ຜະ​ລິດ​ຕະ​ພັນ

1. 1.ຄວາມເປັນມາ

Nitrofurans ແມ່ນຢາຕ້ານເຊື້ອທີ່ສັງເຄາະຢ່າງກວ້າງຂວາງ, ເຊິ່ງຖືກໃຊ້ເລື້ອຍໆໃນການຜະລິດສັດສໍາລັບຄຸນສົມບັດຕ້ານເຊື້ອແບັກທີເຣັຍແລະ pharmacokinetic ທີ່ດີເລີດຂອງມັນ.ພວກມັນຍັງຖືກນຳໃຊ້ເປັນຕົວສົ່ງເສີມການຂະຫຍາຍຕົວໃນການຜະລິດໝູ, ສັດປີກ ແລະ ສິນໃນນ້ຳ.ໃນການສຶກສາໄລຍະຍາວກັບສັດທົດລອງໄດ້ຊີ້ໃຫ້ເຫັນວ່າຢາຂອງພໍ່ແມ່ແລະ metabolites ຂອງມັນສະແດງໃຫ້ເຫັນລັກສະນະທີ່ເປັນມະເຮັງແລະ mutagenic.ນີ້ໄດ້ນໍາໄປສູ່ການຫ້າມ nitrofurans ສໍາລັບການປິ່ນປົວສັດທີ່ໃຊ້ໃນການຜະລິດອາຫານ.ຢາເສບຕິດ nitrofuran furaltadone, nitrofurantoin ແລະ nitrofurazone ໄດ້ຖືກຫ້າມຈາກການນໍາໃຊ້ໃນການຜະລິດອາຫານສັດໃນ EU ໃນປີ 1993, ແລະການນໍາໃຊ້ຂອງ furazolidone ໄດ້ຖືກຫ້າມໃນປີ 1995.

ການວິເຄາະການຕົກຄ້າງຂອງຢາ nitrofuran ຈໍາເປັນຕ້ອງໄດ້ອີງໃສ່ການກວດພົບຂອງຈຸລັງ metabolites ຜູກມັດຂອງຢາ nitrofuran ພໍ່ແມ່.ເນື່ອງຈາກຢາຂອງພໍ່ແມ່ຖືກເຜົາຜະຫລານຢ່າງໄວວາ, ແລະເນື້ອເຍື່ອທີ່ຜູກມັດ nitrofuran metabolites ຈະຮັກສາໄວ້ເປັນເວລາດົນນານ, metabolites ເຫຼົ່ານີ້ຖືກນໍາໃຊ້ເປັນເປົ້າຫມາຍໃນການກວດສອບການລ່ວງລະເມີດຂອງ nitrofurans, ເຊິ່ງລວມມີ Furazolidone metabolite (AOZ), Furaltadone metabolite (AMOZ. ), Nitrofurantoin metabolite (AHD) ແລະ Nitrofurazone metabolite (SEM).

AOZ-residues ແມ່ນຖືກກໍານົດໂດຍ LC-MS ຫຼື LC-MS/MS.enzyme immunoassays, ເມື່ອປຽບທຽບກັບວິທີການ chromatographic, ສະແດງໃຫ້ເຫັນຄວາມໄດ້ປຽບຢ່າງຫຼວງຫຼາຍກ່ຽວກັບຄວາມອ່ອນໄຫວ, ຈໍາກັດການກວດພົບ, ອຸປະກອນດ້ານວິຊາການແລະຄວາມຕ້ອງການເວລາ.(ຄ່າ​ໃຊ້​ຈ່າຍ​ທີ່​ໃຊ້​ເວ​ລາ​: 45 ນາ​ທີ​)

