προϊόν

Competitive Enzyme Immunoassay Kit for Quantitative Analysis of Tylosin

Σύντομη περιγραφή:

Η τυλοσίνη είναι ένα μακρολιδικό αντιβιοτικό, το οποίο εφαρμόζεται κυρίως ως αντιβακτηριδιακό και αντιμυκόπλασμα.Έχουν καθιερωθεί αυστηρά MRL δεδομένου ότι αυτό το φάρμακο μπορεί να οδηγήσει σε σοβαρές παρενέργειες σε ορισμένες ομάδες.

Αυτό το κιτ είναι ένα νέο προϊόν που βασίζεται στην τεχνολογία ELISA, το οποίο είναι γρήγορο, εύκολο, ακριβές και ευαίσθητο σε σύγκριση με την κοινή οργανική ανάλυση και χρειάζεται μόνο 1,5 ώρα σε μία λειτουργία, μπορεί να ελαχιστοποιήσει σημαντικά το σφάλμα λειτουργίας και την ένταση εργασίας.


Λεπτομέρεια προϊόντος

Ετικέτες προϊόντων

Competitive Enzyme Immunoassay Kit για

Ποσοτική Ανάλυση τωνΤυλοσίνη


1. Ιστορικό

Τυλοσίνηείναι ένα μακρολιδικό αντιβιοτικό, το οποίο εφαρμόζεται κυρίως ως αντιβακτηριδιακό και αντιμυκοπλασματικό.Έχουν καθιερωθεί αυστηρά MRL δεδομένου ότι αυτό το φάρμακο μπορεί να οδηγήσει σε σοβαρές παρενέργειες σε ορισμένες ομάδες.

Αυτό το κιτ είναι ένα νέο προϊόν που βασίζεται στην τεχνολογία ELISA, το οποίο είναι γρήγορο, εύκολο, ακριβές και ευαίσθητο σε σύγκριση με την κοινή οργανική ανάλυση και χρειάζεται μόνο 1,5 ώρα σε μία λειτουργία, μπορεί να ελαχιστοποιήσει σημαντικά το σφάλμα λειτουργίας και την ένταση εργασίας.

2. Αρχή δοκιμής

Αυτό το κιτ βασίζεται στην έμμεση-ανταγωνιστική τεχνολογία ELISA.Τα φρεάτια μικροτιτλοδότησης επικαλύπτονται με αντιγόνο σύζευξης.Το υπόλειμμα τυλοσίνης στο δείγμα ανταγωνίζεται το αντιγόνο που είναι επικαλυμμένο στην πλάκα μικροτιτλοδότησης για το αντίσωμα.Μετά την προσθήκη αντι-αντισώματος σημασμένου με ένζυμο, το υπόστρωμα TMB χρησιμοποιείται για να δείξει το χρώμα.Η απορρόφηση του δείγματος σχετίζεται αρνητικά με την τυλοσίνη που βρίσκεται σε αυτό, αφού συγκριθεί με την Πρότυπη Καμπύλη, πολλαπλασιασμένη με τον παράγοντα αραίωσης, μπορεί να υπολογιστεί η ποσότητα υπολειμμάτων τυλοσίνης στο δείγμα.

3. Εφαρμογές

Αυτό το κιτ μπορεί να χρησιμοποιηθεί σε ποσοτική και ποιοτική ανάλυση υπολειμμάτων τυλοσίνης σε ζωικό ιστό (κοτόπουλο, χοιρινό, πάπια) και γάλα, μέλι, αυγό κ.λπ.

