مەھسۇلات

سىناق پرىنسىپى

بۇ يۈرۈشلۈك ۋاسىتىلىك رىقابەت كۈچىگە ئىگە ELISA تېخنىكىسىنى ئاساس قىلغان.مىكرو قۇدۇق قۇدۇقلىرى بىرىكتۈرۈلگەن ئانتىگېن بىلەن سىرلانغان.Flumequineئەۋرىشكە تەركىبىدىكى قالدۇق ماددىلار ئانتىتېلا ئۈچۈن مىكرو ئېلېمېنت تاختىسىدا سىرلانغان ئانتىگېن بىلەن رىقابەتلىشىدۇ.ئانتىتېلاغا قارشى بەلگە قويۇلغان ئېنزىم قوشۇلغاندىن كېيىن ، TMB تارماق ئېلېمېنتى رەڭنى كۆرسىتىشكە ئىشلىتىلىدۇ.ئەۋرىشكىنىڭ سۈمۈرۈلۈشى ئۇنىڭ تەركىبىدىكى تېتراكسىلىننىڭ مەنپىي مۇناسىۋىتى بىلەن مۇناسىۋەتلىك بولۇپ ، ئۆلچەملىك ئەگرى سىزىق بىلەن سېلىشتۇرۇلغاندىن كېيىن ، سۇيۇقلۇقنىڭ كۆپلۈكىگە كۆپەيتىلگەندىن كېيىن ، ئەۋرىشكە تەركىبىدىكى فلۇمېكىن قالدۇق مىقدارىنى ھېسابلىغىلى بولىدۇ.

قوللىنىشچان پروگراممىلار

بۇ زاپچاسنى ھەسەل تەركىبىدىكى فلۇمىن قالدۇقلىرىنى مىقدار ۋە سۈپەتلىك تەھلىل قىلىشقا ئىشلىتىشكە بولىدۇ.

ھالقىما ئىنكاس

Flumequine ………………… .. ……………………… 100%

ماتېرىياللار تەلەپ قىلىنىدۇ

ئۈسكۈنىلەر

Ic مىكرو تىپلىق تەخسە سپېكترو فوتومېتىر (450nm / 630nm)

OmHomogenizer or stomacher

┅┅Shaker

OrtVortex mixer

┅┅Centrifuge

An ئانالىز تەڭپۇڭلۇقى (ئىندۇكسىيە: 0.01g)

┅┅ ئوقۇش پۈتتۈرگەن تۇرۇبا: 15ml

Rub كاۋچۇك تۇرۇبا لامپۇچكىسى

OstPystyrene Centrifuge تۇرۇبىسى: 15ml ، 50ml

┅┅ ئەينەك سىناق تۇرۇبىسى ： 10ml

Ic مىكروپېتېت: 20ml-200ml ، 100ml -10000ml ،

250ml -multipipette

Reagents

┅┅n-hexane (AR)

Et مېتىلېن خىلورىد (AR)

┅┅Acetonitrile (AR)

EDionionized water

----- قويۇقلاندۇرۇلغان ھىدرو كىسلاتا (AR)

Kit زاپچاسلىرى

96 ئانتىگېن بىلەن سىرلانغان 96 قۇدۇق بار مىكرو تىپلىق تەخسە

Solutions ئۆلچەملىك ھەل قىلىش چارىسى (6 بوتۇلكا × 1ml / بوتۇلكا)

0ppb ، 0.3ppb ، 1.2ppb ، 4.8ppb ، 19.2ppb ، 76.8ppb

Concent يۇقىرى قويۇقلۇقتىكى ئۆلچەملىك كونترول: (1ml / بوتۇلكا)

