កញ្ចប់ Immunoassay អង់ស៊ីមប្រកួតប្រជែងសម្រាប់ការវិភាគបរិមាណនៃសារធាតុរំលាយអាហារ Furazolidone (AOZ)
- ១.ផ្ទៃខាងក្រោយ
Nitrofurans គឺជាថ្នាំអង់ទីប៊ីយោទិច វិសាលគមទូលំទូលាយសំយោគ ដែលត្រូវបានគេប្រើជាញឹកញាប់នៅក្នុងផលិតកម្មសត្វសម្រាប់លក្ខណៈសម្បត្តិប្រឆាំងនឹងបាក់តេរី និងឱសថសាស្រ្តដ៏ល្អរបស់វា។ពួកវាក៏ត្រូវបានគេប្រើជាអ្នកជំរុញកំណើនក្នុងផលិតកម្មជ្រូក បសុបក្សី និងក្នុងទឹកផងដែរ។នៅក្នុងការសិក្សារយៈពេលវែងជាមួយសត្វក្នុងមន្ទីរពិសោធន៍បានបង្ហាញថាថ្នាំមេ និងសារធាតុមេតាបូលីតរបស់ពួកវាបានបង្ហាញពីលក្ខណៈនៃសារធាតុបង្កមហារីក និងការផ្លាស់ប្តូរ។នេះបាននាំឱ្យមានការហាមឃាត់ nitrofurans សម្រាប់ការព្យាបាលសត្វដែលប្រើសម្រាប់ផលិតអាហារ។ថ្នាំ nitrofuran furaltadone, nitrofurantoin និង nitrofurazone ត្រូវបានហាមឃាត់មិនឱ្យប្រើប្រាស់ក្នុងផលិតកម្មសត្វជាអាហារនៅក្នុងសហភាពអឺរ៉ុបក្នុងឆ្នាំ 1993 ហើយការប្រើប្រាស់ថ្នាំ furazolidone ត្រូវបានហាមឃាត់ក្នុងឆ្នាំ 1995 ។
ការវិភាគនៃសំណល់ថ្នាំ nitrofuran ចាំបាច់ត្រូវផ្អែកលើការរកឃើញនៃសារធាតុមេតាបូលីតជាលិកានៃថ្នាំមេ nitrofuran ។ដោយសារថ្នាំមេត្រូវបានរំលាយបានយ៉ាងឆាប់រហ័ស ហើយសារធាតុរំលាយសារធាតុ nitrofuran ដែលចងជាប់នឹងជាលិកានឹងរក្សាបានរយៈពេលយូរ សារធាតុរំលាយអាហារទាំងនេះត្រូវបានប្រើជាគោលដៅក្នុងការរកឃើញការរំលោភបំពាននៃសារធាតុ nitrofurans ដែលរួមមាន Furazolidone metabolite (AOZ), Furaltadone metabolite (AMOZ ), Nitrofurantoin metabolite (AHD) និង Nitrofurazone metabolite (SEM) ។
សំណល់ AOZ ត្រូវបានកំណត់ជាទូទៅបំផុតដោយ LC-MS ឬ LC-MS/MS ។អង់ស៊ីម immunoassays បើប្រៀបធៀបជាមួយវិធីសាស្ត្រ chromatographic បង្ហាញពីគុណសម្បត្តិជាច្រើនទាក់ទងនឹងភាពប្រែប្រួល ដែនកំណត់នៃការរកឃើញ ឧបករណ៍បច្ចេកទេស និងតម្រូវការពេលវេលា។(ចំណាយពេលវេលា៖ ៤៥ នាទី)
- ២.គោលការណ៍សាកល្បង