4. Διασταυρούμενες αντιδράσεις

Tylosin……………………………………………..100%

Τιλμικοσίνη…………………………………………<2%

5. Απαιτούμενα υλικά

5.1 Εξοπλισμοί:

----Φασματοφωτόμετρο πλάκας μικροτίτλου (450nm/630nm)

----Όργανα περιστροφικού εξατμιστή ή ξήρανσης αζώτου

----ομογενοποιητής

----Σέικερ

----Φυγόκεντρος

----Αναλυτική ισορροπία (επαγωγή: 0,01 g)

----Βαθμολογημένη πιπέτα: 10ml

----Λαμπτήρας πιπέτας από καουτσούκ

----Ογκομετρική φιάλη: 10ml

----Φυγοκεντρικοί σωλήνες πολυστυρενίου: 50ml

----Μικροπιπέτες: 20-200ml, 100-1000ml

250ml-πολυπιπέτα

5.2 Αντιδραστήρια:

----Υδροξείδιο του νατρίου (NaOH, AR)

---- Διττανθρακικό νάτριο (NaHCO3,AR)

---- Ανθρακικό νάτριο (NaCO3, AR)

----Τριχλωροξικό οξύ (AR)

---- Ακετονιτρίλιο (AR)

----Οξεικός αιθυλεστέρας (AR)

┅┅n-εξάνιο (AR)

----Απιονισμένο νερό

6. Εξαρτήματα κιτ

l Πλάκα μικροτίτλου με 96 φρεάτια επικαλυμμένα με αντιγόνο

l Τυποποιημένα διαλύματα (5 φιάλες, 1 ml/φιάλη)

0ppb, 0,5ppb, 1,5ppb, 4,5ppb, 13,5ppb

l Τυπικός έλεγχος Spiking: (1ml/φιάλη)1 σελ./λεπτό

l Σύζευγμα ενζύμου 1ml…………………………κόκκινο καπάκι

l Διάλυμα αντισωμάτων 7ml…………………………πράσινο πώμα

l Διάλυμα A 7ml……………………….………λευκό καπάκι

l Διάλυμα B 7ml…………………………………..κόκκινο καπάκι

l Διακοπή διαλύματος 7 ml.………………………….κίτρινο πώμα

l 20×συμπυκνωμένο διάλυμα πλύσης 40ml

…………………………………………διαφανές καπάκι

l 4×συμπυκνωμένο διάλυμα εκχύλισης 50ml

………………………………………………….μπλε καπάκι

7. Προετοιμασία αντιδραστηρίων:

Λύση 1:Διάλυμα NaOH 0,1 mol/L

Ζυγίζουμε 0,4 g NaOH σε 100 ml απιονισμένου νερού και ανακατεύουμε πλήρως.

Λύση 2: 1mol/L διάλυμα NaOH

Ζυγίστε 4 g NaOH σε 100 ml απιονισμένου νερού και ανακατέψτε πλήρως.

Λύση 3: Ανθρακικό ρυθμιστικό άλας

Λύση1: 0,2 M PB

Διαλύονται 51,6 g Na2HPO4·12 Ω2Ο, 8,7 g NaH2PO4·2H2O με απιονισμένο νερό και αραιώστε στα 1000 ml.

Λύση2: Διάλυμα εκχύλισης

Αραιώστε το 2×συμπυκνωμένο διάλυμα εκχύλισης με απιονισμένο νερό σε αναλογία όγκου 1:1 (π.χ. 10 ml διαλύματος εκχύλισης 2× + 10 ml απιονισμένου νερού), το οποίο θα χρησιμοποιηθεί για την εξαγωγή δείγματος,αυτό το διάλυμα μπορεί να αποθηκευτεί στους 4℃ για 1 μήνα.

Λύση3: Διάλυμα πλύσης

Αραιώστε το 20×συμπυκνωμένο διάλυμα πλύσης με απιονισμένο νερό σε αναλογία όγκου 1:19 (π.χ. 5 ml διαλύματος πλύσης 20× + 95 ml απιονισμένου νερού), το οποίο θα χρησιμοποιηθεί για το πλύσιμο των πιάτων.Αυτό το διάλυμα μπορεί να αποθηκευτεί στους 4℃ για 1 μήνα.

