacim oranında (veya ihtiyaca göre) deiyonize suyla seyreltin.Bu seyreltilmiş solüsyon 4°C'de 1 ay saklanabilir.

Numune Hazırlamalar

8.1 Çalıştırmadan önce kullanıcılar için uyarı ve önlemler

(a) Lütfen deney sürecinde tek seferlik ipuçları kullanın ve farklı reaktifleri emdiğinizde uçları değiştirin.

(b) Tüm deney aletlerinin temiz olduğundan emin olun, aksi halde tahlil sonucunu etkileyecektir.

8.2Bal örneği

-----2g±0.05g bal örneğini 50ml polistiren santrifüj tüpüne tartın,

-----2 ml 0,2 M Hidroklorik asit solüsyonu (Çözelti 1) ekleyin, tamamen karıştırmak için vorteksleyin, ardından 8 ml metilen klorür ekleyin, tamamen çözünmesi için çalkalayıcı ile 5 dakika çalkalayın;

-----10 dakika santrifüjleyin, en az 3000g oda sıcaklığında (20-25°C);

-----Yüzer fazı çıkarın, 2 ml substrat organik solüsyonunu 10 ml'lik bir cam tüpe alın. Substatı Nitrojen akışının (50-60 ℃) su banyosu altında kurutun

-----1 ml n-hekzan ekleyin, 30 sn vorteksleyin, ardından 1 ml ekstraksiyon solüsyonu (çözelti 3) ekleyin, 1 dakika tekrar vorteksleyin.Oda sıcaklığında (20-25°C) en az 3000g olmak üzere 5 dakika santrifüjleyin;

-----Yüzer fazı çıkarın, tahlil için 50 ml alın;

9. Tahlil süreci

9.1 Testten önce uyarı

9.1.1 Tüm reaktiflerin ve mikrokuyuların oda sıcaklığında (20-25°C) olduğundan emin olun.

9.1.2 Geri kalan tüm reaktifleri kullanıldıktan hemen sonra 2-8°C'ye getirin.

9.1.3 Mikrokuyuların doğru şekilde yıkanması, tahlil sürecinde önemli bir adımdır;ELISA analizinin tekrarlanabilirliği için hayati bir faktördür.

9.1.4 Işıktan kaçının ve inkübasyon sırasında mikrokuyucukları kapatın.

9.2 Tahlil Adımları

9.2.1 Tüm reaktifleri oda sıcaklığında (20-25°C) 30 dakikadan fazla çıkarın, kullanmadan önce homojenleştirin.

9.2.2 Gerekli mikrokuyucukları çıkarın ve geri kalanını hemen 2-8°C'de fermuarlı poşete koyun.

9.2.3 Seyreltilmiş yıkama solüsyonu kullanımdan önce oda sıcaklığına gelmesi için yeniden ısıtılmalıdır.

9.2.4Sayı:Her mikrokuyu konumunu numaralandırın ve tüm standartlar ve numuneler iki kopya halinde çalışılmalıdır.Standartları ve numune konumlarını kaydedin.

9.2.5Standart solüsyon/örnek ekleyin:Karşılık gelen kuyucuklara 50 µl standart solüsyon veya hazırlanmış numune ekleyin.50ul antikor solüsyonu ekleyin.Plakayı elle sallayarak hafifçe karıştırın ve 30 dakika 25°C'de kapakla inkübe edin.

9.2.6Yıkamak:Kapağı nazikçe çıkarın ve kuyulardaki sıvıyı saflaştırın ve mikrokuyuları 250µl seyreltilmiş yıkama solüsyonu (çözelti 2) ile 10 saniye aralıklarla 4-5 kez durulayın.Artık suyu emici kağıtla emdirin (kalan hava kabarcığı kullanılmayan uç ile giderilebilir).

9.2.8.Enzim konjugatı:Her kuyucuğa 100 ml enzim konjugat solüsyonu ekleyin, plakayı elle sallayarak hafifçe karıştırın ve 25°C'de kapakla 30 dakika inkübe edin.Yıkama adımını tekrar tekrarlayın.

9.2.8renklendirme:Her kuyucuğa 50µl solüsyon A ve 50µl solüsyon B ekleyin.Plakayı elle sallayarak hafifçe karıştırın ve 25°C'de kapakla birlikte 15 dakika inkübe edin (bkz. 12.8).

