oloa

Fa'atauva Enzyme Immunoassay Kit mo Su'esu'ega Fa'atatau ole Flumequine

Fa'amatalaga Puupuu:

Flumequine o se sui o le quinolone antibacterial, lea e faʻaaogaina e avea o se mea taua tele faʻamaʻi pipisi i vailaʻau faʻamaʻi ma vai vai mo lona lautele lautele, maualuga le lelei, maualalo oona ma le malosi o le ulu o le tino.E faʻaaogaina foi mo togafitiga faʻamaʻi, puipuia ma le faʻalauteleina o le tuputupu aʻe.Talu ai e mafai ona taʻitaʻia ai le teteʻeina o vailaʻau ma le ono mafai ona faʻaleagaina, o le maualuga maualuga o loʻo i totonu o le tino o manu na faʻatonuina i le EU, Iapani (o le maualuga maualuga o le 100ppb i le EU).

I le taimi nei, o le spectrofluorometer, ELISA ma le HPLC o auala autu ia e iloa ai le toega o le flumequine, ma o le ELISA o se auala masani mo le maualuga ma le faʻaogaina faigofie.


Fa'amatalaga Oloa

Faailoga o oloa

Mataupu Faavae o le Su'ega

O lenei pusa e fa'avae i luga ole tekonolosi ELISA fa'atauva.O vaieli microtiter o loʻo ufiufi i le faʻapipiʻiina o antigen.Flumequineo totoe i le fa'ata'ita'iga e tauva ma le antigen ua ufiufi i luga o le microtiter plate mo le antibody.A maeʻa le faʻaopoopoina o le enzyme faʻailoga anti-antibody, faʻaogaina le TMB substrate e faʻaalia ai le lanu.O le faʻaogaina o le faʻataʻitaʻiga e le lelei le fesoʻotaʻi ma le tetracycline o loʻo nofo i totonu, pe a uma ona faʻatusatusa i le Standard Curve, faʻateleina i le dilution tele, Flumequine toega aofaʻi i le faʻataʻitaʻiga e mafai ona fuafua.

Talosaga

O lenei pusa e mafai ona faʻaaogaina i le quantitative ma qualitative suʻesuʻega o totoe flumequine i le meli.

Fa'asagaga fa'asagatau

Flumequine ……………………………………………………… 100%

 

Mea e Manaomia

Meafaigaluega

┅┅Microtiter plate spectrophotometer (450nm/630nm)

┅┅Homogenizer poʻo le manava

┅┅Se lulu

┅┅Vortex fa'afefiloi

┅┅Centrifuge

┅┅Paleni au'ili'ili (inductance: 0.01g)

┅┅Papa fa'au'u: 15ml

┅┅Papa paipa pulu

┅┅Polystyrene Centrifuge paipa: 15ml, 50ml

┅┅Papa su'e tioata:10ml

┅┅Micropipettes: 20ml-200ml, 100ml -10000ml,

250ml -telepine

Reagents

┅┅n-hexane(AR)

┅┅Methylene chloride(AR)

┅┅Acetonitrile(AR)

┅┅Suava fa'aonaona

-----Su'i sukalati fa'atosina(AR)

 

Vaega Vaega

● Microtiter ipu ma vaieli 96 ufiufi i antigen

● fofo masani (6 fagu × 1ml / fagu)

0ppb, 0.3ppb, 1.2ppb, 4.8ppb, 19.2ppb, 76.8ppb

● Fa'atonu maualuga fa'atonuga:(1ml/fagu)

…………………………………………………………………100ppb

● Enzyme conjugate 12ml……………………………… pulou mumu

● Antibody solution 7ml ……………………………………………..pulou lanu meamata

● Fofo A 7ml………………………………………………..pulou paepae

● Fofo B 7ml …………………………………………………… pulou mumu

● Taofi le vaifofo 7ml …………………………………………………… pulou samasama

● 20XConcentrated fufulu vaifofo 40ml

………………………………………………………..pulou manino

●2X Su'ega vaifofo 50ml…………………………… pulou lanumoana

 

Sauniuniga Reagents

7.1 Fa'ata'ita'iga o le meli

Fofo 1 : 0.2 M Fofo vai o le suka

Mamafa 41.5ml Concentrated hydrochloric acid, faʻafefe i le vai faʻafefete i le 500 ml.

Fofo 2: Fufulu vaifofo

Fa'asusu le vaifofo fufulu fa'amamafa i vai fa'a-deionized i le fua fa'atatau o le 1:19, lea o le a fa'aaogaina mo le fufuluina o papatusi.e mafai ona teuina le vaifofo fa'afefete ile 4℃ mo le 1 masina.