8. Παρασκευάσματα δειγμάτων

8.1 Σημείωση και προφυλάξεις πριν από τη λειτουργία:

(α) Χρησιμοποιήστε μεμονωμένες άκρες στη διαδικασία του πειράματος και αλλάξτε τις άκρες όταν απορροφήσετε διαφορετικά αντιδραστήρια.

(β) Βεβαιωθείτε ότι όλα τα όργανα είναι καθαρά.

(γ) Διατηρήστε το δείγμα ιστού στην κατάψυξη.

(δ) Το προετοιμασμένο δείγμα θα πρέπει να χρησιμοποιείται για ανάλυση αμέσως.

8.2 Ζωϊκός ιστός (κοτόπουλο, χοιρινό κ.λπ.)

----Ομογενοποιήστε το δείγμα με ομογενοποιητή.

----Λάβετε 2,0±0,05 g ομογενοποιήματος σε σωλήνα φυγοκέντρησης πολυστυρενίου 50 ml.προσθέστε 2 ml 0,2M PB (λύση1), ανακινήστε να διαλυθεί, και στη συνέχεια προσθέστε 8 ml οξικού αιθυλεστέρα και ανακινήστε δυνατά για 3 λεπτά.

----Φυγόκεντρος για διαχωρισμό: 3000g / θερμοκρασία περιβάλλοντος / 5min.

---- Μεταφέρετε 4 ml της υπερκείμενης οργανικής φάσης σε γυάλινο σωλήνα 10 ml, στεγνώστε με υδατόλουτρο 50-60 ℃ κάτω από ρεύμα αερίου αζώτου.

----Διαλύουμε το ξηρό υπόλοιπο με 1ml n-εξάνιο, ανακατεύουμε για 30 δευτερόλεπτα για να διαλυθεί και μετά προσθέτουμε 1ml διαλύματος εκχύλισης (λύση2), αναδεύστε για 1 λεπτό.φυγόκεντρος για διαχωρισμό: 3000g / θερμοκρασία περιβάλλοντος / 5min

----Αφαιρέστε την υπερκείμενη φάση n-εξανίου.πάρτε 50 μl της υδατικής φάσης του υποστρώματος για ανάλυση.

 

Συντελεστής αραίωσης: 1

 

8.2 Γάλα

----Λάβετε 100μl δείγματος νωπού γάλακτος, ανακατεύετε με 900μl διαλύματος εκχύλισης (λύση2) και ανακατεύουμε εντελώς.

----Λάβετε 50μl από το παρασκευασμένο διάλυμα για ανάλυση.

 

Συντελεστής αραίωσης: 10

 

9. Διαδικασία ανάλυσης

9.1 Σημείωση πριν από τον προσδιορισμό

9.1.1Βεβαιωθείτε ότι όλα τα αντιδραστήρια και τα μικροπηγάδια είναι όλα σε θερμοκρασία δωματίου (20-25℃).

9.1.2Επιστρέψτε όλα τα υπόλοιπα αντιδραστήρια στο 2-8αμέσως μετά τη χρήση.

9.1.3Το σωστό πλύσιμο των μικροβυθισμάτων είναι ένα σημαντικό βήμα στη διαδικασία της ανάλυσης.είναι ο ζωτικός παράγοντας για την αναπαραγωγιμότητα της ανάλυσης ELISA.

9.1.4 Ααδειάστε το φως και καλύψτε τα μικροπηγάδια κατά την επώαση.

9.2 Βήματα ανάλυσης

9.2.1 Αφαιρέστε όλα τα αντιδραστήρια σε θερμοκρασία δωματίου (20-25℃) για περισσότερο από 30 λεπτά, ανακινήστε απαλά πριν από τη χρήση.

9.2.2 Βγάλτε τα μικροβυθίσματα που χρειάζονται και επιστρέψτε τα υπόλοιπα στη σακούλα με φερμουάρ στους 2-8℃ αμέσως.

