бүтээгдэхүүн

Туршилтын зарчим

Энэхүү хэрэгсэл нь шууд бус өрсөлдөх чадвартай ELISA технологи дээр суурилдаг.Микротитерийн цооногууд нь холбох антигенээр бүрсэн байна.Флюмекиндээж дэх үлдэгдэл нь эсрэгбиеийн микротитр хавтан дээр бүрсэн эсрэгтөрөгчтэй өрсөлддөг.Эсрэгбиеийн эсрэг шошготой ферментийг нэмсний дараа TMB субстратыг өнгийг харуулахад ашигладаг.Дээжний шингээлт нь түүний доторх тетрациклиний агууламжтай сөрөг хамааралтай бөгөөд стандарт муруйг шингэрүүлэлтийн үржвэрээр үржүүлсний дараа дээж дэх флюмекиний үлдэгдлийн хэмжээг тооцоолж болно.

Хэрэглээ

Энэхүү иж бүрдлийг зөгийн бал дахь флумекиний үлдэгдлийг тоон болон чанарын шинжилгээнд ашиглаж болно.

Хөндлөнгийн урвал

Flumequine ……………………………………………… 100%

Шаардлагатай материал

Тоног төхөөрөмж

┅┅Микротитр хавтангийн спектрофотометр (450нм/630нм)

┅┅Гомогенжүүлэгч эсвэл ходоод

┅┅ Шейкер

┅┅Vortex холигч

┅┅Центрифуг

┅┅Аналитик баланс (индукц: 0.01г)

┅┅Төгссөн пипетк: 15мл

┅┅Ризин пипеткийн чийдэн

┅┅Полистирол центрифугийн хоолой: 15мл, 50мл

┅┅Шилэн туршилтын хоолой: 10мл

┅┅Микропипетк: 20мл-200мл, 100мл -10000мл,

250 мл - олон талт

Урвалжууд

┅┅n-гексан(AR)

┅┅Метилен хлорид(AR)

┅┅Ацетонитрил(AR)

┅┅Ионгүйжүүлсэн ус

----- Төвлөрсөн давсны хүчил (AR)

Иж бүрдэл хэсгүүд

● Антигенээр бүрсэн 96 цооног бүхий микротитр хавтан

● Стандарт уусмал (6 шил×1мл/шил)

0ppb, 0.3ppb, 1.2ppb, 4.8ppb, 19.2ppb, 76.8ppb

● Өндөр концентрацитай стандарт хяналт:(1мл/шил)

……………………………………………………100ppb

● Ферментийн коньюгат 12мл……………………… улаан малгай

● Эсрэгбиеийн уусмал 7мл …………..……..….…..ногоон малгай

● Уусмал А 7мл……………………………………..цагаан малгай

● Б уусмал 7мл …………….…………..………… улаан малгай

● Зогсоох уусмал 7мл ……………………………………шар малгай

● 20XБаяжуулсан угаалгын уусмал 40мл

……………………………………………..ил тод малгай

●2X Экстракцийн уусмал 50мл…………………… цэнхэр таг

Урвалж бэлтгэх

7.1 Зөгийн балны дээж

Уусмал 1: 0.2 М давсны хүчлийн уусмал

Жин 41.5 мл Төвлөрсөн давсны хүчил, ионгүйжүүлсэн усаар 500 мл хүртэл шингэлнэ.

Шийдэл 2: Угаах уусмал

Баяжуулсан угаалгын уусмалыг ионгүйжүүлсэн усаар 1:19 харьцаатай усаар шингэлнэ, энэ нь хавтанг угаахад хэрэглэгдэх болно.шингэрүүлсэн уусмалыг 4 хэмд 1 сар хадгалах боломжтой.

Шийдэл3: олборлох уусмал

2× концентрацитай экстракцийн уусмалыг ионгүйжүүлсэн усаар 1:1 харьцаатай (эсвэл хэрэгцээнээс хамаарч) шингэлнэ.Энэхүү шингэрүүлсэн уусмалыг 4 хэмд 1 сарын турш хадгалах боломжтой.

Бэлтгэл дээж

8.1 Ашиглалтын өмнө хэрэглэгчдэд зориулсан анхааруулга, урьдчилан сэргийлэх арга хэмжээ

(a) Туршилтын явцад нэг удаагийн зөвлөмжийг ашиглаж, өөр урвалж шингээх үед зөвлөмжийг өөрчилнө үү.

(б) Туршилтын бүх хэрэгсэл цэвэр байгаа эсэхийг шалгаарай, эс тэгвээс шинжилгээний үр дүнд нөлөөлнө.

