producte

Principi de prova

Aquest kit es basa en la tecnologia ELISA de competició indirecta.Els pous de microtitulació estan recoberts amb antigen d'acoblament.FlumequinaEl residu de la mostra competeix amb l'antigen recobert a la placa de microtitulació per a l'anticòs.Després de l'addició d'un anticòs marcat amb enzim, s'utilitza el substrat TMB per mostrar el color.L'absorbància de la mostra està relacionada negativament amb la tetraciclina que hi resideix, després de comparar-la amb la corba estàndard, multiplicada pel múltiple de dilució, es pot calcular la quantitat de residus de flumequina a la mostra.

Aplicacions

Aquest kit es pot utilitzar en l'anàlisi quantitativa i qualitativa de residus de flumequina a la mel.

Reaccions creuades

Flumequina ………………………………………………… 100%

Materials necessaris

Equipaments

┅┅Espectrofotòmetre de placa de microtitulació (450nm/630nm)

┅┅Homogeneïtzador o estomacal

┅┅Agitador

┅┅Vortex mesclador

┅┅Centrífuga

┅┅Balanç analític (inductància: 0,01 g)

┅┅Pipeta graduada: 15ml

┅┅Bombeta de pipeta de goma

┅┅Tub de centrífuga de poliestirè: 15ml, 50ml

┅┅Trub d'assaig de vidre: 10 ml

┅┅Micropipetes: 20ml-200ml, 100ml -10000ml,

250ml -multippette

Reactius

┅┅n-hexà (AR)

┅┅Clorur de metilè (AR)

┅┅Acetonitril (AR)

┅┅Aigua desionitzada

-----Àcid clorhídric concentrat (AR)

Components del kit

● Placa de microtitulació amb 96 pous recoberts d'antigen

● Solucions estàndard (6 ampolles × 1 ml/ampolla)

0 ppb, 0,3 ppb, 1,2 ppb, 4,8 ppb, 19,2 ppb, 76,8 ppb

● Control estàndard d'alta concentració: (1 ml/ampolla)

……………………………………………………………100 ppb

● Conjugat enzimàtic 12ml……………... gorra vermella

● Solució d'anticossos 7ml …………..……..….…..tap verd

● Solució A 7ml……..…………………..………..tap blanc

● Solució B 7ml …………….…………..………… tap vermell

● Solució d'aturada 7ml ……………………..………tap groc

● 20X Solució de rentat concentrada 40ml

………………………………………..…..tapa transparent

●2X Solució d'extracció 50ml……………………………… tap blau

Preparació de reactius

7.1 Mostra de mel

Solució 1 : Solució d'àcid clorhídric 0,2 M

Pes 41,5 ml Àcid clorhídric concentrat, diluït amb aigua desionitzada fins a 500 ml.

Solució 2: solució de rentat

Dilueix la solució de rentat concentrada amb aigua desionitzada en una proporció de volum d'1:19, que s'utilitzarà per rentar les plaques.la solució diluïda es pot emmagatzemar a 4 ℃ durant 1 mes.

Solució3: solució d'extracció

Diluïu la solució d'extracció concentrada 2 × amb aigua desionitzada en la proporció de volum d'1:1 (o segons el requisit), que s'utilitzarà per a l'extracció de la mostra.Aquesta solució diluïda es pot conservar durant 1 mes a 4 ℃.

Preparacions de mostres

8.1 Avís i precaucions per als usuaris abans de l'operació

(a) Si us plau, utilitzeu consells únics en el procés de l'experiment i canvieu les puntes quan absorbeixi diferents reactius.

(b) Assegureu-vos que tots els instruments experimentals estiguin nets, en cas contrari afectarà el resultat de l'assaig.

8.2Mostra de mel

----- Peseu 2 g ± 0,05 g de mostra de mel en un tub de centrífuga de poliestirè de 50 ml,

----- Afegiu 2 ml de solució d'àcid clorhídric 0,2 M (solució 1), agiteu-ho completament, després afegiu 8 ml de clorur de metilè, agiteu amb agitador durant 5 minuts per dissoldre-ho completament;

-----Centrífuga durant 10 min, almenys 3000 g a temperatura ambient (20-25 ℃);

----- Traieu la fase sobrenedant, agafeu 2 ml de la solució orgànica del substrat a un tub de vidre de 10 ml. Assequeu el subestat sota el bany maria de flux de nitrogen (50-60 ℃)

----- Afegiu 1 ml de n-hexà, vòrtex durant 30 segons, a continuació, afegiu 1 ml de solució d'extracció (solució 3), torneu a vorejar durant 1 min.Centrifugar durant 5 minuts, almenys 3000 g a temperatura ambient (20-25 ℃);

-----Elimineu la fase sobrenedant, preneu 50 ml per a l'assaig;

9. Procés d'assaig

9.1 Avís abans de l'assaig

9.1.1 Assegureu-vos que tots els reactius i micropous estiguin a temperatura ambient (20-25 ℃).

9.1.2 Torneu tots els reactius restants a 2-8 ℃ immediatament després d'utilitzar-los.

9.1.3 Rentar correctament els micropous és un pas important en el procés d'assaig;és el factor vital per a la repetitivitat de l'anàlisi ELISA.

9.1.4 Eviteu la llum i cobreixi els micropouets durant la incubació.

9.2 Passos de l'assaig

9.2.1 Traieu tots els reactius a temperatura ambient (20-25 ℃) durant més de 30 minuts, homogeneïtzeu-los abans d'utilitzar-los.