ឧបករណ៍ ELISA នេះត្រូវបានរចនាឡើងដើម្បីរកមើល AOZ ដោយផ្អែកលើគោលការណ៍នៃ immunoassay អង់ស៊ីមប្រកួតប្រជែងដោយប្រយោល។អណ្តូង microtiter ត្រូវបានស្រោបដោយអង់ទីហ្សែនដែលភ្ជាប់ BSA ។AOZ នៅក្នុងគំរូប្រកួតប្រជែងជាមួយអង់ទីហ្សែនដែលស្រោបនៅលើចានមីក្រូទីតសម្រាប់អង់ទីករដែលបានបន្ថែម។បន្ទាប់ពីការបន្ថែមអង់ស៊ីម conjugate ស្រទាប់ខាងក្រោម chromogenic ត្រូវបានប្រើហើយសញ្ញាត្រូវបានវាស់ដោយ spectrophotometer ។ការស្រូបយកគឺសមាមាត្រច្រាសទៅនឹងកំហាប់ AOZ នៅក្នុងគំរូ។
- ៣.កម្មវិធី
ឧបករណ៍នេះអាចត្រូវបានប្រើក្នុងការវិភាគបរិមាណ និងគុណភាពនៃសំណល់ AOZ នៅក្នុងជាលិកា anima(សាច់ដុំ ថ្លើម ជាដើម) ទឹកឃ្មុំ។
- ៤.ប្រតិកម្មឆ្លង
សារធាតុរំលាយអាហារ Furazolidone (AOZ) …………………………..100%
សារធាតុរំលាយអាហារ Furaltadone (AMOZ) ……………………<0.1%
សារធាតុរំលាយអាហារ Nitrofurantoin (AHD) ……………………<0.1%
សារធាតុរំលាយអាហារ Nitrofurazone (SEM) …………………………………<0.1%
Furazolidone ………………………………………………… 16.3%
Furaltadone ……………………………………………….<1%
Nitrofurantoin ……………………………………………….…<1%
Nitrofurazone ……………………………………………….<1%
- ៥.សម្ភារៈដែលត្រូវការ
៥.១បរិក្ខារ
---- ឧបករណ៍វាស់ស្ទង់កម្រិតមីក្រូធីត (450nm / 630nm)
---- ឧបករណ៍រំហួតរ៉ូតារី ឬឧបករណ៍សម្ងួតអាសូត
---- ឧបករណ៍លាយ / ក្រពះ
---- ទឹកក្រឡុក
---- ឧបករណ៍លាយ Vortex
---- centrifuge
---- សមតុល្យវិភាគ (អាំងឌុចស្យុង៖ ០.០១ ក្រាម)
---- បំពង់បញ្ចប់ការសិក្សា៖ 10ml
---- អំពូលកៅស៊ូ
---- ចំណុះ 100ml
---- ដបកែវ: 10ml
---- បំពង់ centrifuge polystyrene: 2ml, 50ml
---- Micropipettes: 20ul-200ul, 100ul-1000ul,
250ul-multipipette
៥.២សារធាតុប្រតិកម្ម
---- អេទីលអាសេតាត (AR)
---- n-hexane (ឬ n-heptane) (AR)
---- ឌីប៉ូតាស្យូមអ៊ីដ្រូសែនផូស្វាតទ្រីអ៊ីដ្រាត
(K2HPO4.3 ហ2អូ) (AR)
---- អាស៊ីត hydrochloric ប្រមូលផ្តុំ (HCl, AR)
----- មេតាណុល
---- សូដ្យូមអ៊ីដ្រូសែន (NaOH, AR)
---- ទឹកដេអ៊ីយ៉ូដ
- ៦.សមាសធាតុកញ្ចប់
លីត្រ ចាន Microtiter ស្រោបដោយអង់ទីហ្សែន ៩៦ អណ្តូង
l ដំណោះស្រាយស្តង់ដារ (6 ដប 1ml / ដប)