8.2Зөгийн балны дээж

----- 2г ± 0.05 г зөгийн балны дээжийг 50 мл полистирол центрифугийн хоолойд жинлэнэ.

-----2мл 0.2м давсны хүчлийн уусмал (1-р уусмал) нэмээд эргүүлж бүрэн холиод дараа нь 8мл метилен хлорид нэмээд сэгсрэгчээр 5 минут сэгсэрч бүрэн уусгана;

----- Центрифуг 10 минут, тасалгааны температурт (20-25 ℃) дор хаяж 3000 гр;

-----Үлэмжийн фазыг зайлуулж, 2 мл субстратын органик уусмалыг 10 мл шилэн хоолойд хийнэ. Дэд бодисыг азотын урсгалтай усан ваннд (50-60 ℃) хатаана.

-----1 мл н-гексан нэмээд 30 секунд эргүүлээд дараа нь 1 мл экстракцийн уусмал (3-р уусмал) нэмээд 1 минутын турш дахин эргүүлнэ.Өрөөний температурт (20-25 ℃) дор хаяж 3000 гр 5 минутын турш центрифуг хийнэ;

-----Үлэмжийн фазыг зайлуулж, шинжилгээнд 50 мл авна;

9. Шинжилгээний үйл явц

9.1 Шинжилгээ хийхээс өмнө анхааруулах

9.1.1 Бүх урвалж болон бичил цооногууд бүгд өрөөний температурт (20-25℃) байгаа эсэхийг шалгаарай.

9.1.2 Үлдсэн бүх урвалжийг хэрэглэсний дараа шууд 2-8 ℃ хүртэл буцаана.

9.1.3 Бичил цооногийг зөв угаах нь шинжилгээний ажлын чухал үе шат юм;энэ нь ELISA шинжилгээний давтагдах чухал хүчин зүйл юм.

9.1.4 Инкубацийн үед гэрлээс зайлсхийж, бичил цооногийг таглана.

9.2 Шинжилгээний алхамууд

9.2.1 Бүх урвалжийг тасалгааны температурт (20-25 ℃) 30 минутаас дээш хугацаагаар гаргаж, хэрэглэхийн өмнө нэгэн төрлийн болгоно.

9.2.2 Шаардлагатай бичил цооногийг гаргаж, үлдсэнийг нь 2-8 хэмийн температурт нэн даруй цахилгаан цоожтой уутанд хийнэ.

9.2.3 Угаах шингэрүүлсэн уусмалыг хэрэглэхийн өмнө тасалгааны температурт дахин халаана.

9.2.4Тоо:Бичил цооногийн байрлал бүрийг дугаарлаж, бүх стандарт, дээжийг давхардсан байх ёстой.Стандарт болон дээжийн байрлалыг тэмдэглэ.

9.2.5Стандарт шийдэл/дээж нэмэх:50 мкл стандарт уусмал эсвэл бэлтгэсэн дээжийг холбогдох нүхэнд хийнэ.50 мкл эсрэгбиеийн уусмал нэмнэ.Хавтанг гараар сэгсэрч зөөлөн хольж, таглаад 25 хэмд 30 минут байлгана.

9.2.6Угаах:Бүрхүүлийг зөөлөн авч, цооногийн шингэнийг цэвэршүүлж, бичил цооногийг 250 мкл шингэрүүлсэн угаах уусмалаар (уусмал 2) 10 секундын зайтай 4-5 удаа зайлж угаана.Үлдэгдэл усыг шингээгч цаасаар шингээнэ (ашиглагдаагүй үзүүрээр үлдсэн агаарын бөмбөлгийг арилгах боломжтой).

9.2.8.Ферментийн коньюгат:Цооног бүрт 100 мл ферментийн коньюгат уусмал нэмж, хавтанг гараар сэгсэрч зөөлөн хольж, таглаад 25 хэмд 30 минутын турш өсгөвөрлөнө.Угаах алхамыг дахин давтана уу.

9.2.8Өнгө:Худаг тус бүрт 50 мкл А уусмал, 50 мкл В уусмал нэмнэ.Хавтанг гараар сэгсэрч зөөлөн хольж, таглаад 25 хэмд 15 минут байлгана (12.8-ыг үз).