9.2.3 Το αραιωμένο διάλυμα πλύσης θα πρέπει να ξαναθερμανθεί για να είναι σε θερμοκρασία δωματίου πριν από τη χρήση.

9.2.4Αριθμός:Οι αριθμημένες θέσεις κάθε μικροβυθίσματος και όλα τα πρότυπα και τα δείγματα θα πρέπει να εκτελούνται εις διπλούν.Καταγράψτε τα πρότυπα και τις θέσεις των δειγμάτων.

9.2.5Add πρότυπο διάλυμα/δείγμα και διάλυμα αντισωμάτων: Προσθέστε 50 μl τυπικού διαλύματος ((παρεχόμενο κιτ)) ή προετοιμασμένο δείγμα σε αντίστοιχα φρεάτια.Προσθέστε 50 μl διαλύματος αντισωμάτων (παρεχόμενο κιτ).Ανακατέψτε απαλά ανακινώντας το πιάτο με το χέρι και επωάστε για 30 λεπτά στους 37℃ με κάλυμμα.

9.2.6Πλύση: Αφαιρέστε απαλά το κάλυμμα και καθαρίστε το υγρό από τα πηγαδάκια και ξεπλύνετε τα μικροπηγάδια με 250μl αραιωμένου διαλύματος πλύσης (λύση3) σε διάστημα 10 δευτερολέπτων για 4-5 φορές.Απορροφήστε το υπόλοιπο νερό με απορροφητικό χαρτί (η υπόλοιπη φυσαλίδα αέρα μπορεί να εξαλειφθεί με αχρησιμοποίητο άκρο).

9.2.7Προσθήκη συζυγούς ενζύμου: Προσθέστε 100 ml διαλύματος συζυγούς ενζύμου (παρεχόμενο κιτ) σε κάθε φρεάτιο, ανακατεύουμε απαλά και επωάζουμε για 30 λεπτά στους 37℃ με κάλυμμα.Επαναλάβετε ξανά το βήμα πλύσης.

9.2.8Χρωματισμός: Προσθέστε 50 μl διαλύματος Α(παρεχόμενο κιτ) και 50 μl διαλύματος Β(παρεχόμενο κιτ) σε κάθε πηγάδι.Ανακατεύουμε απαλά και επωάζουμε για 15 λεπτά στους 37℃ με καπάκι.

9.2.9Μετρήσει: Προσθέστε 50 μl διαλύματος διακοπής (παρεχόμενο κιτ) σε κάθε πηγάδι.Ανακατέψτε απαλά και μετρήστε την απορρόφηση στα 450 nm (Συνιστάται μέτρηση με το διπλό μήκος κύματος 450/630 nm. Διαβάστε το αποτέλεσμα εντός 5 λεπτών μετά την προσθήκη του διαλύματος διακοπής).

10. Αποτελέσματα

10.1 Ποσοστό απορρόφησης

Οι μέσες τιμές των τιμών απορρόφησης που λαμβάνονται για τα πρότυπα και τα δείγματα διαιρούνται με την τιμή απορρόφησης του πρώτου προτύπου (μηδενικό πρότυπο ) και πολλαπλασιάζονται επί 100%.Το μηδενικό πρότυπο γίνεται έτσι ίσο με 100% και οι τιμές απορρόφησης αναφέρονται σε ποσοστά.

B

Απορρόφηση (%) = —— ×100%

B0

Β ——πρότυπο απορρόφησης (ή δείγμα)

B0 ——πρότυπο μηδενικής απορρόφησης

10.2 Τυπική καμπύλη

----Για να σχεδιάσετε μια τυπική καμπύλη: Πάρτε την τιμή απορρόφησης των προτύπων ως άξονα y, ημιλογαριθμική της συγκέντρωσης του διαλύματος προτύπων τυλοσίνης (ppb) ως άξονα x.

