bidhaa

Kanuni ya Mtihani

Seti hii inategemea teknolojia isiyo ya moja kwa moja ya ELISA.Visima vya microtiter vimefungwa na antijeni ya kuunganisha.Flumequinemabaki katika sampuli hushindana na antijeni iliyopakwa kwenye bati ndogo ya kingamwili.Baada ya kuongezwa kwa kimeng'enya kilichoitwa anti-antibody, substrate ya TMB hutumiwa kuonyesha rangi.Kutokuwepo kwa sampuli kunahusiana vibaya na tetracycline inayokaa ndani yake, baada ya kulinganisha na Curve Standard, ikizidishwa na dilution nyingi, kiasi cha mabaki ya Flumequine katika sampuli kinaweza kuhesabiwa.

Maombi

Seti hii inaweza kutumika katika uchanganuzi wa kiasi na ubora wa mabaki ya flumequine kwenye asali.

Miitikio mtambuka

Flumequine ………………………………………………… 100%

Nyenzo Zinazohitajika

Vifaa

┅┅Kipima spectrophotometer ya sahani ndogo (450nm/630nm)

┅┅Homogenizer au tumbo

┅┅Shaker

┅┅ Kichanganyaji cha Vortex

┅┅Centrifuge

┅┅Salio la uchanganuzi (uingizaji: 0.01g)

┅┅Pipette iliyohitimu: 15ml

┅┅Balbu ya bomba la mpira

┅┅Polystyrene Centrifuge tube: 15ml, 50ml

┅┅Tube ya majaribio ya glasi:10ml

┅┅Milopi ndogo: 20ml-200ml, 100ml -10000ml,

250ml -multipipette

Vitendanishi

┅┅n-hexane(AR)

┅┅Kloridi ya methylene(AR)

┅┅Acetonitrile(AR)

┅┅Maji yaliyotolewa

-----Asidi hidrokloriki iliyokolea(AR)

Vipengele vya Kit

● Sahani ya microtiter yenye visima 96 vilivyopakwa antijeni

● Suluhu za kawaida(chupa 6×1ml/chupa)

0ppb, 0.3ppb, 1.2ppb, 4.8ppb, 19.2ppb, 76.8ppb

● Udhibiti wa kiwango cha juu cha mkusanyiko:(1ml/chupa)

……………………………………………………….100ppb

● Enzyme conjugate 12ml………………………………………………………

● Suluhisho la kingamwili 7ml …………..……..….…..kofia ya kijani kibichi

● Suluhisho A 7ml……..……………………..………..kofia nyeupe

● Suluhisho B 7ml …………….……………..………… kofia nyekundu

● Suluhisho la 7ml ……………………..……… kofia ya manjano

● Suluhisho la kuosha 20XKuzingatia 40ml

…………………………………………..…..kifuniko cha uwazi

●2X Extraction solution 50ml……………………… kofia ya bluu

Maandalizi ya Vitendanishi

7.1 Sampuli ya asali

Suluhisho la 1: 0.2 M Suluhisho la asidi hidrokloriki

Uzito 41.5ml Asidi hidrokloriki iliyokolea , punguza na maji yaliyotumiwa hadi 500 ml.

Suluhisho la 2: Suluhisho la kuosha

Punguza suluhisho la kuosha lililokolea na maji yaliyotengwa kwa uwiano wa 1:19, ambayo itatumika kuosha sahani.suluhisho la diluted linaweza kuhifadhiwa kwa 4 ℃ kwa mwezi 1.

Suluhisho3: suluhisho la uchimbaji

Punguza suluhisho la 2 × kujilimbikizia uchimbaji na maji yaliyotolewa katika mgao wa ujazo wa 1: 1 (au tegemea mahitaji), ambayo itatumika kwa uchimbaji wa sampuli.Suluhisho hili la diluted linaweza kuhifadhiwa kwa mwezi 1 kwa 4 ℃.

Maandalizi ya Mfano

8.1 Ilani na tahadhari kwa watumiaji kabla ya operesheni

(a) Tafadhali tumia vidokezo vya mara moja katika mchakato wa majaribio, na ubadilishe vidokezo unapochukua kitendanishi tofauti.