Fofo3: fofo aveese

Fa'asusu le vaifofo fa'ameaalofa 2 × fa'atasi ma le vai fa'a-deionized i le fua fa'atatau o le 1: 1 (pe fa'alagolago i mana'oga), lea o le a fa'aaogaina mo le fa'ata'ita'iga.E mafai ona fa'asaoina lenei fofo fa'afefete mo le 1 masina ile 4℃.

Sauniuniga Faataitai

8.1 Faʻaaliga ma puipuiga mo tagata faʻaoga aʻo leʻi faʻaogaina

(a) Fa'amolemole fa'aaoga fautuaga e tasi i le fa'agasologa o le fa'ata'ita'iga, ma sui fa'amatalaga pe a fa'asusu ese'esega.

(e) Ia mautinoa o meafaigāluega fa'ata'ita'i uma e mama, a leai o le a fa'ataunu'uina le i'uga o su'ega.

8.2Fa'ata'ita'iga o le meli

----- Fua 2g ± 0.05g faʻataʻitaʻiga meli i totonu o le 50ml polystyrene centrifuge tube,

----- Faʻaopoopo le 2ml 0.2 M Hydrochloric acid solution (Foto 1), vortex e faʻafefiloi atoa, ona faʻaopopo lea o le 8ml methylene chloride, lulu i le lulu mo le 5min e faʻamavae atoa;

----- Centrifuge mo 10 min, a itiiti mai 3000g i le vevela potu (20-25 ℃);

----- Aveese le vaega supernatant, ave le 2 ml o le substrate organic solution i se 10 ml ipu tioata. faʻamago le substate i lalo o le vai taele o le Nitrogen tafe (50-60 ℃)

----- Faʻaopoopo le 1 ml n-hexane, vortex mo le 30s, ona faʻaopopo lea o le 1ml faʻafefeteina fofo (fofo 3), toe vortex mo le 1min.Centrifuge mo 5min, a itiiti ifo 3000g i le vevela potu (20-25 ℃);

----- Aveese le vaega supernatant, ave 50ml mo suʻega;

9. Fa'agasologa o su'ega

9.1 Fa'aaliga a'o le'i faia le su'ega

9.1.1 Ia mautinoa o lo'o tu'u uma i le vevela o le potu (20-25℃).

9.1.2 Toe fa'afo'i uma mea toe fa'afo'i i le 2-8 ℃ i le taimi lava e uma ai ona fa'aoga.

9.1.3 O le fufuluina sa'o o microwells ose laasaga taua ile fa'agasologa ole su'ega;o le mea taua tele i le toe fai o suʻesuʻega ELISA.

9.1.4 Aloese mai le malamalama ma ufiufi le microwells i le taimi e fa'ago ai.

9.2 Laasaga Su'esu'e

9.2.1 Ave uma mea fa'afoliga i fafo i le vevela o le potu (20-25 ℃) mo le sili atu i le 30min, fa'atasi a'o le'i fa'aoga.

9.2.2 Aumai i fafo microwells o lo'o mana'omia ma toe fa'afo'i le vaega o totoe i totonu o le taga sipi-loka ile 2-8℃ vave.

9.2.3 O le vaifofo fufulu vai e tatau ona toe fa'amafanafana i le vevela o le potu a'o le'i fa'aogaina.

9.2.4Numera:Faanumera uma tulaga microwell ma tulaga uma ma faʻataʻitaʻiga e tatau ona faʻataʻitaʻi faʻalua.Faamaumau tulaga ma tulaga faataitai.

9.2.5Fa'aopoopo fofo masani/fa'ata'ita'iga:Fa'aopoopo le 50 µl o vaifofo masani po'o le fa'ata'ita'iga ua saunia i vaieli talafeagai.Faaopopo le 50µl vaifofo antibody.Faafefiloi malie e ala i le luluina o le ipu ma le lima ma faʻagogo mo le 30 minute i le 25 ℃ ma le ufiufi.

9.2.6Fufulu:Aveese lemu le ufiufi ma fa'amama le vai mai vaieli ma fufulu microwells ile 250µl vaifofo fufulu (fofo 2) ile va ole 10s mo le 4-5 taimi.Fa'asusu le vai o lo'o totoe i se pepa fa'afefe (o le vaega o totoe o le ea e mafai ona fa'aumatia i le pito e le'o fa'aaogaina).

9.2.8.Enzyme conjugate:Fa'aopoopo le enzyme conjugate solution 100ml i vaieli ta'itasi, Fa'afefiloi malie e ala i le luluina o le ipu ma fa'asusu mo le 30min i le 25 ℃ ma le ufiufi.Toe fai le la'asaga fufulu.

9.2.8Lanu:Faaopopo le 50μl solution A ma le 50μl solution B i vaieli taitasi.Faafefiloi malie e ala i le luluina o le ipu ma le lima ma faʻafefe mo le 15 min i le 25 ℃ ma le ufiufi (vaʻai 12.8).