9.2.9Ölçüm:Her kuyucuğa 50µl stop solüsyonu ekleyin.Plakayı manuel olarak çalkalayarak hafifçe karıştırın ve bir hava körüne karşı 450nm'de absorbansı ölçün (450/630nm'lik çift dalga boyu ile ölçüm önerilir. Durdurma solüsyonu eklendikten sonra 5 dakika içinde sonucu okuyun.) (Görerek de ölçebiliriz. ELIASA cihazının dışında kesintisiz çözüm)

Sonuçlar

10.1 Yüzde absorbans

Standartlar ve numuneler için elde edilen absorbans değerlerinin ortalama değerleri birinci standardın (sıfır standart) absorbans değerine bölünerek %100 ile çarpılır.Böylece sıfır standardı %100'e eşit yapılır ve soğurma değerleri yüzde olarak belirtilir.

Absorbans (%) = B/B0 ×%100

B ——absorbans standardı (veya numune)

B0 ——absorbans sıfır standardı

10.2 Standart Eğri

Standart bir eğri çizmek için: Standartların absorbans değerini y ekseni olarak, flumequine standartları çözeltisinin (ppb) konsantrasyonunun yarı logaritmik değerini x ekseni olarak alın.

---flumekinKalibrasyon eğrisinden okunabilen her numunenin konsantrasyonu (ppb), takip edilen her numunenin karşılık gelen seyreltme katıyla çarpılır ve numunenin gerçek konsantrasyonu elde edilir.

ELISA kitlerinin veri indirgemesi için istek üzerine temin edilebilecek özel yazılımlar geliştirilmiştir.

11. Hassasiyet, doğruluk ve kesinlik

Test Hassasiyeti0.3ppb

Bal Numune seyreltme faktörü: 2

Algılama sınırı

Bal örneği------------------------------------------------ -1ppb

Kesinlik

Bal numunesi --------------------------------------------- 90±20 %

Hassas

ELISA kitinin varyasyon katsayısı %10'dan azdır.

12. Bildirim

12.1 Standartlar ve numuneler için elde edilen absorbans değerlerinin ortalama değerleri, reaktifler ve numuneler oda sıcaklığına (20-25°C) ayarlanmamışsa düşecektir.

12.2 Başarısız tekrarlardan kaçınmak için mikrokuyuların adımlar arasında kurumasına izin vermeyin ve mikrokuyu tutucuya dokunduktan hemen sonra bir sonraki adımı çalıştırın.

12.3.Kullanmadan önce her reaktifi homojenize edin.

12.4.2M H ​​olduğu için cildinizi stop solüsyonundan uzak tutunuz.2SO4çözüm.

12.5 Son kullanma tarihi geçmiş kitleri kullanmayın.Hassasiyeti düşüreceği için farklı serilerin reaktiflerini değiştirmeyin.

12.6 Saklama koşulu:

ELISA kitlerini 2-8°C'de tutun, dondurmayın.Kalan mikrokuyu plakaları kapatın Tüm inkübasyonlar sırasında düz güneş ışığından kaçının.Mikrotitre plakalarının kaplanması tavsiye edilir.

12.7 Kötü giden reaktifler için endikasyonlar:

Substrat solüsyonu renk değiştirirse bırakılmalıdır.

Sıfır standardının absorbans değeri (450/630nm) 0,5'ten (A450nm<0,5) küçükse reaktifler bozulabilir.

12.8 Renklenme reaksiyonu, Solüsyon A ve Solüsyon B eklendikten sonra 15 dakikaya ihtiyaç duyar. Ve renk belirlenemeyecek kadar açıksa inkübasyon süresi aralıklarını 20 dakikadan daha fazla uzatabilirsiniz.Asla 25 dakikayı geçmeyin, aksine inkübasyon süresini uygun şekilde kısaltın.

12.9 Optimum reaksiyon sıcaklığı 25°C'dir.Daha yüksek veya daha düşük sıcaklık, hassasiyet ve absorbans değerlerinin değişmesine yol açacaktır.

13. Depolama

Saklama koşulu: 2-8°C.

Saklama süresi: 12 ay.


  • Öncesi:
  • Sonraki:

  • Mesajınızı buraya yazın ve bize gönderin.