táirge

1. 1.Cúlra

Is antaibheathaigh leathan-speictream sintéiseacha iad nitrofurans, a úsáidtear go minic i dtáirgeadh ainmhithe mar gheall ar a sár-airíonna antibacterial agus cógas-chinéiteacha.Úsáideadh iad freisin mar thionscnóirí fáis i dtáirgeadh muc, éanlaith chlóis agus uisceach.I staidéir fhadtéarmacha le hainmhithe saotharlainne léirigh gur léirigh na máthairdhrugaí agus a gcuid meitibilítí tréithe carcanaigineacha agus só-ghineacha.Is é an toradh a bhí air seo ná toirmeasc ar nítreafúrán le haghaidh cóireáil ainmhithe a úsáidtear chun bia a tháirgeadh.Cuireadh cosc ​​ar na drugaí nitrofuran furaltadone, nitrofurantoin agus nitrofurazone a úsáid i dtáirgeadh bia-ainmhithe san AE i 1993, agus cuireadh cosc ​​ar úsáid furazolidone i 1995.

Ní mór an anailís ar iarmhar drugaí nitrofuran a bheith bunaithe ar bhrath na meitibilítí atá faoi cheangal fíocháin de na drugaí tuismitheora nitrofuran.Ós rud é go ndéantar na máthair-dhrugaí a mheitibiú go han-tapa, agus go gcoimeádfaidh na meitibilítí nitrofuran atá ceangailte le fíocháin ar feadh i bhfad, úsáidtear na meitibilítí seo mar sprioc chun mí-úsáid nitrofurans a bhrath, lena n-áirítear meitibilít Furazolidone (AOZ), meitibilít Furaltadone (AMOZ). ), meitibilít Nitrofurantoin (AHD) agus meitibilít Nitrofurazone (SEM).

Is iad LC-MS nó LC-MS/MS is coitianta a chinneann iarmhair AOZ.Léiríonn measúnachtaí imdhíonta einsímí, i gcomparáid le modhanna crómatagrafaíochta, buntáistí suntasacha maidir le híogaireacht, teorainn braite, trealamh teicniúil agus riachtanas ama.(Costas ama: 45min)

1. 2.Prionsabal Tástála

Tá an trealamh ELISA seo deartha chun AOZ a bhrath bunaithe ar phrionsabal na himdhíonachta einsímí indír-iomaíoch.Tá na toibreacha microtiter brataithe le antaigin gabhála BSA-nasctha.Tá AOZ sa sampla in iomaíocht leis an antaigin atá brataithe ar an pláta micrititer don antashubstaint a chuirtear leis.Tar éis comhchuingeach einsím a chur leis, úsáidtear foshraith chromogenic agus déantar an comhartha a thomhas le speictreafótaiméadar.Tá an ionsú comhréireach inbhéartach leis an tiúchan AOZ sa sampla.

1. 3 .Feidhmchláir

Is féidir an trealamh seo a úsáid chun anailís chainníochtúil agus cháilíochtúil a dhéanamh ar iarmhair AOZ infíocháin anima(matán, ae srl), mil.

1. 4.Tras-imoibrithe

Meitibilít Furazolidone (AOZ)……………………………..100%

Meitibilít Furaltadone (AMOZ)……………………<0.1%

Meitibilít nítrofurantoin (AHD)…………………<0.1%

Meitibilít nítrofurasóin (SEM)…………………..…<0.1%

Furazolidone…………………………………….…..…16.3%

Furaltadone………………………………………….…<1%

Nitrofurantoin…………………………………….…….…<1%

Nitrofurazone …………………………………………..…<1%

1. 5.Ábhair ag Teastáil

5.1Trealamh

---- speictreafótaiméadar pláta micreatitéar (450nm/630nm)

---- Éalaitheoir rothlach nó ionstraimí triomú nítrigine

---- Homogenizer / boilgeog

---- Shaker

---- meascthóir Vortex

---- Lártheifneoir

---- Iarmhéid anailíseach (ionduchtú: 0.01g)

---- Pípéad céimnithe: 10ml

---- Bolgán pípéad rubair

---- Fleascán toirte: 100ml

---- Fleascán gloine: 10ml

---- Feadán lártheifneoir polaistiréin: 2ml, 50ml

---- Micripéid: 20ul-200ul, 100ul-1000ul,

250ul-ilipéad

5.2Imoibrithe

---- Aicéatáit eitile (AR)

---- n-heacsán (nó n-heiptín) (AR)

---- fosfáit hidrigine dipotassium trihydrate

(K₂HPO₄.3H₂Ó) (AR)