1. 2.ຫຼັກການການທົດສອບ

ຊຸດ ELISA ນີ້ຖືກອອກແບບມາເພື່ອກວດຫາ AOZ ໂດຍອີງໃສ່ຫຼັກການຂອງ immunoassay enzyme ທີ່ແຂ່ງຂັນທາງອ້ອມ.ຂຸມ microtiter ໄດ້ຖືກເຄືອບດ້ວຍ antigen ທີ່ເຊື່ອມຕໍ່ BSA.AOZ ໃນຕົວຢ່າງຈະແຂ່ງຂັນກັບ antigen ທີ່ເຄືອບຢູ່ໃນແຜ່ນ microtiter ສໍາລັບ antibody ເພີ່ມ.ຫຼັງຈາກການເພີ່ມຂອງ enzyme conjugate, substrate chromogenic ຖືກນໍາໃຊ້ແລະສັນຍານໄດ້ຖືກວັດແທກໂດຍ spectrophotometer.ການດູດຊຶມແມ່ນອັດຕາສ່ວນກົງກັນຂ້າມກັບຄວາມເຂັ້ມຂົ້ນຂອງ AOZ ໃນຕົວຢ່າງ.

1. 3.ຄໍາຮ້ອງສະຫມັກ

ຊຸດນີ້ສາມາດຖືກນໍາໃຊ້ໃນການວິເຄາະປະລິມານແລະຄຸນນະພາບຂອງ AOZ residue ໃນເນື້ອເຍື່ອສັດ(ກ້າມເນື້ອ, ຕັບແລະອື່ນໆ), ນໍ້າເຜິ້ງ.

1. 4.ປະຕິກິລິຍາຂ້າມ

Furazolidone metabolite (AOZ)…………………………..100%

Furaltadone metabolite (AMOZ)……………………<0.1%

Nitrofurantoin metabolite (AHD)……………………<0.1%

Nitrofurazone metabolite (SEM) ………………………………<0.1%

Furazolidone…………………………………….…..…16.3%

Furaltadone…………………………………………………….…<1%

Nitrofurantoin…………………………………….…….…<1%

Nitrofurazone…………………………………………..…<1%

1. 5.ວັດສະດຸທີ່ຕ້ອງການ

5.1ອຸປະກອນ

---- ເຄື່ອງວັດແທກແຜ່ນ microtiter (450nm / 630nm)

---- ເຄື່ອງ​ລະ​ເຫີຍ Rotary ຫຼື​ເຄື່ອງ​ມື​ເຮັດ​ໃຫ້​ແຫ້ງ​ໄນ​ໂຕຣ​ເຈນ​

---- Homogenizer / ກະເພາະອາຫານ

---- ເຄື່ອງສັ່ນ

---- ເຄື່ອງປະສົມ Vortex

----ສູນ​ກາງ

---- ການດຸ່ນດ່ຽງການວິເຄາະ (inductance: 0.01g)

---- pipette ຈົບການສຶກສາ: 10ml

---- ທໍ່ທໍ່ຢາງ

---- ປະລິມານ: 100ml

---- ແກ້ວ: 10ml

---- ທໍ່ centrifuge polystyrene: 2ml, 50ml

---- Micropipettes: 20ul-200ul, 100ul-1000ul,

250ul-multipipette

5.2ທາດປະສົມ

----ເອທິລອາຊີຕາດ (AR)

----n-hexane (ຫຼື n-heptane) (AR)

---- Dipotassium hydrogen phosphate trihydrate

(K₂HPO₄.3ຊ₂O) (AR)

----ອາຊິດ hydrochloric ເຂັ້ມຂຸ້ນ (HCl, AR)

----- ເມທານອນ

---- ໂຊດຽມ hydroxide (NaOH, AR)

---- ນ້ໍາ Deionized

1. 6.ອົງປະກອບຊຸດ

l ແຜ່ນ Microtiter ເຄືອບດ້ວຍ antigen, 96 ຂຸມ

l ວິທີແກ້ໄຂມາດຕະຖານ (6 ຂວດ, 1ml / ຕຸກ)