0ppb,0.025ppb,0.075ppb,0.225ppb,0.675ppb,2.025ppb
l Spiking standard control: (1ml/ដប) .......100ppb
l អង់ស៊ីមចម្រុះ 1ml ...... មួកក្រហម
l Enzyme conjugate diluents 10ml ……….. មួកបៃតង
l ស្រទាប់ខាងក្រោម A 7ml …………………………………………..….. មួកពណ៌ស
l ស្រទាប់ខាងក្រោម B 7ml ………………………………………………….. មួកក្រហម
l បញ្ឈប់ដំណោះស្រាយ 7ml………………………………… មួកពណ៌លឿង
លីត្រ 20 × ដំណោះស្រាយលាងសម្អាត 40ml
……………………………………………… មួកថ្លា
l 2× ដំណោះស្រាយចម្រាញ់ចេញពីកំហាប់ 60ml….មួកខៀវ
លីត្រ 2-Nitrobenzaldehyde 15.1mg……………… មួកពណ៌ស
- ៧.ការរៀបចំសារធាតុ
ដំណោះស្រាយ 1: សារធាតុចំរុះ :
បន្ថែមមេតាណុល 10ml ទៅក្នុងដបដែលមាន 2-Nitrobenzaldehyde ហើយរំលាយ។(នៅកំហាប់ 10mM) ។
ដំណោះស្រាយ 2: 0.1MK2HPO4ដំណោះស្រាយ៖
ទំងន់ 22.8g K2HPO4.3 ហ2O ទៅ 1L នៃទឹក deionized ដើម្បីរំលាយ។
ដំណោះស្រាយ 3: ដំណោះស្រាយ 1M HCl
រំលាយ 8.3ml អាស៊ីត hydrochloric ប្រមូលផ្តុំ ជាមួយទឹក deionized ទៅ 100ml ។
ដំណោះស្រាយទី ៤៖ដំណោះស្រាយ 1M NaOH
រំលាយ NaOH 4g ជាមួយទឹក 100ml deionized ។
ដំណោះស្រាយ 5ដំណោះស្រាយការស្រង់ចេញ៖
រំលាយដំណោះស្រាយចម្រាញ់ចម្រាញ់ 2 × ជាមួយទឹក deionized ក្នុងសមាមាត្របរិមាណ 1: 1 ។ដំណោះស្រាយនេះអាចរក្សាទុកបានរយៈពេល 1 ខែនៅសីតុណ្ហភាព 4 ℃ ដែលនឹងត្រូវបានប្រើដើម្បីស្រង់សំណាក។
ដំណោះស្រាយ 6ដំណោះស្រាយលាង៖
ពនលាយសូលុយស្យុងលាងសម្អាតដែលមានកំហាប់ 20 × ជាមួយទឹក deionized ក្នុងបរិមាណ 1:19 ដែលនឹងត្រូវបានប្រើសម្រាប់លាងចាន។ដំណោះស្រាយពនឺនេះអាចរក្សាទុកបានរយៈពេល 1 ខែនៅសីតុណ្ហភាព 4 ℃។
- ៨.ការរៀបចំគំរូ
៨.១សេចក្តីជូនដំណឹង និងការប្រុងប្រយ័ត្នមុនពេលដំណើរការ៖
ក) សូមប្រើគន្លឹះមួយដងក្នុងការពិសោធន៍ ហើយផ្លាស់ប្តូរគន្លឹះនៅពេលស្រូបយកសារធាតុផ្សេងៗ។
ខ) ត្រូវប្រាកដថាឧបករណ៍ពិសោធន៍ទាំងអស់ស្អាត។
គ) សារធាតុនិស្សន្ទវត្ថុអាចត្រូវបានរក្សាទុកនៅសីតុណ្ហភាព 2-8 ℃ សម្រាប់រយៈពេលបីខែ។
ឃ) ដំណោះស្រាយ HCl អាចត្រូវបានរក្សាទុកនៅសីតុណ្ហភាពបន្ទប់រយៈពេល 3 ខែ។