---- Aigéad hidreaclórach tiubhaithe (HCl, AR)

----- meatánól

---- Hiodrocsaíd sóidiam (NaOH, AR)

---- Uisce dí-ianaithe

1. 6.Comhpháirteanna Kit

l Pláta micrititéar brataithe le hantaigin, 96 tobar

l Réitigh chaighdeánacha (6 bhuidéal, 1ml / buidéal)

0ppb,0.025ppb,0.075ppb,0.225ppb,0.675ppb,2.025ppb

l Rialú caighdeánach spiking : (1ml/buidéal)........100ppb

l Comhchuingeach einsím tiubhaithe 1ml...…..caipín dearg

l Caolaitheoirí comhchuingeacha einsím 10ml……..caipín glas

l Foshraith A 7ml………............................…..…..caipín bán

l Foshraith B 7ml………............caipín dearg

l Tuaslagán stad 7ml…………………………… caipín buí

l 20 × réiteach níocháin tiubhaithe 40ml

…………………………………….…… caipín trédhearcach

l 2 × tuaslagán eastóscadh tiubhaithe 60ml….caipín gorm

l 2-Nitrobenzaldehyde 15.1mg………………caipín bán

1. 7.Imoibrithe Ullmhúchán

Réiteach 1: imoibrí díorthach:

Cuir 10ml meatánóil isteach sa bhuidéal le 2-Nitrobenzaldehyde agus tuaslaig.(ag an tiúchan de 10mM).

Réiteach 2: 0.1MK₂HPO₄réiteach:

Meáchan 22.8g K₂HPO₄.3H₂O go 1L uisce dí-ianaithe a thuaslagadh.

Réiteach 3: 1M réiteach HCl

Tuaslaig 8.3ml Aigéad hidreaclórach tiubhaithe le huisce dí-ianaithe go 100ml.

Réiteach 4:Tuaslagán NaOH 1M

Tuaslaig 4g NaOH le huisce dí-ianaithe 100ml.

Réiteach 5: réiteach eastósctha:

Caolaigh tuaslagán eastósctha tiubhaithe 2 × le huisce dí-ianaithe sa chóimheas toirte 1:1.Is féidir an réiteach seo a chaomhnú ar feadh 1 mhí ag 4 ℃, a úsáidfear chun samplaí a bhaint astu.

Réiteach 6: réiteach nigh:

Caolaigh an tuaslagán níocháin tiubhaithe 20 × le huisce dí-ianaithe sa chandam toirte de 1:19, a úsáidfear chun na plátaí a ní.Is féidir an tuaslagán caolaithe seo a chaomhnú ar feadh 1 mhí ag 4 ℃.

1. 8.Ullmhóidí Samplacha

8.1Fógra agus réamhchúraimí roimh oibriú:

a) Bain úsáid as leideanna aonuaire sa turgnamh, agus athraigh na leideanna agus tú ag ionsú imoibrí éagsúla.

b) Déan cinnte go bhfuil gach uirlis turgnamhach glan.

c) is féidir an t-imoibrí díorthach a chaomhnú ag 2-8 ℃ ar feadh trí mhí;

d) Is féidir an réiteach HCl a chaomhnú ag teocht an tseomra ar feadh 3 mhí;

e) Is féidir an réiteach NaOH a chaomhnú ar feadh 3 mhí ag teocht an tseomra;

f) Coinnigh samplaí neamhchóireáilte i reo (-20 ℃);

g) Is féidir samplaí cóireáilte a chaomhnú ar feadh 24h ag 2-8 ℃ sa dorchadas.

8.2 Samplaí fíocháin ainmhithe agus ae:

---- Homogenize na samplaí le homogenizer;

---- Meáchan 1.0 ± 0.05g den sampla fíocháin aonchineálaithe isteach i bhfeadán lártheifneora polaistiréin 50ml.Cuir 4ml uisce dí-ianaithe, réiteach 0.5ml 1M HCl agus imoibrí díorthach 100ul (féach réiteach 1).Croith é ar feadh 2 nóiméad.

---- Gor ag 37 ℃ thar oíche (thart ar 16h);

---- Cuir 5ml 0.1MK leis₂HPO₄ (réiteach2), 0.4ml 1M NaOH (réiteach4) agus 5ml aicéatáit eitile.Croith go fíochmhar ar feadh 30s;

---- Lártheifneoir ag teocht an tseomra (20-25 ℃) ar feadh 10 nóiméad, ar a laghad 3000g;

---- Tóg 2.5ml den chéim orgánach sármhaith isteach i bhfeadán gloine glan 10ml, tirim le gás nítrigine 50-60 ℃ nó evaporator rothlach;

---- Tuaslaig an fuílleach tirim le 1ml n-heacsán (nó n- heptane), vortex ar feadh 30í, cuir tuaslagán eastósctha 1ml (réiteach5), vortex 1min, meascán go hiomlán.