9.2.2 Traieu els micropous necessaris i torneu la resta a la bossa amb cremallera a 2-8 ℃ immediatament.

9.2.3 La solució de rentat diluïda s'ha de tornar a escalfar perquè estigui a temperatura ambient abans d'utilitzar-la.

9.2.4Número:Numereu cada posició de micropous i tots els estàndards i mostres s'han d'executar per duplicat.Anoteu els estàndards i les posicions de les mostres.

9.2.5Afegeix una solució/mostra estàndard:Afegiu 50 µl de solució estàndard o mostra preparada als pous corresponents.Afegiu 50 µl de solució d'anticossos.Barrejar suaument agitant la placa manualment i incubar durant 30 minuts a 25 ℃ amb tapa.

9.2.6Rentar:Traieu suaument la coberta i purifiqueu el líquid dels pous i esbandiu els micropous amb 250 µl de solució de rentat diluïda (solució 2) a intervals de 10 segons durant 4-5 vegades.Absorbiu l'aigua residual amb paper absorbent (la bombolla d'aire restant es pot eliminar amb la punta no utilitzada).

9.2.8.Conjugat enzimàtic:Afegiu una solució de conjugat enzimàtic 100 ml a cada pou, barregeu suaument agitant la placa manualment i incubeu durant 30 minuts a 25 ℃ amb tapa.Repetiu el pas de rentat de nou.

9.2.8Coloració:Afegiu 50 µl de solució A i 50 µl de solució B a cada pou.Barrejar suaument agitant la placa manualment i incubar durant 15 min a 25 ℃ amb tapa (vegeu 12.8).

9.2.9Mesura:Afegiu 50 µl de solució de parada a cada pou.Barregeu suaument agitant la placa manualment i mesureu l'absorbància a 450 nm contra un blanc d'aire (es recomana mesurar amb la longitud d'ona dual de 450/630 nm. Llegiu el resultat en 5 minuts després de l'addició de la solució d'aturada.) (També podem mesurar a la vista). sense solució de parada en resum amb l'instrument ELIASA)

Resultats

10.1 Percentatge d'absorbància

Els valors mitjans dels valors d'absorbància obtinguts per als estàndards i les mostres es divideixen pel valor d'absorbància del primer estàndard (estàndard zero) i es multipliquen pel 100%.Així, l'estàndard zero es fa igual al 100% i els valors d'absorbància es comenten en percentatges.

Absorbància (%) = B/B0 × 100%

B ——estàndard d'absorbància (o mostra)

B0 ——absorbància zero estàndard

10.2 Corba estàndard

Per dibuixar una corba estàndard: Pren el valor d'absorbància dels estàndards com a eix y, semi-logarítmica de la concentració de la solució estàndard de flumequina (ppb) com a eix x.

--- ElflumequinaLa concentració de cada mostra (ppb), que es pot llegir des de la corba de calibratge, es multiplica pel múltiple de dilució corresponent de cada mostra seguida i s'obté la concentració real de la mostra.

Per a la reducció de dades dels kits ELISA, s'ha desenvolupat un programari especial, que es pot proporcionar a petició.

11. Sensibilitat, exactitud i precisió

Prova de sensibilitat：0,3 ppb

Factor de dilució de la mostra de mel: 2

Límit de detecció

Mostra de mel ------------------------------------------------- -1 ppb

Precisió

Mostra de mel -------------------------------------------- 90±20 %

Precisió

El coeficient de variació del kit ELISA és inferior al 10%.

12. Avís

12.1 Els valors mitjans dels valors d'absorbància obtinguts per als estàndards i les mostres es reduiran si els reactius i les mostres no s'han regulat a temperatura ambient (20-25 ℃).

12.2 No deixeu que els micropous s'assequin entre els passos per evitar una repetició infructuosa i feu el següent pas immediatament després de tocar el suport de micropous.

12.3.Homogeneïtzar cada reactiu abans d'utilitzar-lo.

12.4.Mantingueu la pell allunyada de la solució de parada perquè és el 2M H₂SO₄solució.

12.5 No utilitzeu els kits obsolets.No intercanvieu els reactius de lots diferents, ja que disminuirà la sensibilitat.

12.6 Condicions d'emmagatzematge:

Mantingueu els kits ELISA a 2-8 ℃, no els congeleu.Segellar les plaques de micropous de repòs Eviteu la llum solar directa durant totes les incubacions.Es recomana cobrir les plaques de microtitulació.

12.7 Indicacions de mal funcionament dels reactius:

La solució de substrat s'ha d'abandonar si es torna de color.

Els reactius es poden tornar malament si el valor d'absorbància (450/630 nm) de l'estàndard zero és inferior a 0,5 (A450nm <0,5).

12.8 La reacció de coloració necessita 15 minuts després d'afegir la Solució A i la Solució B. I podeu allargar el temps d'incubació entre 20 minuts i més si el color és massa clar per determinar-lo.No supereu mai els 25 minuts, al contrari, reduïu correctament el temps d'incubació.

12.9 La temperatura de reacció òptima és de 25 ℃.Una temperatura més alta o més baixa comportarà canvis en els valors de sensibilitat i absorbància.

13. Emmagatzematge

Condicions d'emmagatzematge: 2-8 ℃.

Període d'emmagatzematge: 12 mesos.