0ppb,0.025ppb,0.075ppb,0.225ppb,0.675ppb,2.025ppb

l ການ​ຄວບ​ຄຸມ​ມາດ​ຕະ​ຖານ Spiking : (1ml / ຂວດ​) .......100ppb

l ເອນໄຊເຂັ້ມຂົ້ນ conjugate 1ml...... ຝາແດງ

l Enzyme conjugate diluents 10ml………..ສີຂຽວ

l Substrate A 7ml ……………………………………..…..….. ຝາສີຂາວ

l Substrate B 7ml………………………………………….….. ຝາສີແດງ

l Stop solution 7ml………………………………… ຝາສີເຫລືອງ

l 20× ນໍ້າສະອາດເຂັ້ມຂຸ້ນ 40ml

………………………………………….…… ໝວກໂປ່ງໃສ

l 2× ສານສະກັດຈາກເຂັ້ມຂຸ້ນ 60ml….ໝວກສີຟ້າ

l 2-Nitrobenzaldehyde 15.1mg………………ຝາສີຂາວ

1. 7.ການກະກຽມ Reagents

ການແກ້ໄຂ 1: ທາດປະສົມອະນຸພັນ:

ຕື່ມ 10ml ຂອງ methanol ໃສ່ຂວດທີ່ມີ 2-Nitrobenzaldehyde ແລະລະລາຍ.(ໃນຄວາມເຂັ້ມຂຸ້ນຂອງ 10mM).

ການແກ້ໄຂ 2: 0.1MK₂HPO₄ການແກ້ໄຂ:

ນ້ຳໜັກຄຳ 22.8g₂HPO₄.3ຊ₂O ກັບ 1L ຂອງນ້ໍາ deionized ເພື່ອລະລາຍ.

ການແກ້ໄຂ 3: 1M HCl solution

ລະລາຍ 8.3ml ອາຊິດ hydrochloric ເຂັ້ມຂຸ້ນ ດ້ວຍນ້ໍາ deionized ເຖິງ 100ml.

ການແກ້ໄຂ 4:ການແກ້ໄຂ 1M NaOH

ລະລາຍ 4g NaOH ດ້ວຍນ້ໍາ deionized 100ml.

ການແກ້ໄຂ 5: ການ​ແກ້​ໄຂ​ການ​ສະ​ກັດ​:

ເຈືອຈາງ 2 × ການແກ້ໄຂການສະກັດເອົາຄວາມເຂັ້ມຂຸ້ນດ້ວຍນ້ໍາ deionized ໃນອັດຕາສ່ວນປະລິມານຂອງ 1: 1.ການແກ້ໄຂນີ້ສາມາດຖືກຮັກສາໄວ້ເປັນເວລາ 1 ເດືອນຢູ່ທີ່ 4 ℃, ເຊິ່ງຈະຖືກນໍາໃຊ້ເພື່ອສະກັດເອົາຕົວຢ່າງ.

ການແກ້ໄຂ 6: ການ​ແກ້​ໄຂ​ການ​ລ້າງ​:

ເຈືອຈາງການແກ້ໄຂການລ້າງຄວາມເຂັ້ມຂຸ້ນ 20× ດ້ວຍນ້ໍາ deionized ໃນປະລິມານຂອງ 1:19, ເຊິ່ງຈະຖືກນໍາໃຊ້ເພື່ອລ້າງແຜ່ນ.ການແກ້ໄຂເຈືອຈາງນີ້ສາມາດຮັກສາໄວ້ໄດ້ 1 ເດືອນຢູ່ທີ່ 4 ℃.

1. 8.ການກະກຽມຕົວຢ່າງ

8.1ແຈ້ງ​ການ​ແລະ​ລະ​ມັດ​ລະ​ວັງ​ກ່ອນ​ການ​ດໍາ​ເນີນ​ງານ​:

a) ກະລຸນາໃຊ້ຄໍາແນະນໍາແບບດຽວໃນການທົດລອງ, ແລະປ່ຽນຄໍາແນະນໍາໃນເວລາທີ່ດູດຊຶມ reagent ທີ່ແຕກຕ່າງກັນ.

b) ໃຫ້ແນ່ໃຈວ່າເຄື່ອງມືທົດລອງທັງຫມົດແມ່ນສະອາດ.