ង) ដំណោះស្រាយ NaOH អាចត្រូវបានរក្សាទុករយៈពេល 3 ខែនៅសីតុណ្ហភាពបន្ទប់។
ច) រក្សាសំណាកដែលមិនបានព្យាបាលក្នុងក្លាសេ (-20 ℃);
g) សំណាកដែលបានព្យាបាលអាចត្រូវបានរក្សាទុកក្នុងរយៈពេល 24 ម៉ោងនៅសីតុណ្ហភាព 2-8 ℃ក្នុងភាពងងឹត។
8.2 គំរូជាលិកា និងថ្លើម៖
---- ធ្វើឱ្យសំណាកដូចគ្នាជាមួយ homogenizer;
---- ទំងន់ 1.0 ± 0.05 ក្រាមនៃគំរូជាលិកាដូចគ្នាចូលទៅក្នុងបំពង់ centrifuge polystyrene 50ml ។បន្ថែមទឹក deionized 4ml ដំណោះស្រាយ 0.5ml 1M HCl និង 100ul derivative reagent (សូមមើលដំណោះស្រាយ 1)។អ្រងួនវា 2 នាទី។
---- ដាំនៅសីតុណ្ហភាព ៣៧ អង្សារពេញមួយយប់ (ប្រហែល ១៦ ម៉ោង);
---- បន្ថែម 5ml 0.1MK2HPO4 (ដំណោះស្រាយ2), 0.4ml 1M NaOH (ដំណោះស្រាយ4) និង 5ml ethyl acetate ។អ្រងួនយ៉ាងខ្លាំងក្លារយៈពេល 30 ឆ្នាំ;
---- Centrifuge នៅសីតុណ្ហភាពបន្ទប់ (20-25 ℃) សម្រាប់ 10 នាទីយ៉ាងហោចណាស់ 3000 ក្រាម;
---- យក 2.5ml នៃដំណាក់កាលសរីរាង្គ supernatant ចូលទៅក្នុងបំពង់កែវស្អាត 10ml ស្ងួតជាមួយនឹងឧស្ម័នអាសូត 50-60 ℃ ឬរំហួត rotary;
---- រំលាយសំណល់ស្ងួតជាមួយ 1ml n-hexane (ឬ n- heptane) vortex សម្រាប់ 30s បន្ថែមដំណោះស្រាយ 1ml (ដំណោះស្រាយ5) vortex 1 នាទី, លាយទាំងស្រុង។
---- Centrifuge នៅសីតុណ្ហភាពបន្ទប់ (20-25oគ) រយៈពេល 5 នាទីយ៉ាងហោចណាស់ 3000 ក្រាម;
---- ដកដំណាក់កាលសរីរាង្គលើសលុប;យក 50 μlនៃដំណាក់កាលទឹកស្រទាប់ខាងក្រោមសម្រាប់ការវិភាគ។
8.4 ទឹកឃ្មុំ
---- ថ្លឹង 1.0±0.05g នៃគំរូទឹកឃ្មុំដូចគ្នាចូលទៅក្នុងបំពង់ centrifuge polystyrene 50ml;
---- បន្ថែមទឹក deionized 4ml, 0.5ml 1M HCl (ដំណោះស្រាយ3) និង 100μl derivative reagent (ដំណោះស្រាយ1);អ្រងួនទាំងស្រុងសម្រាប់ 2 នាទី;
---- ភ្ញាស់នៅសីតុណ្ហភាព ៣៧ អង្សារពេញមួយយប់ (ប្រហែល ១៦ ម៉ោង);
---- បន្ថែម 5ml 0.1MK2HPO4 (ដំណោះស្រាយ2), 0.4ml 1M NaOH (ដំណោះស្រាយ4) និង 5ml ethyl acetate, អ្រងួនយ៉ាងខ្លាំងក្លាសម្រាប់ 30s;
---- Centrifuge នៅសីតុណ្ហភាពបន្ទប់ (20-25 ℃) សម្រាប់ 10 នាទីយ៉ាងហោចណាស់ 3000 ក្រាម;