……………………………………………………100ppb

● ئېنزىم بىرىكمىسى 12ml ……………………… ... قىزىل دوپپا

● ئانتىتېلا ئېرىتمىسى 7ml ………… .. …… ..….… .. يېشىل دوپپا

7 ھەل قىلىش چارىسى 7ml …… .. ………………… .. ……… .. ئاق دوپپا

7 ھەل قىلىش چارىسى B 7ml ……………. ………… .. ………… قىزىل دوپپا

Solution ھەل قىلىشنى توختىتىڭ 7ml …………………… .. ……… سېرىق دوپپا

X 20X مەركەزلىك يۇيۇش ئېرىتمىسى 40ml

……………………………………… ..… .. ئوچۇق قاپ

X 2X ئېلىش ھەل قىلىش چارىسى 50ml ……………… ...… كۆك دوپپا

Reagents Preparation

7.1 ھەسەل ئەۋرىشكىسى

ھەل قىلىش چارىسى: 0.2 M گىدروخلور كىسلاتا ئېرىتمىسى

ئېغىرلىقى 41.5 مىللىمېتىر قويۇقلاندۇرۇلغان گىدروخلورىك كىسلاتا ، دىئونلانغان سۇ بىلەن سۇيۇلدۇرۇلۇپ 500 مىللىلېتىر.

2-ھەل قىلىش چارىسى: ھەل قىلىش چارىسى

قويۇق يۇيۇش ئېرىتمىسىنى تەخسە يۇيۇشقا ئىشلىتىلىدىغان ئاۋاز نىسبىتى 1: 19 نىسبەتتە دىئونلانغان سۇ بىلەن سۇيۇلدۇرۇڭ.سۇيۇقلاندۇرۇلغان ئېرىتمىنى 4 at 1 دە ساقلىغىلى بولىدۇ.

ھەل قىلىش چارىسى3: ئېلىش چارىسى

ئەۋرىشكە ئېلىشتا ئىشلىتىلىدىغان 2 × قويۇق ئېلىش ئېرىتمىسىنى دىئونسىزلانغان سۇ بىلەن 1: 1 (ياكى تەلەپكە باغلىق) مىقدارىدا سۇيۇلدۇرۇڭ.بۇ سۇيۇلدۇرۇلغان ھەل قىلىش چارىسىنى 4 at 1 ئاي ساقلىغىلى بولىدۇ.

ئۈلگە تەييارلىقى

8.1 مەشغۇلاتتىن بۇرۇن ئىشلەتكۈچىلەرگە ئەسكەرتىش ۋە ئالدىنى ئېلىش تەدبىرلىرى

(1) تەجرىبە جەريانىدا بىر قېتىمدىلا ئىشلىتىلىدىغان ئۇسۇللارنى ئىشلىتىڭ ، ئوخشىمىغان رېئاكتورنى سۈمۈرگەندە كۆرسەتمىنى ئۆزگەرتىڭ.

(2) بارلىق تەجرىبە ئەسۋابلىرىنىڭ پاكىز بولۇشىغا كاپالەتلىك قىلىڭ ، بولمىسا ئۇ تەكشۈرۈش نەتىجىسىگە تەسىر كۆرسىتىدۇ.

8.2ھەسەل ئەۋرىشكىسى

----- ئېغىرلىقى 2g ± 0.05g ھەسەل ئەۋرىشكىسى 50ml پولىستىرېن مەركەزدىن ياسالغان نەيچىگە ،

.

----- Centrifuge 10 مىنۇت ، ئۆي تېمپېراتۇرىسىدا كەم دېگەندە 3000g (20-25 ℃);

----- خاسىيەتلىك باسقۇچنى ئېلىڭ ، 10 مىللىلېتىر ئەينەك تۇرۇبىغا 2 مىللىلېتىر ئورگانىك ئېرىتمىنى ئېلىڭ. ئازوت ئېقىمىنىڭ سۇ مۇنچىسى ئاستىدا قۇرۇتۇڭ (50-60 ℃)

----- 30 مىللىلىتىرغا 1 مىللىلېتىر n-hexane ، قاينامنى قوشۇڭ ، ئاندىن 1ml ئېلىش ئېرىتمىسى (3-ھەل قىلىش چارىسى) ، قاينامنى يەنە 1 مىنۇت قوشۇڭ.Centrifuge 5min ، ئۆي تېمپېراتۇرىسىدا كەم دېگەندە 3000g (20-25 ℃)

----- خاسىيەتلىك باسقۇچنى ئېلىۋېتىڭ ، 50ml ئېلىڭ.