(b) Hakikisha kuwa zana zote za majaribio ni safi, vinginevyo itaathiri matokeo ya majaribio.

8.2Sampuli ya asali

-----Pima sampuli ya asali ya 2g±0.05g kwenye bomba la polystyrene centrifuge la 50ml,

-----Ongeza 2ml 0.2 M myeyusho wa asidi hidrokloriki (Suluhisho la 1), vortex ili uchanganye kabisa, kisha ongeza kloridi ya methylene 8ml, tikisa na shaker kwa dakika 5 ili kuyeyuka kabisa;

-----Centrifuge kwa dakika 10, angalau 3000g kwenye joto la kawaida (20-25℃);

-----Ondoa awamu ya ajabu, chukua 2 ml ya myeyusho wa kikaboni wa substrate kwenye tube ya kioo ya mililita 10. kausha hali ndogo chini ya umwagaji wa maji kwa mtiririko wa nitrojeni ( 50-60 ℃)

-----Ongeza 1 ml n-hexane,vortex kwa 30s, kisha kuongeza 1ml uchimbaji ufumbuzi (suluhisho 3) ,vortex tena kwa 1min.Centrifuge kwa dakika 5, angalau 3000g kwa joto la kawaida (20-25 ℃);

-----Ondoa awamu ya ajabu, chukua 50ml kwa majaribio;

9. Mchakato wa upimaji

9.1 Taarifa kabla ya majaribio

9.1.1 Hakikisha vitendanishi na chembe ndogo zote ziko kwenye joto la kawaida (20-25℃).

9.1.2 Rejesha vitendanishi vyote vilivyosalia hadi 2-8℃ mara tu baada ya kutumika.

9.1.3 Kuosha microwells kwa usahihi ni hatua muhimu katika mchakato wa kupima;ni jambo muhimu kwa kurudia kwa uchambuzi wa ELISA.

9.1.4 Epuka mwanga na funika visima vidogo wakati wa incubation.

9.2 Hatua za Upimaji

9.2.1 Ondoa vitendanishi vyote kwenye joto la kawaida (20-25℃) kwa zaidi ya dakika 30, homogenize kabla ya matumizi.

9.2.2 Toa visima vidogo vinavyohitajika na urudishe vingine kwenye mfuko wa kufunga zipu saa 2-8℃ mara moja.

9.2.3 Suluhisho la safisha la diluted linapaswa kuwashwa tena ili liwe kwenye joto la kawaida kabla ya matumizi.

9.2.4Nambari:Weka nambari kila nafasi ya visima na viwango vyote na sampuli zinapaswa kuendeshwa kwa nakala.Rekodi viwango na nafasi za sampuli.

9.2.5Ongeza suluhisho/sampuli ya kawaida:Ongeza 50 µl ya myeyusho wa kawaida au sampuli iliyotayarishwa kwa visima sambamba.Ongeza suluhisho la kingamwili la 50µl.Changanya kwa upole kwa kutikisa sahani mwenyewe na uangulie kwa dakika 30 kwa joto la 25℃ na kifuniko.

9.2.6Osha:Ondoa kifuniko kwa upole na safi kioevu kutoka kwenye visima na suuza microwells kwa 250µl ya suluhisho la kuosha (suluhisho la 2) kwa muda wa 10 kwa mara 4-5.Nywa maji yaliyobaki kwa karatasi ya kunyonya (puto la hewa lililobaki linaweza kuondolewa kwa ncha isiyotumika).

9.2.8.Mchanganyiko wa enzyme:Ongeza myeyusho wa enzyme ya 100ml kwa kila kisima, Changanya kwa upole kwa kutikisa sahani mwenyewe na uangulie kwa dakika 30 kwa 25℃ na kifuniko.Kurudia hatua ya kuosha tena.

9.2.8Upakaji rangi:Ongeza suluhisho la 50µl A na 50µl suluhisho B kwa kila kisima.Changanya kwa upole kwa kutikisa sahani kwa mikono na uangulie kwa dakika 15 kwa joto la 25℃ na kifuniko (tazama 12.8).