---- យក 2.5ml នៃដំណាក់កាលសរីរាង្គ supernatant ចូលទៅក្នុងបំពង់កែវស្អាត 10ml ស្ងួតជាមួយនឹងឧស្ម័នអាសូត 50-60 ℃ ឬរំហួត rotary;
---- រំលាយសំណល់ស្ងួតជាមួយ 1ml n-hexane (ឬ n- heptane) vortex សម្រាប់ 30s បន្ថែមដំណោះស្រាយ 1ml (ដំណោះស្រាយ5) vortex 1 នាទី, លាយទាំងស្រុង។
---- Centrifuge នៅសីតុណ្ហភាពបន្ទប់ (20-25oគ) រយៈពេល 10 នាទីយ៉ាងហោចណាស់ 3000 ក្រាម;
---- ដកដំណាក់កាលសរីរាង្គលើសលុប;យក 50 μlនៃដំណាក់កាលទឹកស្រទាប់ខាងក្រោមសម្រាប់ការវិភាគ។
- ៩.ដំណើរការវិភាគ
៩.១សេចក្តីជូនដំណឹងមុនពេលធ្វើតេស្ត
9.1.1 ត្រូវប្រាកដថាសារធាតុ reagents និង microwells ទាំងអស់នៅសីតុណ្ហភាពបន្ទប់ (20-25 ℃)។
9.1.2 ត្រឡប់សារធាតុដែលនៅសេសសល់ទាំងអស់ទៅ 2-8 ℃ភ្លាមៗបន្ទាប់ពីប្រើប្រាស់។
9.1.3 ការលាងសម្អាតមីក្រូវ៉េវឱ្យបានត្រឹមត្រូវគឺជាជំហានសំខាន់មួយនៅក្នុងដំណើរការនៃការវិភាគ។វាជាកត្តាសំខាន់ក្នុងការផលិតឡើងវិញនៃការវិភាគ ELISA ។
9.1.4 ជៀសវាងពន្លឺ និងគ្របដណ្តប់ microwells កំឡុងពេល incubation ។
9.2 ជំហាននៃការវិភាគ
9.2.1 យក reagents ទាំងអស់ចេញនៅសីតុណ្ហភាពបន្ទប់ (20-25℃) លើសពី 30min, ធ្វើដូចគ្នាមុនពេលប្រើ។
9.2.2 យក microwells ដែលត្រូវការចេញ ហើយប្រគល់អ្វីដែលនៅសល់ទៅក្នុងថង់ zip-lock នៅសីតុណ្ហភាព 2-8 ℃ភ្លាមៗ។
9.2.3 សូលុយស្យុងលាងសម្អាតប្រមូលផ្តុំ និងដំណោះស្រាយចម្រាញ់ដែលប្រមូលផ្តុំគួរតែត្រូវបានកំដៅឡើងវិញដើម្បីឱ្យនៅសីតុណ្ហភាពបន្ទប់មុនពេលប្រើប្រាស់។
៩.២.៤ចំនួន:លេខរៀងរាល់មុខតំណែង microwell និងស្តង់ដារ និងគំរូទាំងអស់គួរតែត្រូវបានដំណើរការដោយស្ទួន។កត់ត្រាទីតាំងស្តង់ដារ និងគំរូ។
៩.២.៥រំលាយដំណោះស្រាយអង្គបដិបក្ខប្រមូលផ្តុំ៖ រំលាយដំណោះស្រាយអង់ស៊ីមប្រមូលផ្តុំជាមួយសារធាតុរំលាយអង់ស៊ីមរួមក្នុងសមាមាត្របរិមាណ 1:10 (ដំណោះស្រាយអង់ស៊ីមប្រមូលផ្តុំ 1 ដង៖ សារធាតុរំលាយអង់ស៊ីម 10 ដង)។