9. تەكشۈرۈش جەريانى

9.1 تەكشۈرۈشتىن بۇرۇن ئۇقتۇرۇش

9.1.1 بارلىق رېئاكتور ۋە مىكرو دولقۇنلارنىڭ ھەممىسىنىڭ ئۆي تېمپېراتۇرىسىدا (20-25 ℃) بولۇشىغا كاپالەتلىك قىلىڭ.

9.1.2 قالغان بارلىق رېئاكتورلارنى ئىشلىتىپ بولغاندىن كېيىن دەرھال 2-8 to گە قايتۇرۇڭ.

9.1.3 مىكرو دولقۇننى توغرا يۇيۇش تەكشۈرۈش جەريانىدىكى مۇھىم قەدەم.ئۇ ELISA تەھلىلىنىڭ تەكرارلىنىشىدىكى مۇھىم ئامىل.

9.1.4 نۇردىن ساقلىنىڭ ۋە يوشۇرۇن ھالەتتە مىكرو دولقۇننى يېپىڭ.

9.2 قەدەم باسقۇچلىرى

9.2.1 بارلىق رېئاكتورلارنى ئۆي تېمپېراتۇرىسى (20-25 ℃) دىن 30 مىنۇتتىن كۆپرەك ئېلىڭ ، ئىشلىتىشتىن بۇرۇن ئوخشاشلاشتۇرۇڭ.

9.2.2 لازىملىق مىكرو دولقۇننى ئېلىڭ ، قالغانلىرىنى دەرھال 2-8 at دە زىپ قۇلۇپ خالتىغا قايتۇرۇڭ.

9.2.3 سۇيۇقلاندۇرۇلغان يۇيۇش سۇيۇقلۇقىنى ئىشلىتىشتىن بۇرۇن ئۆينىڭ تېمپېراتۇرىسىدا بولۇشى كېرەك.

9.2.4نومۇرى:ھەر بىر مىكرو دولقۇنلۇق ئورۇننىڭ سانى ۋە بارلىق ئۆلچەم ۋە ئەۋرىشكىلەرنى كۆپەيتىش كېرەك.ئۆلچەم ۋە ئەۋرىشكە ئورنىنى خاتىرىلەڭ.

9.2.5ئۆلچەملىك ھەل قىلىش چارىسى / ئۈلگە قوشۇڭ:ماس كېلىدىغان قۇدۇقلارغا 50 µl ئۆلچەملىك ھەل قىلىش چارىسى ياكى تەييارلانغان ئەۋرىشكە قوشۇڭ.50µl ئانتىتېلا ئېرىتمىسىنى قوشۇڭ.تەخسىنى قولدا سىلكىش ئارقىلىق ئاستا-ئاستا ئارىلاشتۇرۇپ ، 25 مىنۇتتا 30 مىنۇت يېپىش كېرەك.

9.2.6يۇيۇش:قاپاقنى ئاستا-ئاستا ئېلىۋېتىپ ، قۇدۇقتىن سۇيۇقلۇقنى پاكىزلاپ ، مىكرو دولقۇنلۇق ئوچاقنى 250µl سۇيۇقلاندۇرۇلغان يۇيۇش ئېرىتمىسى (ھەل قىلىش چارىسى 2) بىلەن 10s ئارىلىقىدا 4-5 قېتىم چايقىڭ.قالدۇق سۇنى سۈمۈرگۈچ قەغەز بىلەن سۈمۈرۈڭ (قالغان ھاۋا كۆپۈكلىرىنى ئىشلىتىلمىگەن ئۇچى بىلەن يوقاتقىلى بولىدۇ).

9.2.8.ئېنزىم بىرىكمىسى:ھەر بىر قۇدۇققا 100ml فېرمېنت قېتىشمىسى ئېرىتمىسى قوشۇڭ ، تەخسىنى قولدا سىلكىپ يۇمشاق ئارىلاشتۇرۇڭ ھەمدە 30 مىنۇتتا 25 ℃ مۇقاۋا بىلەن يېپىڭ.يۇيۇش قەدىمىنى قايتا تەكرارلاڭ.

