produktu

Princíp testu

Táto súprava je založená na nepriamej konkurenčnej technológii ELISA.Mikrotitračné jamky sú potiahnuté väzbovým antigénom.Flumequinzvyšok vo vzorke súťaží s antigénom naneseným na mikrotitračnej platni o protilátku.Po pridaní enzýmom značenej protilátky sa na zobrazenie farby použije substrát TMB.Absorbancia vzorky negatívne súvisí s tetracyklínom, ktorý sa v nej nachádza, po porovnaní so štandardnou krivkou, vynásobenej násobkom riedenia, je možné vypočítať množstvo flumechínového zvyšku vo vzorke.

Aplikácie

Táto súprava môže byť použitá pri kvantitatívnej a kvalitatívnej analýze rezíduí flumequinu v mede.

Krížové reakcie

Flumequin ………………………………………………… 100 %

Požadované materiály

Vybavenie

┅┅ Mikrotitračný spektrofotometer (450nm/630nm)

┅┅Homogenizátor alebo Stomacher

┅┅ Shaker

┅┅Vortexový mixér

┅┅Odstredivka

┅┅Analytická váha (indukčnosť: 0,01 g)

┅┅Odmerná pipeta: 15 ml

┅┅Gumová pipeta

┅┅ Polystyrénová odstredivková skúmavka: 15 ml, 50 ml

┅┅Sklenená skúmavka：10ml

┅┅Mikropipety: 20ml-200ml, 100ml-10000ml,

250 ml - multipipeta

Činidlá

┅┅n-hexán (AR)

┅┅metylénchlorid (AR)

┅┅Acetonitril (AR)

┅┅Deionizovaná voda

-----Koncentrovaná kyselina chlorovodíková (AR)

Komponenty súpravy

● Mikrotitračná doštička s 96 jamkami potiahnutými antigénom

● Štandardné roztoky (6 fliaš × 1 ml/fľaša)

0 ppb, 0,3 ppb, 1,2 ppb, 4,8 ppb, 19,2 ppb, 76,8 ppb

● Štandardná kontrola vysokej koncentrácie: (1 ml/fľaša)

…………………………………………………………100 ppb

● Enzýmový konjugát 12 ml………………………... červený uzáver

● Roztok protilátky 7ml …………..……..….…..zelený uzáver

● Roztok A 7ml……..………………………..………..biely uzáver

● Roztok B 7ml ………………….………………..………… červený uzáver

● Stop roztok 7 ml …………………………..………žltý uzáver

● 20XKoncentrovaný premývací roztok 40ml

………………………………………..…..priehľadný uzáver

●2X extrakčný roztok 50 ml……………………… modrý uzáver

Príprava činidiel

7.1 Vzorka medu

Roztok 1: 0,2 M roztok kyseliny chlorovodíkovej

Hmotnosť 41,5 ml Koncentrovaná kyselina chlorovodíková, zriedená deionizovanou vodou na 500 ml.

Riešenie 2: Premývací roztok

Koncentrovaný premývací roztok zrieďte deionizovanou vodou v objemovom pomere 1:19, ktorý sa použije na umývanie platní.zriedený roztok možno skladovať pri 4 °C počas 1 mesiaca.

Riešenie3: extrakčný roztok

2x koncentrovaný extrakčný roztok zrieďte deionizovanou vodou v objemovom pomere 1:1 (alebo v závislosti od požiadavky), ktorý bude použitý na extrakciu vzorky.Tento zriedený roztok sa môže uchovávať 1 mesiac pri 4 °C.

Vzorové prípravky

8.1 Upozornenie a bezpečnostné opatrenia pre používateľov pred prevádzkou

(a) V procese experimentu použite jednorazové špičky a pri absorpcii iného činidla vymeňte špičky.

(b) Uistite sa, že všetky experimentálne nástroje sú čisté, inak to ovplyvní výsledok testu.

8.2Vzorka medu

----- Odvážte 2 g ± 0,05 g vzorky medu do 50 ml polystyrénovej centrifugačnej skúmavky,

----- Pridajte 2 ml 0,2 M roztoku kyseliny chlorovodíkovej (roztok 1), vortexujte, aby sa úplne premiešal, potom pridajte 8 ml metylénchloridu, pretrepávajte na trepačke 5 minút, aby sa úplne rozpustil;

-----Odstreďujte 10 minút, aspoň 3000 g pri izbovej teplote (20-25 ℃);

----- Odstráňte supernatantovú fázu, vezmite 2 ml organického roztoku substrátu do 10 ml sklenenej skúmavky. Sušte substrát vo vodnom kúpeli s prúdom dusíka (50-60 °C)

-----Pridajte 1 ml n-hexánu, vortexujte 30 s, potom pridajte 1 ml extrakčného roztoku (roztok 3) a znova vortexujte 1 minútu.Centrifugujte 5 minút, aspoň 3000 g pri izbovej teplote (20-25 ℃);

----- Odstráňte supernatantovú fázu, odoberte 50 ml na analýzu;

9. Proces testu

9.1 Upozornenie pred testom

9.1.1 Uistite sa, že všetky reagencie a mikrojamky majú izbovú teplotu (20-25 °C).

9.1.2 Ihneď po použití vráťte všetky zvyšné činidlá na 2-8 °C.

9.1.3 Správne premytie mikrojamiek je dôležitým krokom v procese analýzy;je to životne dôležitý faktor pre opakovateľnosť analýzy ELISA.