៩.២.៦បន្ថែមដំណោះស្រាយស្តង់ដារ / គំរូនិងដំណោះស្រាយភ្ជាប់អង់ស៊ីម៖ បន្ថែម 50µl នៃដំណោះស្រាយស្តង់ដារ ឬគំរូដែលបានរៀបចំទៅអណ្តូងដែលត្រូវគ្នា បន្ថែមដំណោះស្រាយ enzyme conjugate 50µl ។លាយថ្នមៗដោយអង្រួនចានដោយដៃ ហើយញាត់រយៈពេល 30 នាទីនៅសីតុណ្ហភាព 25 ℃ជាមួយគម្រប។
៩.២.៧លាង៖ ដោះគម្របចេញថ្នមៗ ហើយចាក់រាវចេញពីអណ្តូង ហើយលាងជម្រះមីក្រូវ៉េវជាមួយនឹងដំណោះស្រាយលាងសម្អាត 250µl (ដំណោះស្រាយ6) នៅចន្លោះពេល 10s សម្រាប់ 4-5 ដង។ស្រូបទឹកដែលនៅសេសសល់ជាមួយក្រដាសស្រូបយក (ពពុះខ្យល់ដែលនៅសល់អាចត្រូវបានលុបចោលដោយប្រើព័ត៌មានជំនួយដែលមិនប្រើ) ។
៩.២.៨ការលាបពណ៌៖ បន្ថែមដំណោះស្រាយស្រទាប់ខាងក្រោម 50µl A និងដំណោះស្រាយស្រទាប់ខាងក្រោម 50ul B ទៅអណ្តូងនីមួយៗ។លាយថ្នមៗដោយអង្រួនចានដោយដៃ ហើយញាស់រយៈពេល 15 នាទីនៅសីតុណ្ហភាព 25 ℃ ជាមួយគម្រប (សូមមើល 12.8) ។
៩.២.១១វាស់៖ បន្ថែម 50µl ដំណោះស្រាយបញ្ឈប់ទៅក្នុងអណ្តូងនីមួយៗ។លាយថ្នមៗដោយអង្រួនចានដោយដៃ ហើយវាស់ការស្រូបនៅកម្រិត 450nm (វាបានស្នើរង្វាស់ជាមួយរលកពីរនៃ 450/630nm ។ អានលទ្ធផលក្នុងរយៈពេល 5 នាទីបន្ទាប់ពីការបន្ថែមដំណោះស្រាយបញ្ឈប់។ )
10 លទ្ធផល
១០.១ការស្រូបយកភាគរយ
តម្លៃមធ្យមនៃតម្លៃស្រូបទាញដែលទទួលបានសម្រាប់ស្តង់ដារ និងគំរូត្រូវបានបែងចែកដោយតម្លៃស្រូបនៃស្តង់ដារទីមួយ (ស្តង់ដារសូន្យ) និងគុណនឹង 100%។ដូច្នេះស្តង់ដារសូន្យត្រូវបានបង្កើតឡើងស្មើនឹង 100% ហើយតម្លៃស្រូបយកត្រូវបានដកស្រង់ជាភាគរយ។
=
ខ - ស្តង់ដារស្រូបយក (ឬគំរូ)
B0 — ស្តង់ដារស្រូបយកសូន្យ
១០.២ខ្សែកោងស្តង់ដារ
---- ដើម្បីគូរខ្សែកោងស្តង់ដារ៖ យកតម្លៃស្រូបនៃស្តង់ដារជាអ័ក្ស y, លោការីតពាក់កណ្តាលនៃការប្រមូលផ្តុំនៃដំណោះស្រាយស្តង់ដារ AOZ (ppb) ជាអ័ក្ស x ។
---- កំហាប់ AOZ នៃសំណាកនីមួយៗ (ppb) ដែលអាចអានបានពីខ្សែកោងក្រិតត្រូវបានគុណនឹងកត្តា dilution ដែលត្រូវគ្នានៃសំណាកនីមួយៗដែលធ្វើតាម ហើយការប្រមូលផ្តុំជាក់ស្តែងនៃគំរូត្រូវបានទទួល។
សូមកត់ចំណាំ:
កម្មវិធីពិសេសត្រូវបានបង្កើតឡើងសម្រាប់ការកាត់បន្ថយទិន្នន័យទាំងអស់ ដែលអាចត្រូវបានផ្តល់ជូនតាមការស្នើសុំ។
កត្តារំលាយ…………………………………………..…………… ២
១០.ភាពរសើប ភាពត្រឹមត្រូវ និងភាពជាក់លាក់