----Η συγκέντρωση τυλοσίνης κάθε δείγματος (ppb), η οποία μπορεί να διαβαστεί από την καμπύλη βαθμονόμησης, πολλαπλασιάζεται με τον αντίστοιχο συντελεστή αραίωσης κάθε δείγματος που ακολουθείται και προκύπτει η πραγματική συγκέντρωση του δείγματος.

Παρακαλώ σημειώστε:

έχει αναπτυχθεί ειδικό λογισμικό για την ανάλυση δεδομένων, το οποίο μπορεί να παρασχεθεί κατόπιν αιτήματος.

11. Ευαισθησία, ακρίβεια και ακρίβεια

Ευαισθησία δοκιμής:1,5 ppb

Οριο ανίχνευσης:

Ζωικός ιστός………………………………………1,5 ppb Γάλα…………………………………………………..15 ppb Ακρίβεια:

Ζωικός ιστός……………………………………80±15%

Γάλα……………………………………………………80±10%

Ακρίβεια:

Ο συντελεστής διακύμανσης του κιτ ELISA είναι μικρότερος από 10%.

12. Ειδοποίηση

12.1 Οι μέσες τιμές των τιμών απορρόφησης που λαμβάνονται για τα πρότυπα και τα δείγματα θα μειωθούν εάν τα αντιδραστήρια και τα δείγματα δεν έχουν ρυθμιστεί σε θερμοκρασία δωματίου (20-25℃).

12.2 Μην αφήνετε τα μικροπηγάδια να στεγνώσουν μεταξύ των βημάτων για να αποφύγετε την ανεπιτυχή αναπαραγωγιμότητα και λειτουργήστε το επόμενο βήμα αμέσως μετά το χτύπημα της θήκης των μικροϋποδοχών.

12.3 Ανακινήστε απαλά κάθε αντιδραστήριο πριν από τη χρήση.

12.4 Κρατήστε το δέρμα σας μακριά από το διάλυμα αναστολής γιατί είναι 0,5 MH2SO4λύση.

12.5 Μη χρησιμοποιείτε τα κιτ ξεπερασμένα.Μην ανταλλάξετε τα αντιδραστήρια διαφορετικών παρτίδων, διαφορετικά θα μειωθεί η ευαισθησία.

12.6 Διατηρήστε τα κιτ ELISA στους 2-8℃, μην παγώσετε.Σφραγίστε τις πλάκες μικροβυθισμάτων υποδοχών, Αποφύγετε το άμεσο ηλιακό φως κατά τη διάρκεια όλων των επωάσεων.Συνιστάται η κάλυψη των πλακών μικροτιτλοδότησης.

12.7 Το διάλυμα υποστρώματος θα πρέπει να εγκαταλειφθεί εάν πάρει χρώμα.Τα αντιδραστήρια μπορεί να χαλάσουν εάν η τιμή απορρόφησης (450/630 nm) του μηδενικού προτύπου είναι μικρότερη από 0,5 (A450nm<0,5).

12.8 Η αντίδραση χρωματισμού χρειάζεται 15 λεπτά μετά την προσθήκη του διαλύματος Α και του διαλύματος Β. Και μπορείτε να παρατείνετε το εύρος του χρόνου επώασης σε 20 λεπτά ή περισσότερο εάν το χρώμα είναι πολύ ανοιχτό για να προσδιοριστεί.Μην υπερβαίνετε ποτέ τα 30 λεπτά, αντίθετα, μειώστε σωστά τον χρόνο επώασης.

12.9 Η βέλτιστη θερμοκρασία αντίδρασης είναι 37℃.Υψηλότερη ή χαμηλότερη θερμοκρασία θα οδηγήσει σε αλλαγές στην ευαισθησία και τις τιμές απορρόφησης.

13. Αποθήκευση

Κατάσταση αποθήκευσης: 2-8℃.

Χρόνος αποθήκευσης: 12 μήνες.

 


  • Προηγούμενος:
  • Επόμενο:

  • Γράψτε το μήνυμά σας εδώ και στείλτε το σε εμάς