9.2.9Fua:Faaopopo le 50µl le vaifofo taofi i vaieli taitasi.Faafefiloi lemu e ala i le luluina o le ipu ma le lima ma fua le absorbance i le 450nm e faasaga i se ea avanoa (E fautuaina fua ma le lua-galu umi o le 450 / 630nm. Faitau le taunuuga i totonu o le 5min pe a uma le faaopoopoga o le fofo taofi. ) (E mafai foi ona tatou fuaina i le vaai. e aunoa ma se taofi fofo i le puupuu o le meafaigaluega ELIASA)

I'uga

10.1 pasene o le mitiia

O tau faʻatatau o le faʻaogaina o mea e maua mo tulaga faʻataʻitaʻiga ma faʻataʻitaʻiga e vaevaeina i le tau o le absorbance o le tulaga muamua (zero standard) ma faʻateleina i le 100%.Ole tulaga ole zero ua fa'apea ua tutusa ile 100% ma o tau o le absorbance o lo'o ta'ua i pasene.

Fa'asa'o (%) = B/B0 ×100%

B ——absorbance standard (poʻo faʻataʻitaʻiga)

B0 ——absorbance zero standard

10.2 Pi'o masani

Ia tusi se pi'o masani: Ave le tau o le mitiia o tulaga e pei o le y-axis, semi logarithmic o le fa'aogaina o le flumequine solutions standards solution (ppb) e pei o le x-axis.

--- O leflumequinefa'atonuga o fa'ata'ita'iga ta'itasi (ppb), lea e mafai ona faitau mai le fa'avasegaga fa'asolo, e fa'atele i le fa'atusatusaga fa'atele o fa'ata'ita'iga ta'itasi e mulimulita'ia, ma maua ai le fa'atonuga moni o fa'ata'ita'iga.

Mo le faʻaitiitiga o faʻamaumauga o pusa ELISA, ua atiaʻe polokalama faʻapitoa, lea e mafai ona tuʻuina atu i luga ole talosaga.

11. Ma'ale'ale, sa'o ma sa'o

Su'ega Ma'ale'ale0.3ppb

Meli Fa'ata'ita'iga fa'ameamea fa'aloloto: 2

Fa'atapula'a su'esu'ega

Fa'ata'ita'iga o le meli------------------------------------------------ -1ppb

Sa'o

Fa'ata'ita'iga meli ------------------------------------------ 90±20 %

Sa'o

Ole fa'asologa ole suiga ole pusa ELISA e itiiti ifo ile 10%.

12. Matauina

12.1 Ole a fa'aitiitia le fa'atatauga ole su'esu'ega e maua mo fa'ata'ita'iga ma fa'ata'ita'iga pe afai e le'i fa'atulafonoina mea fa'afofo ma fa'ata'ita'iga ile vevela potu (20-25℃).

12.2 Aua le faatagaina microwells e mago i le va o laasaga e aloese ai mai le le manuia o le toe fai ma faagaioia le isi laasaga i le taimi lava e uma ai le paʻu o le microwells holder.

12.3.Fa'atasi fa'atasi mea fa'afefiloi a'o le'i fa'aogaina.

12.4.Taofi lou pa'u mai le vaifofo taofi aua o le 2M H2SO4fofo.

12.5 Aua le fa'aogaina pusa ua tuai.Aua le fesuia'i le reagents o vaega eseese, aua o le a pa'u ai le maaleale.

12.6 Tulaga teuina:

Taofi pusa ELISA ile 2-8℃, aua le fa'aisa.Fa'amaufa'ailoga pusa microwell Aloese sa'o le susulu o le la a'o fa'a'oto uma.E fautuaina le ufiufi o ipu microtiter.

12.7 Fa'ailoga mo mea fa'afoliga ua leaga:

E tatau ona lafoa'i le vaifofo o le eleele pe afai e liu lanu.

E ono fa'aletonu mea fa'afoliga pe afai e itiiti ifo i le 0.5 (A450nm<0.5) le aofa'i (450/630nm).

12.8 O le tali lanu e manaʻomia le 15min pe a uma ona faʻaopoopo le Fofo A ma le Fofo B. Ma e mafai ona e faʻaumiumi le taimi o le incubation mai le 20min i le sili atu pe afai o le lanu e mama tele e fuafua.Aua le sili atu i le 25min, I se isi itu, faʻapuʻupuʻu le taimi faʻamaʻi lelei.

12.9 O le vevela tali sili ona lelei e 25 ℃.O le maualuga pe maualalo le vevela o le a taʻitaʻia ai suiga o le maaleale ma le faʻaogaina o tau.

13. Teuina

Tulaga teuina: 2-8℃.

Taimi e teu ai: 12 masina.


  • Muamua:
  • Sosoo ai:

  • Tusi lau savali iinei ma lafo mai ia i matou