ភាពរសើប: 0.025ppb
ដែនកំណត់នៃការរកឃើញ៖
ជាលិកា (សាច់ដុំ ថ្លើម) …………………………0.1ppb
ទឹកឃ្មុំ ------------------------------------------------- -0.1ppb
ភាពត្រឹមត្រូវ:
ជាលិកាសត្វ (សាច់ដុំ និងថ្លើម) …………………100±20%
ទឹកឃ្មុំ ………………………………..…………. 100±20%
ភាពជាក់លាក់៖CV នៃ ELISA kit គឺតិចជាង 10% ។
១១.សេចក្តីជូនដំណឹង
12.1 តម្លៃមធ្យមនៃតម្លៃស្រូបទាញដែលទទួលបានសម្រាប់ស្តង់ដារ និងសំណាកគំរូនឹងត្រូវបានកាត់បន្ថយ ប្រសិនបើសារធាតុប្រតិកម្ម និងសំណាកមិនត្រូវបានគ្រប់គ្រងទៅសីតុណ្ហភាពបន្ទប់ (20-25 ℃)។
12.2 កុំអនុញ្ញាតឱ្យ microwells ស្ងួតនៅចន្លោះជំហាន ដើម្បីជៀសវាងការផលិតឡើងវិញដែលមិនបានជោគជ័យ ហើយដំណើរការជំហានបន្ទាប់ភ្លាមៗបន្ទាប់ពីប៉ះរន្ធ microwells។
12.3 អ្រងួនសារធាតុនីមួយៗថ្នមៗមុនពេលប្រើ។
12.4 រក្សាស្បែករបស់អ្នកឱ្យឆ្ងាយពីដំណោះស្រាយបញ្ឈប់សម្រាប់វាគឺ 0.5MH2SO4ដំណោះស្រាយ។
12.5 កុំប្រើឧបករណ៍ហួសសម័យ។កុំផ្លាស់ប្តូរសារធាតុនៃបាច់ផ្សេងៗគ្នា បើមិនដូច្នោះទេ វានឹងទម្លាក់ភាពរសើប។
12.6 លក្ខខណ្ឌផ្ទុក៖ ទុកឧបករណ៍ ELISA នៅសីតុណ្ហភាព 2-8 ℃ កុំបង្កក។បិទផ្លាកមីក្រូវ៉េវ ជៀសវាងពន្លឺព្រះអាទិត្យត្រង់ក្នុងអំឡុងពេលភ្ញាស់ទាំងអស់។ការគ្របដណ្តប់ចានមីក្រូទីតត្រូវបានណែនាំ។
12.7 ដំណោះស្រាយស្រទាប់ខាងក្រោមគួរតែត្រូវបានបោះបង់ចោលប្រសិនបើវាប្រែពណ៌។សារធាតុប្រតិកម្មអាចកាន់តែយ៉ាប់យ៉ឺន ប្រសិនបើតម្លៃស្រូបយក (450/630nm) នៃស្តង់ដារសូន្យគឺតិចជាង 0.5 (A450nm<0.5)។
12.8 ប្រតិកម្មពណ៌ត្រូវការ 15 នាទីបន្ទាប់ពីការបន្ថែមដំណោះស្រាយស្រទាប់ខាងក្រោម។អ្នកអាចពន្យាររយៈពេលភ្ញាស់ដល់ 20 នាទី ឬច្រើនជាងនេះ ប្រសិនបើពណ៌ស្រាលពេកក្នុងការកំណត់។ មិនត្រូវលើសពី 25 នាទីឡើយ ផ្ទុយទៅវិញ កាត់បន្ថយពេលវេលាភ្ញាស់ឱ្យបានត្រឹមត្រូវ។
12.9 សីតុណ្ហភាពប្រតិកម្មល្អបំផុតគឺ 25 ℃។សីតុណ្ហភាពខ្ពស់ ឬទាបនឹងនាំទៅរកការផ្លាស់ប្តូរនៃភាពប្រែប្រួល និងតម្លៃស្រូបទាញ។
១២.លក្ខខណ្ឌផ្ទុក និងរយៈពេលផ្ទុក
លក្ខខណ្ឌផ្ទុក: 2-8 ℃។
រយៈពេលផ្ទុក៖ ១២ ខែ.