c) ສານອະນຸພັນສາມາດເກັບຮັກສາໄວ້ຢູ່ທີ່ 2-8 ℃ສໍາລັບສາມເດືອນ;

d) ການແກ້ໄຂ HCl ສາມາດຖືກຮັກສາໄວ້ໃນອຸນຫະພູມຫ້ອງສໍາລັບ 3 ເດືອນ;

e) ການແກ້ໄຂ NaOH ສາມາດເກັບຮັກສາໄວ້ໄດ້ 3 ເດືອນໃນອຸນຫະພູມຫ້ອງ;

f) ເກັບຕົວຢ່າງທີ່ບໍ່ໄດ້ຮັບການປິ່ນປົວຢູ່ໃນ freeze (-20 ℃);

g​) ຕົວ​ຢ່າງ​ທີ່​ໄດ້​ຮັບ​ການ​ປິ່ນ​ປົວ​ສາ​ມາດ​ໄດ້​ຮັບ​ການ​ອະ​ນຸ​ລັກ​ສໍາ​ລັບ 24h ທີ່ 2-8 ℃​ໃນ​ຄວາມ​ມືດ​.

8.2 ຕົວຢ່າງເນື້ອເຍື່ອສັດ ແລະຕັບ:

---- ເຮັດ​ໃຫ້​ຕົວ​ຢ່າງ​ເປັນ​ເອ​ກະ​ພາບ​ທີ່​ມີ homogenizer​;

---- ນ້ໍາຫນັກ 1.0±0.05g ຂອງຕົວຢ່າງເນື້ອເຍື່ອ homogenized ເຂົ້າໄປໃນທໍ່ centrifuge polystyrene 50ml.ເພີ່ມນ້ໍາ deionized 4ml, 0.5ml 1M HCl solution ແລະ 100ul derivative reagent (ເບິ່ງການແກ້ໄຂ 1).ສັ່ນມັນເປັນເວລາ 2 ນາທີ.

---- ອົບຢູ່ 37 ℃ ຄ້າງຄືນ (ປະມານ 16 ຊົ່ວໂມງ);

----ຕື່ມ 5ml 0.1MK₂HPO₄ (ການແກ້ໄຂ2), 0.4ml 1M NaOH (ການແກ້ໄຂ4) ແລະ 5ml ethyl acetate.ສັ່ນຢ່າງຮຸນແຮງສໍາລັບ 30s;

---- centrifuge ອຸນຫະພູມຫ້ອງ (20-25℃) ສໍາລັບ 10min, ຢ່າງຫນ້ອຍ 3000g;

---- ເອົາ 2.5ml ຂອງໄລຍະອິນຊີ supernatant ເຂົ້າໄປໃນທໍ່ແກ້ວສະອາດ 10ml, ແຫ້ງດ້ວຍອາຍແກັສໄນໂຕຣເຈນ 50-60 ℃ຫຼື evaporator rotary;

---- ເຮັດ​ໃຫ້​ລະລາຍ​ທີ່​ເຫຼືອ​ແຫ້ງ​ດ້ວຍ 1ml n-hexane (ຫຼື n- heptane), vortex ສໍາລັບ 30s, ຕື່ມ​ການ​ແກ້​ໄຂ​ການ​ສະ​ກັດ​ເອົາ 1ml (ການແກ້ໄຂ5), vortex 1min, ປະສົມຢ່າງສົມບູນ.

---- Centrifuge ຢູ່ອຸນຫະພູມຫ້ອງ (20-25^oC) ສໍາລັບ 5 ນາທີ, ຢ່າງຫນ້ອຍ 3000g;

---- ເອົາໄລຍະອິນຊີ supernatant;ເອົາ 50μl ຂອງໄລຍະນ້ໍາ substrate ສໍາລັບການວິເຄາະ.