9.2.8رەڭگى:ھەر بىر قۇدۇققا 50µl ئېرىتمىسى A ۋە 50µl ئېرىتمىسى قوشۇڭ.تەخسىنى قولدا سىلكىپ ئاستا ئارىلاشتۇرۇڭ ھەمدە 25 مىنۇتتا 15 مىنۇت يېپىپ قويۇڭ (12.8 گە قاراڭ).

9.2.9تەدبىر:ھەر بىر قۇدۇققا 50µl توختىتىش چارىسىنى قوشۇڭ.تەخسىنى قول بىلەن سىلكىش ئارقىلىق ئاستا-ئاستا ئارىلاشتۇرۇڭ ھەمدە سۈمۈرۈلۈشنى 450nm لىق ھاۋا بوشلۇقىغا توغرىلاڭ (بۇ قوش دولقۇن ئۇزۇنلۇقى 450/630nm بىلەن ئۆلچەش تەۋسىيە قىلىنىدۇ. توختاپ ھەل قىلىش چارىسى قوشۇلغاندىن كېيىن 5 مىنۇت ئىچىدە نەتىجىنى ئوقۇڭ.) (بىز كۆرۈش ئارقىلىقمۇ ئۆلچەپ چىقالايمىز. ELIASA قورالىغا يەتمەي تۇرۇپ ھەل قىلىش چارىسى يوق)

نەتىجە

10.1 پىرسەنت سۈمۈرۈلۈش

ئۆلچەم ۋە ئەۋرىشكە ئۈچۈن قوبۇل قىلىنغان سۈمۈرۈلۈش قىممىتىنىڭ ئوتتۇرىچە قىممىتى بىرىنچى ئۆلچەم (نۆل ئۆلچەم) نىڭ سۈمۈرۈلۈش قىممىتىگە بۆلۈنۈپ ،% 100 كۆپەيتىلگەن.شۇڭا نۆل ئۆلچەم% 100 كە تەڭ بولۇپ ، سۈمۈرۈلۈش قىممىتى پىرسەنتتە نەقىل ئېلىنغان.

Absorbance (%) = B / B0 × 100%

B —— سۈمۈرگۈچ ئۆلچىمى (ياكى ئەۋرىشكە)

B0 —— سۈمۈرگۈچ نۆل ئۆلچەم

10.2 ئۆلچەملىك ئەگرى سىزىق

ئۆلچەملىك ئەگرى سىزىق سىزىش: ئۆلچەمنىڭ سۈمۈرۈلۈش قىممىتىنى y ئوقى ، فلۇكېن ئۆلچىمى ئېرىتمىسىنىڭ قويۇقلۇقىنىڭ يېرىم لوگارىزىمنى x ئوق دەپ ئېلىڭ.

---flumequineتەقلىد قىلىش ئەگرى سىزىقىدىن ئوقۇشقا بولىدىغان ھەر بىر ئەۋرىشكە (ppb) نىڭ قويۇقلۇقى كېيىنكى ھەر بىر ئەۋرىشكىنىڭ مۇناسىپ سۇيۇقلۇقى بىلەن كۆپەيتىلىپ ، ئەۋرىشكىنىڭ ئەمەلىي قويۇقلۇقىغا ئېرىشىدۇ.

ELISA زاپچاسلىرىنىڭ سانلىق مەلۇماتلىرىنى ئازايتىش ئۈچۈن ، ئالاھىدە يۇمشاق دېتال ياسالدى ، ئۇنى تەلەپ بويىچە تەمىنلىگىلى بولىدۇ.

11. سەزگۈرلۈك ، توغرىلىق ۋە ئېنىقلىق

سىناق سەزگۈرلىكى：0.3ppb

ھەسەل ئەۋرىشكىسىنى سۇيۇقلاندۇرۇش ئامىلى: 2

بايقاش چېكى

ھەسەل ئەۋرىشكىسى ------------------------------------------------ -1ppb

ئېنىقلىق

ھەسەل ئەۋرىشكىسى --------------------------------------------- 90 ± 20 %

ئېنىقلىق

ELISA يۈرۈشلۈك زاپچاسلىرىنىڭ ئۆزگىرىش كوئېففىتسېنتى% 10 كىمۇ يەتمەيدۇ.