---- Lártheifneoir ag teocht an tseomra (20-25^oC) ar feadh 5min, ar a laghad 3000g;

---- Bain an chéim orgánach supernatant;tóg 50μl de chéim uisce an tsubstráit le haghaidh measúnaithe.

8.4 Mil

---- meáigh 1.0 ± 0.05g den sampla meala aonchineálaithe isteach i bhfeadán lártheifneora polaistiréin 50ml;

---- Cuir 4ml uisce dí-ianaithe, 0.5ml 1M HCl (réiteach3) agus imoibrí díorthach 100μl (réiteach1);croith go hiomlán ar feadh 2min;

---- Gor ag 37 ℃ thar oíche (thart ar 16h);

---- Cuir 5ml 0.1MK leis₂HPO₄ (réiteach2), 0.4ml 1M NaOH (réiteach4) agus 5ml aicéatáit eitile, croith go fíochmhar ar feadh 30s;

---- Lártheifneoir ag teocht an tseomra (20-25 ℃) ar feadh 10 nóiméad, ar a laghad 3000g;

---- Tóg 2.5ml den chéim orgánach sárnata isteach i bhfeadán gloine glan 10ml, tirim le gás nítrigine 50-60 ℃ nó galú rothlach;

---- Tuaslaig an fuílleach tirim le 1ml n-heacsán (nó n- heptane), vortex ar feadh 30í, cuir tuaslagán eastósctha 1ml (réiteach5), vortex 1min, meascán go hiomlán.

---- Lártheifneoir ag teocht an tseomra (20-25^oC) ar feadh 10min, ar a laghad 3000g;

---- Bain an chéim orgánach supernatant;tóg 50μl de chéim uisce an tsubstráit le haghaidh measúnaithe.

1. 9.Próiseas measúnachta

9.1Fógra roimh mheasúnacht

9.1.1 Cinntigh go bhfuil gach imoibrí agus microwells go léir ag teocht an tseomra (20-25 ℃).

9.1.2 Cuir na himoibrithe go léir ar ais go 2-8 ℃ díreach tar éis iad a úsáid.

9.1.3 Is céim thábhachtach sa phróiseas measúnaithe é na microwells a ní i gceart;is é an fachtóir ríthábhachtach é maidir le hin-atáirgtheacht anailís ELISA.

9.1.4 Seachain an solas agus clúdaigh na micrithoibreacha le linn goir.

9.2 Céimeanna an Mheasúnaithe

9.2.1 Tóg amach gach imoibrí ag teocht an tseomra (20-25 ℃) ar feadh níos mó ná 30 nóiméad, homogenize roimh úsáid.

9.2.2 Faigh amach na microwells atá ag teastáil agus cuir an chuid eile ar ais isteach sa mhála zip-glas ag 2-8 ℃ láithreach.

9.2.3 Ba chóir an tuaslagán níocháin tiubhaithe agus an tuaslagán eastósctha tiubhaithe a athbheoú le bheith ag teocht an tseomra roimh úsáid.

9.2.4Uimhir:Ba chóir go ndéanfaí uimhriú ar gach suíomh microwell agus gach caighdeán agus sampla a reáchtáil i ndúblach.Taifead na caighdeáin agus seasaimh na samplaí.

9.2.5Caolú ar thuaslagán antasubstainte tiubhaithe: caolaigh an tuaslagán einsím tiubhaithe le caolaitheoirí comhchuingeacha einsíme sa chóimheas toirte de 1:10(tuaslagán einsím 1 huaire tiubhaithe: caolaitheoirí comhchuingeacha einsíme 10 fhillte).

9.2.6Cuir réiteach caighdeánach / sampla agus tuaslagán comhchuingeach einsíme leis: cuir 50µl de thuaslagán caighdeánach nó sampla ullmhaithe leis na toibreacha comhfhreagracha, cuir 50µl tuaslagán comhchuingeach einsíme.Measc go réidh tríd an pláta a chroitheadh ​​de láimh agus gor é ar feadh 30 nóiméad ag 25 ℃ le clúdach.

9.2.7Nigh: Bain an clúdach go réidh agus doirt an leacht amach as na toibreacha agus sruthlaigh na microwells le tuaslagán níocháin caolaithe 250µl (réiteach6) ag eatramh de 10s ar feadh 4-5 huaire.Ionsúigh an t-uisce iarmharach le páipéar ionsúiteach (is féidir an chuid eile mboilgeog aeir a dhíchur le barr neamhúsáidte).