8.4 ນໍ້າເຜິ້ງ

----ຊັ່ງນໍ້າໜັກ 1.0±0.05g ຂອງຕົວຢ່າງນໍ້າເຜິ້ງທີ່ເຮັດເປັນ homogenized ເຂົ້າໄປໃນທໍ່ centrifuge polystyrene 50ml;

---- ຕື່ມນ້ໍາ deionized 4ml, 0.5ml 1M HCl (ການແກ້ໄຂ3) ແລະ 100μl derivative reagent (ການແກ້ໄຂ1);ສັ່ນຢ່າງສົມບູນສໍາລັບ 2 ນາທີ;

----Incubate ຢູ່ 37℃ ໃນ​ຄືນ (ປະ​ມານ 16h);

----ຕື່ມ 5ml 0.1MK₂HPO₄ (ການແກ້ໄຂ2), 0.4ml 1M NaOH (ການແກ້ໄຂ4) ແລະ 5ml ethyl acetate, ສັ່ນຢ່າງຮຸນແຮງສໍາລັບ 30s;

---- Centrifuge ຢູ່​ທີ່​ອຸນ​ຫະ​ພູມ​ຫ້ອງ (20-25℃​) ສໍາ​ລັບ​ການ 10min​, ຢ່າງ​ຫນ້ອຍ 3000g​;

---- ເອົາ 2.5ml ຂອງໄລຍະອິນຊີ supernatant ເຂົ້າໄປໃນທໍ່ແກ້ວສະອາດ 10ml, ແຫ້ງດ້ວຍອາຍແກັສໄນໂຕຣເຈນ 50-60 ℃ຫຼື evaporator rotary;

---- ເຮັດ​ໃຫ້​ລະ​ລາຍ​ທີ່​ເຫຼືອ​ແຫ້ງ​ດ້ວຍ 1ml n-hexane (ຫຼື n- heptane), vortex ສໍາ​ລັບ​ການ 30s, ເພີ່ມ​ການ​ແກ້​ໄຂ​ການ​ສະ​ກັດ​ເອົາ 1ml (ການແກ້ໄຂ5), vortex 1min, ປະສົມຢ່າງສົມບູນ.

---- Centrifuge ຢູ່ທີ່ອຸນຫະພູມຫ້ອງ (20-25^oC) ສໍາລັບ 10min, ຢ່າງຫນ້ອຍ 3000g;

---- ເອົາໄລຍະອິນຊີ supernatant;ເອົາ 50μl ຂອງໄລຍະນ້ໍາ substrate ສໍາລັບການວິເຄາະ.

1. 9.ຂະບວນການວິເຄາະ

9.1ແຈ້ງ​ການ​ກ່ອນ​ການ​ທົດ​ສອບ​

9.1.1 ໃຫ້ແນ່ໃຈວ່າ reagents ແລະ microwells ທັງຫມົດຢູ່ໃນອຸນຫະພູມຫ້ອງ (20-25 ℃).

9.1.2 ກັບຄືນ reagents ທັງຫມົດສ່ວນທີ່ເຫຼືອເປັນ 2-8 ℃ທັນທີຫຼັງຈາກການນໍາໃຊ້.

9.1.3 ການລ້າງໄມໂຄເວວຢ່າງຖືກຕ້ອງເປັນຂັ້ນຕອນສໍາຄັນໃນຂະບວນການກວດສອບ;ມັນເປັນປັດໃຈສໍາຄັນຕໍ່ການແຜ່ພັນຂອງການວິເຄາະ ELISA.

9.1.4 ຫຼີກລ່ຽງແສງສະຫວ່າງແລະປົກຫຸ້ມ microwells ໃນລະຫວ່າງການ incubation.

9.2 ຂັ້ນຕອນການວິເຄາະ

9.2.1 ເອົາ reagents ທັງ​ຫມົດ​ອອກ​ທີ່​ອຸນ​ຫະ​ພູມ​ຫ້ອງ (20-25℃​) ສໍາ​ລັບ​ການ​ຫຼາຍ​ກ​່​ວາ 30min​, ເຮັດ​ໃຫ້​ເປັນ​ homogeneous ກ່ອນ​ທີ່​ຈະ​ນໍາ​ໃຊ້​.

9.2.2 ເອົາ microwells ທີ່ຈໍາເປັນອອກແລະກັບຄືນສ່ວນທີ່ເຫຼືອເຂົ້າໄປໃນຖົງ zip-lock ຢູ່ທີ່ 2-8 ℃ທັນທີ.