9.2.9Pima:Ongeza 50µl suluhisho la kuacha kwa kila kisima.Changanya kwa upole kwa kutikisa sahani mwenyewe na upime uwezo wa kunyonya kwa 450nm dhidi ya tupu ya hewa (Inapendekezwa kipimo chenye urefu wa mawimbi mawili ya 450/630nm. Soma matokeo ndani ya dakika 5 baada ya kuongezwa kwa suluhisho la kusimamisha. ) (Pia tunaweza kupima kwa kuona. bila suluhisho la kuacha kwa ufupi wa chombo cha ELIASA)

Matokeo

10.1 Asilimia ya kunyonya

Thamani za wastani za viwango vya kunyonya zilizopatikana kwa viwango na sampuli zimegawanywa na thamani ya kunyonya ya kiwango cha kwanza (kiwango cha sifuri) na kuzidishwa kwa 100%.Kwa hivyo, kiwango cha sifuri kinafanywa kuwa sawa na 100% na viwango vya kunyonya vimenukuliwa kwa asilimia.

Ukosefu (%) = B/B0 × 100%

B - kiwango cha kutokuwepo (au sampuli)

B0 --kupoteza kiwango cha sifuri

10.2 Mjiko wa Kawaida

Ili kuchora mduara wa kawaida: Chukua thamani ya ufyonzaji wa viwango kama mhimili y, nusu logarithmic ya mkusanyiko wa viwango vya flumequine (ppb) kama mhimili wa x.

--- Theflumequinemkusanyiko wa kila sampuli (ppb), ambayo inaweza kusomwa kutoka kwa curve ya urekebishaji, inazidishwa na kizidishio sambamba cha kila sampuli inayofuatwa, na mkusanyiko halisi wa sampuli hupatikana.

Kwa upunguzaji wa data wa vifaa vya ELISA, programu maalum imetengenezwa, ambayo inaweza kutolewa kwa ombi.

11. Usikivu, usahihi na usahihi

Unyeti wa Mtihani:0.3ppb

Sampuli ya kipenyo cha asali: 2

Kikomo cha utambuzi

Sampuli ya asali--------------------------------------------- -1ppb

Usahihi

Sampuli ya asali ------------------------------------------- 90±20 %

Usahihi

Mgawo wa tofauti wa kit ELISA ni chini ya 10%.

12. Taarifa

12.1 Thamani za wastani za viwango vya kunyonya vilivyopatikana kwa viwango na sampuli zitapunguzwa ikiwa vitendanishi na sampuli hazijadhibitiwa kwa joto la kawaida (20-25℃).

12.2 Usiruhusu visima vidogo kukauka kati ya hatua ili kuepuka kujirudia-rudia bila mafanikio na endesha hatua inayofuata mara baada ya kugonga kishikilia visima vidogo.

12.3.Homogenize kila reagent kabla ya kutumia.

12.4.Weka ngozi yako mbali na suluhisho la kuacha kwa kuwa ni 2M H₂SO₄suluhisho.

12.5 Usitumie vifaa vilivyopitwa na wakati.Usibadilishane vitendanishi vya batches tofauti, kwa maana itapunguza unyeti.

12.6 Hali ya uhifadhi:

Weka vifaa vya ELISA kwa 2-8℃, usigandishe.Ziba sahani ndogo ndogo za kupumzika Epuka jua moja kwa moja wakati wa incubations zote.Inashauriwa kufunika sahani za microtiter.

12.7 Dalili za vitendanishi kwenda vibaya:

Suluhisho la substrate linapaswa kuachwa ikiwa linageuka rangi.

Vitendanishi vinaweza kuwa vibaya ikiwa thamani ya kunyonya (450/630nm) ya kiwango cha sifuri ni chini ya 0.5 (A450nm＜0.5).

12.8 Mwitikio wa upakaji rangi unahitaji dakika 15 baada ya kuongeza Suluhisho A na Suluhisho B. Na unaweza kurefusha muda wa kuangua kutoka dakika 20 hadi zaidi ikiwa rangi ni nyepesi mno kubainishwa.Kamwe usizidi 25min, Kinyume chake, fupisha muda wa incubation vizuri.

12.9 Joto bora la mmenyuko ni 25℃.Joto la juu au la chini litasababisha mabadiliko ya unyeti na maadili ya kunyonya.

13. Hifadhi

Hali ya uhifadhi: 2-8 ℃.

Muda wa kuhifadhi: miezi 12.