12. ئۇقتۇرۇش

12.1 ئەگەر رېئاكتور ۋە ئەۋرىشكە ئۆينىڭ تېمپېراتۇرىسى (20-25 ℃) گە تەڭشەلمىگەن بولسا ، ئۆلچەم ۋە ئەۋرىشكە ئۈچۈن قوبۇل قىلىنغان سۈمۈرۈلۈش قىممىتىنىڭ ئوتتۇرىچە قىممىتى تۆۋەنلەيدۇ.

12.2 مۇۋەپپەقىيەتلىك قايتا-قايتا تەكرارلىنىشتىن ساقلىنىش ئۈچۈن قەدەم باسقۇچلار ئارىسىدا مىكرو دولقۇنلارنىڭ قۇرۇشىغا يول قويماڭ ھەمدە مىكرو دولقۇنلۇق تۇتقۇچىنى چەككەندىن كېيىن كېيىنكى قەدەمدە مەشغۇلات قىلىڭ.

12.3.ئىشلىتىشتىن بۇرۇن ھەر بىر رېئاكتورنى بىرلەشتۈرۈڭ.

12.4.تېرىڭىزنى توختىتىش ئېرىتمىسىدىن يىراقلاشتۇرۇڭ ، چۈنكى ئۇ 2M H.₂SO₄ھەل قىلىش چارىسى.

12.5 يۈرۈشلۈك ئۈسكۈنىلەرنى ۋاقتى ئۆتۈپ كەتمەڭ.ئوخشىمىغان تۈركۈمدىكى رېئاكتورنى ئالماشتۇرماڭ ، چۈنكى ئۇ سەزگۈرلۈكنى تۆۋەنلىتىدۇ.

12.6 ساقلاش ھالىتى:

ELISA زاپچاسلىرىنى 2-8 at ساقلاڭ ، توڭلىماڭ.پېچەتلەنگەن مىكرو دولقۇنلۇق تەخسە بارلىق يوشۇرۇن ھالەتتە بىۋاسىتە قۇياش نۇرىدىن ساقلىنىڭ.مىكرو تىپلىق پىلاستىنكىلارنى يېپىش تەۋسىيە قىلىنىدۇ.

12.7 رېئاكتورنىڭ ناچار كېتىدىغانلىقىنى كۆرسىتىپ بېرىدۇ:

ئەگەر رەڭگە ئايلانسا ، ئاستىرتتىن ھەل قىلىش چارىسىنى تاشلاش كېرەك.

ئەگەر نۆل ئۆلچەمنىڭ سۈمۈرۈلۈش قىممىتى (450 / 630nm) 0.5 (A450nm ＜ 0.5) دىن تۆۋەن بولسا ، رېئاكتور ناچارلىشىشى مۇمكىن.

12.8 A ھەل قىلىش چارىسى ۋە B ھەل قىلىش چارىسىنى قوشقاندىن كېيىن رەڭلىك رېئاكسىيە 15 مىنۇتقا ئېھتىياجلىق بولىدۇ ، ئەگەر رەڭ بەك ئېنىق بولمىسا ، يوشۇرۇن ۋاقتى 20 مىنۇتتىن تېخىمۇ ئۇزۇن بولىدۇ.ھەرگىز 25min دىن ئېشىپ كەتمەڭ ، ئەكسىچە ، يوشۇرۇن ۋاقتىنى مۇۋاپىق قىسقارتىڭ.

12.9 ئەڭ ياخشى رېئاكسىيە تېمپېراتۇرىسى 25 is.يۇقىرى ياكى تۆۋەن تېمپېراتۇرا سەزگۈرلۈك ۋە سۈمۈرۈلۈش قىممىتىنىڭ ئۆزگىرىشىنى كەلتۈرۈپ چىقىرىدۇ.

13. ساقلاش

ساقلاش ھالىتى: 2-8 ℃.

ساقلاش مۇددىتى: 12 ئاي.