9.2.3 ການແກ້ໄຂການລ້າງທີ່ເຂັ້ມຂຸ້ນແລະສານສະກັດທີ່ເຂັ້ມຂຸ້ນຄວນໄດ້ຮັບການອົບອຸ່ນຄືນໃຫມ່ເພື່ອໃຫ້ຢູ່ໃນອຸນຫະພູມຫ້ອງກ່ອນທີ່ຈະນໍາໃຊ້.

9.2.4ຈໍານວນ:ເລກທຸກຕໍາແໜ່ງໄມໂຄເວວ ແລະທຸກມາດຕະຖານ ແລະຕົວຢ່າງຄວນຈະຖືກດໍາເນີນການຊໍ້າກັນ.ບັນທຶກມາດຕະຖານແລະຕົວຢ່າງຕໍາແຫນ່ງ.

9.2.5ການເຈືອຈາງຂອງການແກ້ໄຂ antibody ເຂັ້ມຂຸ້ນ: ເຈືອຈາງການແກ້ໄຂ enzyme ເຂັ້ມຂຸ້ນດ້ວຍ enzyme conjugate diluents ໃນອັດຕາສ່ວນປະລິມານຂອງ 1:10 (1 ເທົ່າ enzymes ການແກ້ໄຂ: 10 ເທົ່າ enzyme conjugate diluents).

9.2.6ເພີ່ມການແກ້ໄຂມາດຕະຖານ / ຕົວຢ່າງແລະການແກ້ໄຂ enzyme conjugate: ເພີ່ມ 50µl ຂອງການແກ້ໄຂມາດຕະຖານຫຼືຕົວຢ່າງທີ່ກຽມໄວ້ກັບນ້ໍາດີ, ເພີ່ມ 50µl enzyme conjugate solution.ປະ​ສົມ​ຄ່ອຍໆ​ໂດຍ​ການ​ສັ່ນ​ແຜ່ນ​ດ້ວຍ​ຕົນ​ເອງ​ແລະ incubate ສໍາ​ລັບ​ການ 30 ນາ​ທີ​ທີ່ 25 ℃​ໂດຍ​ການ​ປົກ​ຫຸ້ມ​ຂອງ​.

9.2.7ລ້າງ: ເອົາຝາປິດອອກຄ່ອຍໆ ແລະ ຖອກນໍ້າອອກຈາກນໍ້າສ້າງ ແລະລ້າງໄມໂຄເວວດ້ວຍນໍ້າຢາລ້າງນໍ້າທີ່ລະລາຍ 250µl (ການແກ້ໄຂ6) ໃນໄລຍະຫ່າງຂອງ 10s ສໍາລັບ 4-5 ເທື່ອ.ດູດນ້ໍາທີ່ຕົກຄ້າງດ້ວຍກະດາດດູດຊຶມ (ຟອງອາກາດສ່ວນທີ່ເຫຼືອສາມາດຖືກກໍາຈັດດ້ວຍປາຍທີ່ບໍ່ໄດ້ໃຊ້).

9.2.8ສີ: ເພີ່ມ 50µl substrate solution A ແລະ 50ul substrate solution B ໃສ່ແຕ່ລະນໍ້າສ້າງ.ປະ​ສົມ​ຄ່ອຍໆ​ໂດຍ​ການ​ສັ່ນ​ແຜ່ນ​ດ້ວຍ​ຕົນ​ເອງ​ແລະ incubate ສໍາ​ລັບ​ການ 15 ນາ​ທີ​ທີ່ 25 ℃​ມີ​ຝາ​ປິດ (ເບິ່ງ 12.8​)​.