9.1.4 Počas inkubácie sa vyhýbajte svetlu a zakryte mikrojamky.

9.2 Kroky testu

9.2.1 Všetky činidlá odoberte pri izbovej teplote (20-25 °C) na viac ako 30 minút, pred použitím ich zhomogenizujte.

9.2.2 Vyberte potrebné mikrojamky a zvyšok ihneď vráťte do vrecka so zipsom pri teplote 2-8 °C.

9.2.3 Zriedený premývací roztok sa má pred použitím zohriať na izbovú teplotu.

9.2.4číslo:Očíslujte každú polohu mikrojamiek a všetky štandardy a vzorky by sa mali analyzovať duplicitne.Zaznamenajte polohy štandardov a vzoriek.

9.2.5Pridajte štandardný roztok/vzorku:Pridajte 50 µl štandardného roztoku alebo pripravenej vzorky do príslušných jamiek.Pridajte 50 ul roztoku protilátky.Jemne premiešajte ručným potrasením platničky a inkubujte 30 minút pri 25 °C s krytom.

9.2.6Umyť:Jemne odstráňte kryt a vyčistite kvapalinu z jamiek a prepláchnite mikrojamky 250 µl zriedeného premývacieho roztoku (roztok 2) v intervale 10 s 4-5 krát.Zvyšnú vodu absorbujte savým papierom (zvyšná vzduchová bublina sa dá odstrániť nepoužitou špičkou).

9.2.8.Enzýmový konjugát:Do každej jamky pridajte 100 ml roztoku enzýmového konjugátu, jemne premiešajte ručným potrasením platničky a inkubujte 30 minút pri 25 °C s krytom.Zopakujte krok umývania znova.

9.2.8Sfarbenie:Pridajte 50 ul roztoku A a 50 ul roztoku B do každej jamky.Jemne premiešajte ručným potrasením platničky a inkubujte 15 minút pri 25 °C s krytom (pozri 12.8).

9.2.9Zmerajte:Do každej jamky pridajte 50 µl zastavovacieho roztoku.Jemne premiešajte ručným pretrepaním doštičky a zmerajte absorbanciu pri 450 nm proti vzduchovému slepému pokusu (Odporúča sa merať s duálnou vlnovou dĺžkou 450/630 nm. Odčítajte výsledok do 5 minút po pridaní zastavovacieho roztoku.) (Môžeme merať aj pohľadom bez zastavovacieho roztoku s výnimkou prístroja ELIASA)

Výsledky

10,1 Percentuálna absorbancia

Stredné hodnoty hodnôt absorbancie získané pre štandardy a vzorky sa vydelia hodnotou absorbancie prvého štandardu (nulový štandard) a vynásobia sa 100 %.Nulový štandard sa teda rovná 100 % a hodnoty absorbancie sa uvádzajú v percentách.

Absorbancia (%) = B/B0 × 100 %

B ——absorbčný štandard (alebo vzorka)

B0 ——štandard nulovej absorpcie

10.2 Štandardná krivka

Nakreslenie štandardnej krivky: Zoberte hodnotu absorbancie štandardov ako os y, semilogaritmickú koncentráciu štandardného roztoku flumechínu (ppb) ako os x.

--- Theflumequinkoncentrácia každej vzorky (ppb), ktorú možno odčítať z kalibračnej krivky, sa vynásobí zodpovedajúcim násobkom riedenia každej sledovanej vzorky a získa sa skutočná koncentrácia vzorky.

Na redukciu údajov súprav ELISA bol vyvinutý špeciálny softvér, ktorý je možné poskytnúť na požiadanie.

11. Citlivosť, presnosť a presnosť

Test citlivosti：0,3 ppb

Med Faktor riedenia vzorky: 2

Detekčný limit

Vzorka medu------------------------------------------------ -1 ppb

Presnosť

Vzorka medu --------------------------------------------- 90±20 %

Presnosť

Variačný koeficient súpravy ELISA je menší ako 10 %.

12. Upozornenie

12.1 Stredné hodnoty hodnôt absorbancie získané pre štandardy a vzorky sa znížia, ak reagencie a vzorky neboli regulované na izbovú teplotu (20-25 °C).

12.2 Nenechajte mikrojamky medzi jednotlivými krokmi vyschnúť, aby ste sa vyhli neúspešnému opakovaniu, a ďalší krok vykonajte ihneď po klepnutí na držiak mikrojamiek.

12.3.Pred použitím každé činidlo homogenizujte.

12.4.Udržujte svoju pokožku mimo dosahu zastavovacieho roztoku, pretože je to 2M H₂SO₄Riešenie.

12.5 Nepoužívajte súpravy zastarané.Nevymieňajte reagencie z rôznych šarží, pretože to zníži citlivosť.

12.6 Podmienky skladovania:

Súpravy ELISA uchovávajte pri 2-8 °C, nezmrazujte.Utesnite zvyšné mikrotitračné platne Počas všetkých inkubácií sa vyhýbajte priamemu slnečnému žiareniu.Odporúča sa zakryť mikrotitračné platne.

12.7 Indikácie zlého stavu činidiel:

Roztok substrátu by sa mal opustiť, ak sa zmení na farby.

Ak je hodnota absorbancie (450/630nm) nulového štandardu menšia ako 0,5 (A450nm＜0,5), reagencie sa môžu pokaziť.

12.8 Farbiaca reakcia potrebuje 15 minút po pridaní roztoku A a roztoku B. Inkubačný čas môžete predĺžiť z 20 minút na viac, ak je farba príliš svetlá na to, aby sa dala určiť.Nikdy neprekračujte 25 minút, naopak, vhodne skráťte inkubačný čas.

12.9 Optimálna reakčná teplota je 25 °C.Vyššia alebo nižšia teplota povedie k zmenám hodnôt citlivosti a absorbancie.

13. Skladovanie

Skladovacie podmienky: 2-8 ℃.

Doba skladovania: 12 mesiacov.