9.2.9Хэмжих:Цооног бүрт 50 мкл зогсоолын уусмал нэмнэ.Хавтанг гараар сэгсэрч зөөлөн хольж, агаарын хоосон зайд 450 нм-д шингээлтийг хэмжинэ (Энэ нь 450/630 нм-ийн давхар долгионы урттай хэмжихийг санал болгож байна. Үр дүнг зогсоох уусмал нэмсний дараа 5 минутын дотор уншина уу. ) (Бид мөн нүдээр хэмжиж болно. ELIASA багажийн богино шийдэлгүйгээр зогсоох шийдэл)

Үр дүн

10.1 Шингээлтийн хувь

Стандарт болон дээжийн хувьд олж авсан шингээлтийн утгын дундаж утгыг эхний стандартын (тэг стандарт) шингээлтийн утгад хувааж, 100% -иар үржүүлнэ.Тиймээс тэг стандартыг 100% -тай тэнцүү болгож, шингээлтийн утгыг хувиар илэрхийлнэ.

Шингээлт (%) = B/B0 ×100%

B ——шингээлтийн стандарт (эсвэл дээж)

B0 ——шингээлтийн 0 стандарт

10.2 Стандарт муруй

Стандарт муруй зурахын тулд: Стандартуудын шингээлтийн утгыг y тэнхлэгээр, флумекиний стандарт уусмалын (ppb) концентрацийн хагас логарифмийг x тэнхлэгээр авна.

--- TheфлумекинШалгалт тохируулгын муруйгаас уншиж болох дээж бүрийн концентрацийг (ppb) дагаж мөрдсөн дээж бүрийн шингэрүүлэлтийн үржвэрээр үржүүлж, дээжийн бодит концентрацийг гаргана.

ELISA иж бүрдлийн өгөгдлийг багасгахын тулд тусгай программ хангамжийг боловсруулсан бөгөөд үүнийг хүсэлтээр гаргаж болно.

11. Мэдрэмж, нарийвчлал, нарийвчлал

Туршилтын мэдрэмж:0.3ppb

Зөгийн бал Дээж шингэлэх хүчин зүйл: 2

Илрүүлэх хязгаар

Зөгийн балны дээж--------------------------------- -1ppb

Нарийвчлал

Зөгийн балны дээж ---------------------------------------- 90±20 %

Нарийвчлал

ELISA багцын өөрчлөлтийн коэффициент 10% -иас бага байна.

12. Анхааруулга

12.1 Урвалж болон дээжийг тасалгааны температурт (20-25℃) тохируулаагүй тохиолдолд стандарт болон дээжийн шингээлтийн дундаж утгыг бууруулна.

12.2 Амжилтгүй давтагдахаас зайлсхийхийн тулд бичил цооногийг алхам хооронд хатаахыг бүү зөвшөөр, бичил цооногийн тавиурыг дарсны дараа шууд дараагийн алхмыг хийнэ.

12.3.Хэрэглэхийн өмнө урвалж бүрийг нэгэн төрлийн болгоно.

12.4.Арьсаа зогсоох уусмалаас хол байлга, учир нь энэ нь 2M H юм₂SO₄шийдэл.

12.5 Хугацаа нь дууссан иж бүрдлийг бүү ашигла.Янз бүрийн багцын урвалжуудыг сольж болохгүй, учир нь энэ нь мэдрэмжийг бууруулдаг.

12.6 Хадгалах нөхцөл:

ELISA иж бүрдлийг 2-8℃ хэмд байлгана, хөлдөхгүй.Битүүмжилсэн бичил цооногийн хавтангуудыг бүх инкубацийн үед нарны шууд тусгалаас зайлсхий.Микротитрийн хавтанг таглахыг зөвлөж байна.

12.7 Урвалж муудсан шинж тэмдэг:

Субстратын уусмал өнгө болж хувирвал түүнийг орхих хэрэгтэй.

Тэг стандартын шингээлтийн утга (450/630нм) 0.5 (A450nm＜0.5)-аас бага байвал урвалжууд муу болж магадгүй.

12.8 А уусмал, В уусмал нэмсний дараа өнгөний урвал явагдахад 15 минут шаардлагатай. Хэрэв өнгө нь хэтэрхий цайвар байвал та инкубацийн хугацааг 20 минутаас илүү сунгаж болно.Хэзээ ч 25 минутаас хэтрэхгүй, харин эсрэгээр инкубацийн хугацааг зөв богиносго.

12.9 Урвалын оновчтой температур нь 25℃ байна.Өндөр эсвэл бага температур нь мэдрэмж, шингээлтийн утгыг өөрчлөхөд хүргэдэг.

13. Хадгалалт

Хадгалах нөхцөл: 2-8℃.

Хадгалах хугацаа: 12 сар.