9.2.11ວັດແທກ: ຕື່ມ 50µl ການແກ້ໄຂຢຸດໃສ່ແຕ່ລະຂຸມ.ປະ​ສົມ​ຄ່ອຍໆ​ໂດຍ​ການ​ສັ່ນ​ແຜ່ນ​ດ້ວຍ​ຕົນ​ເອງ​ແລະ​ວັດ​ແທກ​ການ​ດູດ​ຊຶມ​ທີ່ 450nm (ມັນ​ແນະ​ນໍາ​ໃຫ້​ມີ​ການ​ວັດ​ແທກ​ທີ່​ມີ​ສອງ​ຄື້ນ​ເວ​ລາ 450/630nm​. ອ່ານ​ຜົນ​ໄດ້​ຮັບ​ພາຍ​ໃນ 5 ນາ​ທີ​ຫຼັງ​ຈາກ​ການ​ເພີ່ມ​ການ​ແກ້​ໄຂ​ຢຸດ​. )

10 ຜົນໄດ້ຮັບ

10.1ການດູດຊຶມເປີເຊັນ

ຄ່າສະເລ່ຍຂອງຄ່າການດູດຊຶມທີ່ໄດ້ຮັບສໍາລັບມາດຕະຖານແລະຕົວຢ່າງຖືກແບ່ງອອກດ້ວຍຄ່າການດູດຊຶມຂອງມາດຕະຖານທໍາອິດ (ມາດຕະຖານສູນ) ແລະຄູນ 100%.ດັ່ງນັ້ນມາດຕະຖານສູນແມ່ນເຮັດໃຫ້ເທົ່າກັບ 100% ແລະຄ່າການດູດຊຶມໄດ້ຖືກອ້າງອີງເປັນເປີເຊັນ.

=

B — ມາດ​ຕະ​ຖານ​ການ​ດູດ​ຊຶມ (ຫຼື​ຕົວ​ຢ່າງ​)

B0 — ມາດຕະຖານການດູດຊຶມສູນ

10.2ເສັ້ນໂຄ້ງມາດຕະຖານ

---- ເພື່ອແຕ້ມເສັ້ນໂຄ້ງມາດຕະຖານ: ເອົາຄ່າການດູດຊຶມຂອງມາດຕະຖານເປັນແກນ y, ເຄິ່ງ logarithmic ຂອງຄວາມເຂັ້ມຂຸ້ນຂອງການແກ້ໄຂມາດຕະຖານ AOZ (ppb) ເປັນແກນ x.

---- ຄວາມເຂັ້ມຂົ້ນຂອງ AOZ ຂອງແຕ່ລະຕົວຢ່າງ (ppb), ເຊິ່ງສາມາດອ່ານໄດ້ຈາກເສັ້ນໂຄ້ງການປັບຕົວ, ຖືກຄູນດ້ວຍປັດໃຈການເຈືອຈາງທີ່ສອດຄ້ອງກັນຂອງແຕ່ລະຕົວຢ່າງທີ່ປະຕິບັດຕາມ, ແລະຄວາມເຂັ້ມຂົ້ນຕົວຈິງຂອງຕົວຢ່າງແມ່ນໄດ້ຮັບ.

ກະລຸນາສັງເກດ:

ຊອບແວພິເສດໄດ້ຖືກພັດທະນາສໍາລັບການຫຼຸດຜ່ອນຂໍ້ມູນທັງຫມົດ, ເຊິ່ງສາມາດສະຫນອງໃຫ້ຕາມຄໍາຮ້ອງຂໍ.

ປັດໄຈການເຈືອຈາງ…………………………………………..……2

10.ຄວາມອ່ອນໄຫວ, ຄວາມຖືກຕ້ອງແລະຄວາມແມ່ນຍໍາ

ຄວາມອ່ອນໄຫວ: 0.025ppb

ຂີດຈຳກັດໃນການກວດຫາ:

ເນື້ອເຍື່ອ (ກ້າມເນື້ອ, ຕັບ)…………………………0.1ppb

ນໍ້າເຜີ້ງ ------------------------------------------------- -0.1ppb

ຄວາມຖືກຕ້ອງ:

ເນື້ອ​ເຍື່ອ​ສັດ (ກ້າມ​ຊີ້ນ​ແລະ​ຕັບ​) …………………100±20​%

ນໍ້າເຜິ້ງ ………………………………..………….100±20%

ຄວາມຊັດເຈນ:CV ຂອງຊຸດ ELISA ແມ່ນຫນ້ອຍກວ່າ 10%.