9.2.8Dathúcháin: Cuir 50µl tuaslagán tsubstráit A agus tuaslagán tsubstráit 50ul B le gach tobar.Measc go réidh tríd an pláta a rocadh de láimh agus gor ar feadh 15 nóiméad ag 25 ℃ le clúdach (féach 12.8).

9.2.11Beart: Cuir 50µl an stop-tuaslagán le gach tobar.Measc go réidh tríd an pláta a rocadh de láimh agus tomhas an ionsúiteacht ag 450nm (Mol sé tomhas le dé-thonnfhad 450/630nm. Léigh an toradh laistigh de 5 nóiméad tar éis an tuaslagán stad a chur leis. )

10 Torthaí

10.1Céatadán ionsúcháin

Roinntear meánluachanna na luachanna ionsúcháin a fhaightear do na caighdeáin agus na samplaí faoi luach ionsúcháin an chéad chaighdeáin (caighdeán nialasach) agus iolraítear iad faoi 100%.Mar sin déantar an caighdeán nialasach cothrom le 100% agus luaitear na luachanna ionsúcháin i gcéatadáin.

=

B —— caighdeán ionsúcháin (nó sampla)

B0 ——caighdeán ionsúite nialasach

10.2Cuar Caighdeánach

---- Cuar caighdeánach a tharraingt: Glac luach ionsúcháin na gcaighdeán mar y-ais, leath-logartamach de thiúchan an tuaslagáin chaighdeánaigh AOZ (ppb) mar x-ais.

---- Déantar tiúchan AOZ de gach sampla (ppb), ar féidir a léamh ón gcuar calabrúcháin, a iolrú faoi fhachtóir caolaithe comhfhreagrach gach sampla ina dhiaidh sin, agus faightear an tiúchan samplach iarbhír.

Tabhair faoi deara le do thoil:

Forbraíodh bogearraí speisialta le haghaidh gach laghdú sonraí, ar féidir iad a sholáthar ach é a iarraidh.

Fachtóir caolaithe………………………………………..……2

10.Íogaireacht, cruinneas agus cruinneas

Íogaireacht: 0.025ppb

Teorainn braite:

Fíochán (matán, ae)…………………………0.1ppb

Mil ----------------------------------------------- -0.1ppb

Cruinneas:

Fíochán ainmhí (matán agus ae) ……...…………100±20%

Mil………………………………..…………....100±20%

Beachtas:Tá CV de threalamh ELISA níos lú ná 10%.

11.Fógra

12.1 Laghdófar meánluachanna na luachanna ionsúcháin a fhaightear do na caighdeáin agus na samplaí mura bhfuil na himoibrithe agus na samplaí rialaithe go teocht an tseomra (20-25 ℃).

12.2 Ná lig do microwells a thriomú idir céimeanna chun atáirgtheacht nár éirigh leo a sheachaint agus an chéad chéim eile a oibriú díreach tar éis an sealbhóir microwells a thapú.

12.3 Croith gach imoibrí go réidh roimh é a úsáid.

12.4 Coinnigh do chraiceann ar shiúl ón réiteach stad mar is é an 0.5MH é₂SO₄réiteach.

12.5 Ná húsáid na feisteáin as dáta.Ná malartóidh imoibrithe baisceanna éagsúla, nó laghdóidh sé an íogaireacht.

12.6 Coinníoll stórála: Coinnigh na feisteáin ELISA ag 2-8 ℃, ná reoite.Séalaigh plátaí micreathoibreacha scíthe, Seachain solas díreach le linn gach goir.Moltar na plátaí microtiter a chlúdach.

12.7 Ba chóir réiteach tsubstráit a thréigean má chasann sé dathanna.Féadfaidh na himoibrithe a bheith meathlaithe má tá luach ionsúcháin (450/630nm) an chaighdeáin nialais níos lú ná 0.5 (A450nm<0.5).

12.8 Caithfidh an t-imoibriú dathúcháin 15 nóiméad tar éis tuaslagán tsubstráit a chur leis;Is féidir an t-am goir a shíneadh go 20 nóiméad nó níos mó má tá an dath ró-éadrom le socrú.

12.9 Is é 25 ℃ an teocht imoibrithe is fearr.Beidh athruithe íogaireachta agus luachanna ionsúcháin mar thoradh ar theocht níos airde nó níos ísle.

12.Coinníoll stórála agus tréimhse stórála

Coinníoll stórála: 2-8 ℃.

Tréimhse stórála: 12months.