11.ແຈ້ງການ

12.1 ຄ່າ​ສະ​ເລ່ຍ​ຂອງ​ຄ່າ​ດູດ​ຊຶມ​ທີ່​ໄດ້​ຮັບ​ສໍາ​ລັບ​ມາດ​ຕະ​ຖານ​ແລະ​ຕົວ​ຢ່າງ​ຈະ​ຖືກ​ຫຼຸດ​ລົງ​ຖ້າ​ຫາກ​ວ່າ reagents ແລະ​ຕົວ​ຢ່າງ​ບໍ່​ໄດ້​ຮັບ​ການ​ຄວບ​ຄຸມ​ອຸນ​ຫະ​ພູມ​ຫ້ອງ (20-25℃​)​.

12.2 ຢ່າປ່ອຍໃຫ້ microwells ແຫ້ງລະຫວ່າງຂັ້ນຕອນເພື່ອຫຼີກເວັ້ນການແຜ່ພັນທີ່ບໍ່ສໍາເລັດຜົນແລະດໍາເນີນການຂັ້ນຕອນຕໍ່ໄປທັນທີຫຼັງຈາກແຕະທີ່ຖື microwells.

12.3 ສັ່ນນ້ຳຢາແຕ່ລະອັນຄ່ອຍໆກ່ອນນຳໃຊ້.

12.4 ຮັກສາຜິວຫນັງຂອງທ່ານອອກຈາກການແກ້ໄຂຢຸດສໍາລັບມັນແມ່ນ 0.5MH₂SO₄ການແກ້ໄຂ.

12.5 ຢ່າໃຊ້ຊຸດທີ່ລ້າສະໄຫມ.ຢ່າແລກປ່ຽນ reagents ຂອງ batches ທີ່ແຕກຕ່າງກັນ, ຖ້າບໍ່ດັ່ງນັ້ນມັນຈະຫຼຸດລົງຄວາມອ່ອນໄຫວ.

12.6 ເງື່ອນໄຂການເກັບຮັກສາ: ຮັກສາຊຸດ ELISA ຢູ່ທີ່ 2-8 ℃, ຢ່າແຊ່ແຂງ.ປະທັບຕາແຜ່ນ microwell ສ່ວນທີ່ເຫຼືອ, ຫຼີກເວັ້ນການແສງແດດຊື່ໃນລະຫວ່າງການ incubation ທັງຫມົດ.ແນະນໍາໃຫ້ກວມເອົາແຜ່ນ microtiter.

12.7 ການແກ້ໄຂ substrate ຄວນຖືກປະຖິ້ມຖ້າມັນປ່ຽນສີ.ທາດ reagents ອາດຈະຊຸດໂຊມລົງຖ້າຄ່າການດູດຊຶມ (450/630nm) ຂອງມາດຕະຖານສູນແມ່ນຫນ້ອຍກວ່າ 0.5 (A450nm<0.5).

12.8 ປະຕິກິລິຢາສີຕ້ອງການ 15 ນາທີຫຼັງຈາກການເພີ່ມຂອງການແກ້ໄຂ substrate;ທ່ານສາມາດຍືດເວລາ incubation ເປັນ 20min ຫຼືຫຼາຍກວ່ານັ້ນຖ້າຫາກວ່າສີແມ່ນອ່ອນເກີນໄປທີ່ຈະກໍານົດ., ບໍ່ເຄີຍເກີນ 25min. ໃນທາງກົງກັນຂ້າມ, ຫຍໍ້ເວລາ incubation ຢ່າງຖືກຕ້ອງ.

12.9 ອຸນຫະພູມຕິກິຣິຍາທີ່ດີທີ່ສຸດແມ່ນ 25 ℃.ອຸນຫະພູມທີ່ສູງຂຶ້ນຫຼືຕ່ໍາຈະນໍາໄປສູ່ການປ່ຽນແປງຂອງຄວາມອ່ອນໄຫວແລະຄ່າການດູດຊຶມ.

12.ເງື່ອນໄຂການເກັບຮັກສາແລະໄລຍະເວລາການເກັບຮັກສາ

ສະພາບເກັບຮັກສາ: 2-8 ℃.

ໄລຍະເວລາເກັບຮັກສາ: 12 ເດືອນ.